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1、1. 目的：建立黄曲霉毒素测定法(一部)检验标准操作规程，并按规程进行检验，保证检验操作规范化。2. 依据： 2.1. 中华人民共和国药典2010年版一部。3. 范围：适用于所有用黄曲霉毒素测定法(一部)测定的供试品。4. 责任：检验员、质量控制科主任、质量管理部经理对本规程负责。5. 正文：5.1. 本法系用高效液相色谱法（附录 D）测定药材、饮片及制剂中的黄曲霉毒素（以黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1和黄曲霉毒素G2总量计），除另有规定外，按下列方法测定。5.1.1. 色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-乙腈-水（40：18：42）为流动相，流速
2、每分钟0.8ml；采用柱后衍生法检测，衍生溶液为0.05%的碘溶液（取碘0.5g，加入甲醇100ml使溶解，用水稀释至1000ml制成），衍生化泵流速每分钟0.3ml，衍生化温度70；以荧光检测器检测，激发波长ex=360nm（或365nm），发射波长em=450nm。两个相邻色谱峰的分离度应大于1.5。5.1.2. 混合对照品溶液的制备：精密量取黄曲霉毒素混合标准品（黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2标示浓度分别为1.0g/ml、0.3g/ml、1.0g/ml、0.3g/ml）0.5ml，置10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，作为储备液。精密量取储备液1ml，置25
3、ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，即得。5.1.3. 供试品溶液的制备：取供试品粉末约15g（过二号筛），精密称定，加入氯化钠3g，置于均质瓶中，精密加入70%甲醇溶液75ml，高速搅拌2分钟（搅拌速度大于11000转/分钟），离心5分钟（离心速度2500转/分钟），精密量取上清液15ml，置50ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45m）滤过，量取续滤液20.0ml，通过免疫亲和柱（AflaT-estP），流速每分钟3ml，用水20ml洗脱，洗脱液弃去，使空气进入柱子，将水挤出柱子，再用适量甲醇洗脱，收集洗脱液，置2ml量瓶中，并用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。5.1.4. 测定法：分别精密量取上述混合对照品溶液5l、10l、15l、20l、25l，注入液相色谱仪，测定峰面积，以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，绘制标准曲线。另精密量取上述供试品溶液2025l，注入液相色谱仪，测定峰面积，从标准曲线上读出供试品中相当于黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2的量，计算，即得。5.2. 【附注】。5.2.1. 本实验应有相应的安全、防护措施，并不得污染环境。5.2.2. 残留有黄曲霉毒素的废液或废渣的玻璃器皿，应置于专用贮存容器（装有10%次氯酸钠溶液）内，浸泡24小时以上，再用清水将玻璃器皿冲洗干净。
