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1、,4食品卫生微生物检验实验室操作技术要求第一节实验室经管制度一、实验室经管制度1实验室应制定仪器配备经管、使用制度,药品经管、使用制度,玻璃器皿经管,使用制度,并根据安全制度和环境条件的要求,本室工作人员应严格掌握,认真执行。2进入实验室必须穿工作服,进入无菌室换无菌衣、帽、鞋,戴好口罩,非实验室人员不得进入实验室,严格执行安全操作规程。3实验室内物品摆放整齐,试剂定期检查并有明晰标签,仪器定期检查、保养、检修严禁在冰箱内存放和加工私人食品。4各种器材应建立请领消耗记录,贵重仪器有使用记录,破损遗失应填写报告;药品、器材、菌种不经批准不得擅自外借和转让,更不得私自拿出,应严格执行菌种保管制度。
2、5禁止在实验室内吸烟、进餐、会客、喧哗,实验室内不得带入私人物品,离开实验室前认真检查水、电、暖气、门窗,对于有毒、有害、易燃、污染、腐蚀的物品和废弃物品应按有关要求执行。6科、室负责人督促本制度严格执行,根据情况给于奖惩,出现问题立即报告,造成病原扩散等责任事故者,应视情节直至追究法律责任。二、仪器配备、经管使用制度1食品微生物实验室应具备下列仪器:培养箱、高压锅、普通冰箱、低温冰箱、厌氧培养设备、显微镜、离心机、超净台、振荡器、普通天平、千分之一天平、烤箱、冷冻干燥设备、匀质器、恒温水浴箱、菌落计数器、生化培养箱,电位pH计、高速离心机。2实验室所使用的仪器、容器应符合规范要求,保证准确可
3、靠,凡计量器具须经计量部门检定合格方能使用。3实验室仪器安放合理,贵重仪器有专人保管,建立仪器档案,并备有操作方法,保养、维修、说明书及使用登记本,做到经常维护、保养和检查,精密仪器不得随意移动,若有损坏需要修理时,不得私自拆动、应写出报告、通知经管人员,经科室负责人同意填报修理申请、送仪器维修部门。4各种仪器(冰箱、温箱除外),使用完毕后要立即切断电源,旋钮复原归位,待仔细检查后,方可离去。5一切仪器设备未经设备经管人员同意,不得外借,使用后按登记本的内容进行登记。6仪器设备应保持清洁,一般应有仪器套罩。7使用仪器时,应严格按操作规程进行,对违反操作规程的因经管不善致使仪器械损坏,要追究当事
4、者责任。三、药品经管、使用制度1依据本室检测任务,制定各种药品试剂采购计划,写清品名、单位、数量、纯度、包装规格,出厂日期等,领回后建立帐目,专人经管,每半年做出消耗表,并清点剩余药品。2药品试剂陈列整齐,放置有序、避光、防潮、通风干燥,瓶签完整,剧毒药品加锁存放、易燃、挥发、腐蚀品种单独贮存。3领用药品试剂,需填写请领单、由使用人和室负责人签字,任何人无权私自出借或馈送药品试剂,本单位科、室间或外单位互借时需经科室负责人签字。4称取药品试剂应按操作规范进行,用后盖好,必要时可封口或黑纸包裹,不使用过期或变质药品。四、玻璃器皿经管、使用制度1根据测试工程的要求,申报玻璃仪器的采购计划、详细注明
5、规格、产地、数量、要求,硬质中性玻璃仪器应经计量验证合格。2大型器皿建立帐目,每年清查一次,一般低值易耗器皿损坏后随时填写损耗登记清单。3玻璃器皿使用前应除去污垢,并用清洁液或2%稀盐酸溶液浸泡24h后,用清水冲洗干净备用。器皿使用后随时清洗,染菌后应严格高压灭菌,不得乱弃乱扔。五、安全制度1进入实验室工作衣、帽、鞋必须穿戴整齐。2在进行高压、干烤、消毒等工作时,工作人员不得擅自离现场,认真观察温度、时间,蒸馏易挥发、易燃液体时,不准直接加热,应置水浴锅上进行,实验过程中如产生毒气时应在避毒柜内操作。3严禁用口直接吸取药品和菌液,按无菌操作进行,如发生菌液,病原体溅出容器外时,应立即用有效消毒
6、剂进行彻底消毒,安全处理后方有离开现场。4工作完毕,两手用清水肥皂洗净,必要时可用新洁尔灭、过氧乙酸泡手,然后用水冲洗,工作服应经常清洗,保持整洁,必要时高压消毒。5实验完毕,即时清理现场和实验用具,对染菌带毒物品,进行消毒灭菌处理。6每日下班,尤其节假日前后认真检查水、暖气、电和正在使用的仪器设备,关好门窗,方可离去。六、环境条件要求1.实验室内要经常保持清洁卫生,每天上下班应进行清扫整理,桌柜等表面应每天用消毒液擦拭,保持无尘,杜绝污染。2.实验室应井然有序,不得存放实验室外及个人物品、仪器等,实验室用品要摆放合理,并有固定位置。3.随时保持实验室卫生,不得乱扔纸屑等杂物,测试用过的废弃物
7、要倒在固定的箱筒内,并及时处理。4.实验室应具有优良的采光条件和照明设备。5.实验室工作台面应保持水平和无渗漏,墙壁和地面应当光滑和容易清洗。6.实验室布局要合理,一般实验室应有准备间和无菌室,无菌室应有良好的通风条件,如安装空调设备及过滤设备,无菌室内空气测试应基本达到无菌。7.严禁利用实验室作会议室及其他文娱活动和学习场所。第二节实验室技术操作要求一、无菌操作要求食品微生物实验室工作人员,必须有严格的无菌观念,许多实验要求在无菌条件下进行,主要原因:一是防止实验操作中人为污染样品,二是保证工作人员安全,防止检出的致病菌由于操作不当造成个人污染。1.接种细菌时必须穿工作服、戴工作帽。2.进行
8、接种食品样品时,必须穿专用的工作服、帽及拖鞋,应放在无菌室缓冲间,工作前经紫外线消毒后使用。3.接种食品样品时,应在进无菌室前用肥皂洗手,然后用75酒精棉球将手擦干净。4.进行接种所用的吸管,平皿及培养基等必须经消毒灭菌,打开包装未使用完的器皿,不能放置后再使用,金属用具应高压灭菌或用95%酒精点燃烧灼三次后使用。5.从包装中取出吸管时,吸管尖部不能触及外露部位,使用吸管接种于试管或平皿时,吸管尖不得触及试管或平皿边。6.接种样品、转种细菌必须在酒精灯前操作,接种细菌或样品时,吸管从包装中取出后及打开试管塞都要通过火焰消毒。7.接种环和针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝,必要时还要烧到环和针
9、与杆的连接处,接种结核菌和烈性菌的接种环应在沸水中煮沸5min,再经火焰烧灼。8.吸管吸取菌液或样品时,应用相应的橡皮头吸取,不得直接用口吸。二、无菌间使用要求1.无菌间通向外面的窗户应为双层玻璃,并要密封,不得随意打开,并设有与无菌间大小相应的缓冲间及推拉门,另设有0.5-0.7m2的小窗,以备进入无菌间后传递物品。2.无菌间内应保持清洁,工作后用2%-3%煤酚皂溶液消毒,擦拭工作台面,不得存放与实验无关的物品。3.无菌间使用前后应将门关紧,打开紫外灯,如采用室内悬吊紫外灯消毒时,需30W紫外灯,距离在1.0m处,照射时间不少于30min,使用紫外灯,应注意不得直接在紫外线下操作,以免引起损
10、伤,灯管每隔两周需用酒精棉球轻轻擦拭,除去上面灰尘和油垢,以减少紫外线穿透的影响。4.处理和接种食品标本时,进入无菌间操作,不得随意出入,如需要传递物品,可通过小窗传递。5.在无菌间内如需要安装空调时,则应有过滤装置。三、消毒灭菌要求微生物检测用的玻璃器皿、金属用具及培养基、被污染和接种的培养物等,必须经灭菌后方能使用。(一)干热和湿热高压蒸气锅灭菌方法1灭菌前准备(1)所有需要灭菌的物品首先应清洗晾干,玻璃器皿如吸管、平皿用纸包装严密,如用金属筒应将上面通气孔打开。(2)装培养基的三角瓶塞,用纸包好,试管盖好盖,注射器须将管芯抽出,用纱布包好。2装放(1)干热灭菌器:装放物品不可过挤,且不能
11、接触箱的四壁。(2)大型高压蒸气锅:放置灭菌物品分别包扎好,直接放入消毒筒内,物品之间不能过挤。3设备检查(1)检查门的开关是否灵活,橡皮圈有无损坏,是否平整。(2)压力表蒸气排尽时是否停留在零位,关好门和盖,通蒸气或加热后,观察是否漏气,压力表与温度计所标示的状况是否吻合,管道有无堵塞。(3)对有自动电子程序控制装置的灭菌器,使用前应检查规定的程序,是否符合于进行灭菌处理的要求。4灭菌处理(1)干热灭菌法:此法适应于在干热情况下,不损坏、不变质、不蒸发的物品、较常用于玻璃器皿、金属制品、陶瓷制品等的灭菌。a.器械器皿应清洗后再干烤,以防附着在表面的污物炭化。b.灭菌时安放物品不能过挤,不要直
12、接接触底和箱壁,物品之间留有空隙。c.灭菌时将箱门关紧,接上电源,先将排气孔打开约30min,排除灭菌器中的冷空气,温度升至160调节指示灯,维持1.52h。d.灭菌完毕后或温度升温过程中,须在60以下才能打开箱门。(2)手提式高压锅或立式压力蒸气灭菌器的使用应按下列步骤进行:a.手提式高压锅在主体内加入3L清水,立式高压锅加水16L(重复使用时应将水量补足,水变混浊需更换)。b.手提式压力锅将顶盖上的排气管插入消毒桶内壁的方管中(无软管或软管锈蚀破裂的灭菌器不得使用)。c.盖好顶盖拧紧,勿使漏气;置灭菌器于火源上加热,立式压力锅通上电源,并打开顶盖上的排气阀放了冷气(水沸腾后排气10-15m
13、in)。d.关闭排气阀,使蒸气压上升到规定要求,并维持规定时间(按灭菌物品性质与有关情况而定)。e.达到规定时间后,对需干燥的物品,立即打开排气阀排出蒸气,待压力恢复到零时,自然冷却至60后开盖取物,如为液体物品,不要打开排气阀,而应立即将锅去除热源,待自然冷却,压力恢复至零,温度降到60以下再开盖取物,以防突然减压液体剧烈沸腾或容器爆破。(3)卧式压力锅蒸气灭菌器的使用按下列步骤进行:a.关紧锅门,打开进气阀,将蒸气引入夹层进行预热,夹层内冷空气经阻气器自动排出。b.夹层达到预定温度后,打开锅室进气阀,将蒸气引入锅室,锅室内冷空气经锅室阻气器自动排出。c.待锅室达到规定的压力与温度时,调节进
14、气阀,使保持恒定至规定时间。d.自然或人工降温至60再开门取物,不得使用快速排出蒸气法,以防突然降压,液体剧烈沸腾或容器爆破。e.使用自动程序控制式压力蒸气灭菌器,在放好物品关紧门后,应根据物品类别按动相应开关,以便按要求程序自动进行灭菌,灭菌时必须利用附设仪表记录温度与时间以备查,操作要求应严格按照厂家说明书进行。5灭菌温度与时间(1)干热灭菌器灭菌温度160,1.5-2h。(2)压力蒸气灭菌锅灭菌温度与时间见表34-1。表34-1物品灭菌时间,min115121不含糖等耐热物质培养基含糖类等不耐热培养基15-2030染菌培养物器械器皿30(二)间歇灭菌方法1灭菌方法系利用不加压力的蒸气灭菌,某些物质经高压蒸气灭菌容易破坏,可用此法灭菌。(1)将欲灭菌物品置于锅内,盖上顶盖,打开排水口,使器内余水排尽。(2)关闭排水口,打开进气门,根据需要消毒1020min.(3)灭菌完毕关闭进气门,取出物品待冷至室温温度,放入3