本文格式为Word版，下载可任意编辑赤霉素对α 测验 16 赤霉素对 α - 淀粉酶的诱导形成 一、原理 种子萌发过程中贮藏物质的鼓动，需要在一系列酶的催化作用下才能举行这些酶有的已经存在于枯燥种子中，有的需要在种子吸水后重新合成种子萌发过程中淀粉的分解主要是在淀粉酶的催化下完成的淀粉酶在植物中存在多种形式，包括 α - 淀粉酶、 β - 淀粉酶等 β- 淀粉酶已经存在于枯燥种子中，而 α - 淀粉酶不存在或很少存在于枯燥种子中，需要在种子吸水后重新合成测验证明，启动 α - 淀粉酶合成的化学信使是赤霉素萌发的大麦种子的胚产生赤霉素分散到胚乳的糊粉层中，刺激糊粉层细胞内 α - 淀粉酶的合成合成的淀粉酶进入胚乳，将胚乳内贮藏的淀粉水解成恢复糖因此，没有胚释放赤霉素的活动， α - 淀粉酶就不能合成外加的赤霉素可以代替胚的释放作用，从而诱导 α - 淀粉酶的合成这个极其专一的回响被用来作为赤霉素的生物鉴定法在确定范围内，由去胚的吸胀大麦粒所产生的恢复糖量，与外加赤霉素浓度的对数成正比根据淀粉可与 I 2 -KI 显蓝色，而淀粉分解的产物恢复糖不能与 I 2 -KI 显色的原理，可以定性和定量地分析 α - 淀粉酶的活性。
二、测验材料、试剂与仪器设备 （一）测验材料 大麦（或小麦）种子 （二）试剂 1. 1 ％次氯酸钠溶液 2. 0.1 ％淀粉溶液：取 1 g 淀粉和 8.16 g KH 2 PO 4 ，用蒸馏水配制成 1000 mL 溶液 3. 2 × 10 -5 mol/L 赤霉素溶液：称取 GA 3 6.8 mg 放入烧杯中，加少量 95 ％酒精使其溶解，移入 1000 mL 容量瓶中，加水定容至刻度然后再稀释成 2 × 10 -6 mol/L 、 2 × 10 -7 mol/L 和 2 × 10 -8 mol/L 三种浓度的赤霉素溶液 4. 10 -3 mol/L 醋酸缓冲液（ pH4.8 ）：取 2 mL 0.2 mol/L 的醋酸 (11.55 mL 冰醋酸稀释至 1000 mL) 、 3 mL 0.2 mol/L 的醋酸钠 (16.4 g 无水醋酸钠配成 1000 mL) 和 1 g 链霉素，定容至 1000 mL ，每 mL 缓冲液中含链霉素 1 mg 5. I 2 -KI 溶液：取 0.6 g KI 和 0.06 g I 2 溶于 1000 mL 0.05 mol/L 的 HCl 中。
( 三 ) 仪器设备 分光光度计，恒温振荡器，水浴锅， 2mL 移液管 1 支， 50mL 烧杯 2 只，试管 6 支，青霉素小瓶 6 个，镊子 1 把，刀片 三、测验步骤 1. 取样 选取大小一致、完好的大麦或小麦种子 50 粒，用刀片将每粒种子横切成有胚和无胚的半粒，分装于 2 个烧杯中 2. 外观消毒 向 2 个烧杯中参与 1 ％次氯酸钠溶液，以浸没种子为度消毒 15 min 后，用无菌水冲洗 3 次，备用 3. 处理浓度 将 6 只青霉素小瓶编号后，按表 40 – 1 参与溶液和材料溶液混匀后， 1 ～ 6 号小瓶中赤霉素的最终浓度分别为： 0 、 0 、 2 × 10 -5 、 2 × 10 -6 、 2 × 10 -7 和 2 × 10 -8 mol/L 将青霉素小瓶置于恒温振荡器中于 25 ℃下振荡培养岳阳家政24 h 表 40-1 处理浓度及方法 青霉素小瓶编号 1 2 3 4 赤霉素溶液 浓度（ mol/L ） 0 0 2 × 10 -5 2 × 10 -6 mL 1 1 1 1 醋酸缓冲液 (mL) 1 1 1 1 测验材料 10 个无胚半粒 10 个有胚半粒 10 个无胚半粒 10 个无胚半粒 5 6 2 × 10 -7 2 × 10 -8 1 1 1 1 10 个无胚半粒 10 个无胚半粒 4. 淀粉酶活力分析 培养完毕后，从每个小瓶中吸取 0.1 mL 溶液，分别加到事先盛有 1.9 mL 0.1 ％淀粉溶液的试管中排毒养颜胶囊，摇匀，在 30 ℃恒温水浴锅中保温 5 min 后，用滴管各取出 1 滴回响液于白瓷板的 6 个穴中，滴加 1 滴 I 2 -KI ，查看显色处境，对比各穴中颜色的差异。
若有显色差异，那么取出试管各加 I 2 -KI 溶液 2 mL 和蒸馏水 5 mL ，充分摇匀，于分光光度计上在 580 nm 波长下，以蒸馏水作空白对照，测定各试管回响液的吸光值 A ，对比 A 值的差异若用白瓷板显色时差异尚不明显，那么持续保温回响，直至在白瓷板上有显色差异为止以 A 值从标准曲线上查得溶液中淀粉的含量，以被分解的淀粉含量衡量淀粉酶的活性标准曲线可用不同浓度 (0 ～ 7μg/mL) 淀粉溶液与 I 2 -KI 显色回响后所测得的吸光值绘制 四、结果计算 绘制赤霉素浓度与淀粉酶活性关系曲线，淀粉酶活性以被水解淀粉的含量表示第 1 瓶为淀粉的原始量 (X) ，第 2 瓶为带胚半粒种子回响后淀粉的剩余量 (Y) ，第 3 ～ 6 瓶为无胚半粒种子参与不同浓度赤霉素溶液回响后淀粉的剩余量 (Y) 被水解淀粉的含量 ( ％ )=[(X-Y) ／ X] × 100 [ 斟酌题 ] （ 1 ）测验中为何要用 1 ％次氯酸钠溶液处理小麦种子 ? 为何要在醋酸缓冲液中参与链霉素 ? （ 2 ）本测验为何要将小麦种子分成有胚和无胚的半粒 ? 为何 1 号和 2 号怎么减肚子瓶中都没有参与赤霉素溶液，但回响完后两者溶液的吸光值却不同 ? — 4 —。