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1、植物激素对愈伤组织的形成及其芽分化的 影响摘要：以烟草叶片为外植体，采用MS基本培养基，在初代培养中，研究了激素的不同组合和浓度配比 对愈伤组织的诱导效果以及对芽分化的影响.在继代培养过程中，研究了 6-BA对烟草叶片形成愈伤组 织和不定芽的效果.实验结果表明，比较6-BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L和6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L对愈伤 组织的形成和芽的形成效果，0.5mg/LNAA的诱导效果较好；在比较6-BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L和 6-BA2.0mg/L+2,4-D0.5mg/L时，0.5mg/L NAA的诱导效果明显比0.5mg/L 2,4-D的诱
2、导效果好；在初 代培养中，6-BA对诱导烟草叶片形成愈伤组织和芽的分化是有利的，而在继代培养中却有抑制作用. 关键词：烟草、愈伤组织、不定芽、6-BA、NAA、2,4-D烟草作为植物组织培养的“模式植物”之一，在植物组织培养中占据着重要的地位,是研究 细胞脱分化和再分化的理想材料.再加上愈伤组织自身的特点一一细胞全能性、生长速度快、 体积小、细胞壁薄和少角质层等，亦使其成为很好的研究材料1因而学者们多以植物激素 对愈伤组织的影响进行研究.但由于不同的植物激素组合和水平对愈伤组织的形成有不同的 影响，因此本实验通过添加不同种类和浓度的植物激素，以及将愈伤组织在不同条件下进行 继代培养，研究激素的
3、不同组合和浓度配比对愈伤组织的诱导效果以及对芽分化的影响.研 究在继代培养过程中6-BA对烟草叶片形成愈伤组织和不定芽的效果.1材料和方法1.1材料烟草叶片（Nicotianatabacum L.）（由老师统一提供）1.2培养基的配置配置MS培养基母液，再进行MS培养基的配置，附加的植物激素按不同的组合和浓度（单 位为mg/L）配比，见表1。共分为4组，并进行121 ，0.1MPa灭菌表1培养基的类型激素组合6-BANAA2,4-DA组2.00.20B组2.00.50C组2.000.5D组000.51.3外植体的消毒将烟草在75%乙醇溶液中浸泡30s，无菌水冲洗1次。然后在10%NaClO溶液
4、中消毒20min, 消毒后用无菌水冲洗4次.1.4愈伤组织的诱导及继代取消毒后的烟草叶片，切成IcmXlcm大小的小块，将切好的小块叶面朝上分别接种在A 组、B组、C组培养基上进行初代培养，每个培养基接种4片外植体.待C组的愈伤组织长到 黄豆粒大小，切取愈伤组织块分别转接至C组和D组培养基进行继代培养.2结果与分析图1A组愈伤组织的生长情况图2 B组愈伤组织生长情况图3 C组愈伤组织的情况表2愈伤组织生长情况培养基类型A组B组C组颜色绿色偏黄绿色略褐色生长速度+愈伤组织体积大小+分化程度+（注：+表示有，+越多表示效果越强烈；）2.1激素对愈伤组织形成的影响曾有研究表明：6-BA对芽器官形成有
5、强烈的促进作用，但附加生长素类激素后，则抵 消6-BA对芽的形成，而明显地促进愈伤组织的形成.本文以0.2mg/gNAA、0.5mg/gNAA和 0.5mg/g 2,4-D对诱导烟草叶片形成愈伤组织的效果作比较.三组的烟草叶片均可见到切口附近有愈伤组织产生.相同的激素组合而生长素的浓度不 同对诱导烟草形成愈伤组织的效果也不一样.0.2mg/gNAAW A组）和0.5mg/gNAA（即B组）都 能形成大量的愈伤组织，但是0.5mg/gNAA（即B组）诱导形成的愈伤组织颜色更绿，生长速 度更快，分化程度更高，形成的愈伤组织体积更大.0.5mg/gNAA（即B组）和0.5mg/g 2,4-D （即C
6、组）对烟草叶片切块愈伤组织的产生都有 诱导作用，但效果并不相同，前者产生的愈伤组织较多，体积较大，且颜色为绿色，生长速 度较快；而后者形成的愈伤组织一般较少，边缘略呈褐色，生长速度较慢.研究表明：在所 试的各种组合中，以0.5mg/ L NAA的诱导效果最好，可以持续得到未分化的良好愈伤组织.图4 A组的芽分化情况图5 B组的芽分化情况图6 C组的芽分化情况表3激素在初代培养中对芽分化的影响培养基类型A组B组C组出芽率（%）1001000出芽情况+-出芽的快慢+-2.2激素初代培养中对芽分化的影响2.2.1不同浓度的NAA与6-BA配比对不定芽生长的影响根据表 3 比较 A 组(6-BA2.0
7、mg/L+NAA0.2mg/L)和 B 组(6-BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L)，可 见两组出芽率高、出芽情况良好.但芽点出现的快慢却有差异，添加0.5 mg/L NAA的愈伤组 织较早出现芽点.同时，附加了 0.5mg/LNAA的培养基上出芽情况较附加0.2mg/LNAA的好. 由此可以得出：在生长素类激素浓度低(0. 030.5mg/L)时芽分化情况良好.这与许智宏等 发现“烟草叶片组织在加有2mg/L 6-BA(或KT)或再加有低浓度(0. 030. 5m/L)生长素的 MS培养基上极易形成芽2这一结论相符合.2.2.2不同种生长素类对不定芽生长的影响由表 3 比较 B 组(6
8、-BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L)和 C 组(6-BA2.0mg/L+2,4-D0.5mg/L),可 知添加2,4-D的培养基不分化不定芽，说明2,4-D对芽器官的分化起抑制作用.由实验结果 可以看出，在植物激素诱导芽分化中，激素的配比是很重要的，不同的激素配比对外植体 材料芽分化影响很大.图7左为C组转接到D组的继代培养，右图为C组转接到C组的继代培养表4继代培养愈伤组织和芽形成的情况继代培养类型C组转接到D组C组转接到C组愈伤组织颜色黄绿色略褐色愈伤组织生长速度+芽数量+-2.3继代培养中激素对芽形成的影响在表 4 可知，从 C 组(6-BA2.0mg/L+2,4-D0.5mg/
9、L)转移到 D 组(2,4-D0.5mg/L)进行继 代培养诱导愈伤组织和形成芽的效果较好，其诱导的愈伤组织颜色为黄绿色，且生长速度快， 芽数量多且健壮.而从C组(6-BA2.0mg/L+2,4-D0.5mg/L)转移到C组 (6-BA2.0mg/L+2,4-D0.5mg/L)诱导形成的愈伤组织出现轻微的褐变，愈伤组织生长速度较 之前者慢，且不能分化出芽.出现褐变的可能原因：生长调节物质是影响褐变的主要原因， 6-苄氨基腺嘌吟或者激动素不仅促进分类化合物的合成，而且刺激多酚氧化酶的活性，增加 褐变.因此，在C组转移到C组进行继代培养中，6-BA的一直存在增加了愈伤组织的褐变.许智宏等研究表明,
10、在加有6-BA的MS培养基中培养烟草叶片组织，培养56d后转移出的 叶片组织即可见芽的形成，但与一直在加有6-BA的培养基上培养的叶片组织相比较，形成的 芽的数量要少.在本实验中，C组转移到C组的继代培养中一直附加了 6-BA,故诱导的愈伤 组织和芽形成的效果不好，这与许智宏等的研究结果是一致的.实验结果可得出结论:诱导愈 伤组织和芽的分化，并不需要植物激素持续的作用.3结论3.1激素对愈伤组织形成的影响从本实验可知，相同的激素组合而生长素的浓度不同对诱导烟草形成愈伤组织的效果不同. 比较 6-BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L 和 6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L 对愈伤组
11、织的形成效果， 0.5mg/LNAA的诱导效果较好.而不同的激素组合对烟草愈伤组织的诱导效果也不相同，比较 6-BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L 和 MS+6-BA2.0mg/L+2,4-D0.5mg/L 时，0.5mg/L NAA 的诱导效果好. 所以在诱导烟草叶片形成愈伤组织时，选择正确的激素搭配和合适的浓度很重要.3.2激素初代培养中对芽分化的影响从本实验可知，不同浓度的NAA与6-BA配比对不定芽生长的影响不同.比较 6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L和6-BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L对烟草愈伤组织形成不定芽的效果， 两组诱导出芽效果都良好.但后者的愈伤组
12、织较早出现芽点且相比之下较前者好.而添加了 2,4-D的培养基不分化不定芽，证明了 2,4-D对芽器官的分化起抑制作用.所以想要从烟草 愈伤组织中获得较好的不定芽，要慎重添加2,4-D且添加合适的生长素(NAA)浓度.3.3 继代培养中激素对芽形成的影响从本实验得出，6-BA的一直存在增加了愈伤组织的褐变，而且诱导的愈伤组织和芽形成的 效果不好.笔者认为的可能原因是烟草叶片发生了驯化现象，继代培养中烟草叶片细胞已经 积累了较多生长物质，会逐渐较少对外缘生长物质的需要3继代培养中一直供给6-BA,超过 了细胞应该接受的量，致使6-BA对愈伤组织和芽的形成有抑制作用.参考文献：1刘卫群，刘巧真，石永春，王永亮.烟草K326叶片愈伤组织诱导及继代的初步 研究.安徽农业科学.2006,34(2):263,266.2许智宏，王熊，刘桂云.烟草叶组织培养中器官形成的研究J.植物生理学报，1978,4(2):177182.3潘瑞炽，施和平,李玲,王小菁.植物细胞工程.广东高等教育出版社，2008.
