本文格式为Word版，下载可任意编辑细胞复苏及细胞鉴别与计数(DOC) 细胞生物学测验报告 细胞复苏及细胞鉴别与计数 姓名： 学号： 班级： 专业： 同组成员： Part1、细胞复苏 一、测验原理 细胞复苏是以确定的复温速率将冻存的培养物恢复到常温的过程不管是微生物、动物细胞、植物细胞还是体外培养的器官都可以举行冻存，并在适当条件下复苏 复苏细胞原那么：快溶防止在溶解过程中已融解水渗透入细胞导致的二次结晶对细胞形成损害使培养物能快速通过对细胞有损害的－5～0℃摄氏度区域，细胞仍能生长，活力受损不大。
二、测验目的 掌管细胞复苏的根本方法 三、测验器材 （1）仪器 CO2培养箱，显微镜、倒置显微镜，超净台 （2）材料 培养瓶，试管，移液管，废液缸，75%酒精棉球，酒精灯，冻存的Hela人宫颈癌细胞，滴管 （3）试剂 完全培养基（DMEM），小牛血清，双抗 四、测验步骤 1、打定一个茶缸或1000ml的烧坏，内装2/3杯40℃的温水 2、从液氮中取出冻存管、急速置于温水中并搅动使冻存管中的冻存物在1分钟内溶解 3、将冻存管放入离心管中800rpm离心10分钟，取出冻存管拿入超净台中，75%酒精消毒管口，开启冻存管，弃上清 4、沉淀加1ml完全培养基吹打细胞使之平匀，将细胞转移至25ml培养瓶中，补加3ml崭新培养基于明净培养瓶中培养 5、另取90微升细胞悬液于1.5ml离心管中，再参与10微升0.4%台盼蓝染色,取80μl细胞液镜下查看活力 6、再向上述培养瓶中参与4ml10%含FCS及双抗的DMEM培养基，轻轻混匀，显微镜下查看盖上瓶盖, 去倒置显微镜上查看细胞形态做好标记。
将瓶盖适度拧紧后再稍回转，以利于CO2气体的进入，将培养瓶放回CO2培养箱 7、将用过的试剂仪器等摆回原处，将超净台清洁明净，关闭照明灯及抽风机 8、测验后数小时后去查看细胞生长处境，并拍摄照片 五、测验结果 传代后在显微镜下可看到细胞呈悬浮状态，全部为单个的分散的细胞复苏后大片面细胞生长状态良好，通明度大，细胞内颗粒少，没有空泡,细胞形态完整也存在少数颜色较暗的死细胞，无立体感，细胞通透性差，有颗粒状物质 我们5小后对复苏后的人宫颈癌Hela细胞举行拍照，可查看到细胞复苏效果较好，多数细胞处于开头贴壁状态，细胞呈现扁平或梭型，通明度较好仍有少数细胞成悬浮状态，未贴壁 （冻存的人宫颈癌Hela细胞复苏 倒置显微镜20×） Part2、细胞的计数与死细胞的鉴别 一、测验原理 细胞计数方法：血球计数板 血球计数板：由一块长约7.5cm，宽3.5cm的厚玻璃制成计数室的边长为1mm，中间平台下陷0.1mm，盖上盖片后计数室的容积为 0.1mm3所以，可根据在显微镜下查看到的细胞数目，换算成单位体积中细胞的数量。
细胞计数：细胞压格计上线不计下，计左不计右，如有少量两个以上细胞按一个细胞计数，如超过10%说明消化不充分 通常认为细胞膜流失完整性,细胞即可被认为已经死亡.台盼蓝(Trypan Blue)是检测细胞膜完整性最常用的生物染色试剂.健康的正常细胞能够排斥台盼蓝,而死亡的细胞,膜的完整性流失,通透性增加,细胞可被台盼蓝染成蓝色.依据此原理,细胞经台盼蓝染色后,可通过显微镜,直接镜下计数或拍照后计数,实现对细胞存活率对比精确的定量分析. 二、测验目的 1、掌管用血球计数板举行细胞计数的方法 2、学习死活细胞的鉴别方法 三、测验器材 （1）仪器 CO2培养箱，显微镜、倒置显微镜，超净台 （2）材料 培养瓶，试管，移液管，废液缸，75%酒精棉球，酒精灯，冻存的Hela人宫颈 癌细胞，滴管、血球计数板 （3）试剂 完全培养基（DMEM），小牛血清，双抗，台盼蓝染料 四、测验步骤 1、检查记数板：在正式计数前，先用显微镜检查记数板的计数室，看其是否沾有杂质或干燥的菌体若有污物，那么需作以下几步清洗： （1）、擦洗 用药棉蘸取95%酒精，轻轻擦洗计数板的计数室。
（2）、冲洗 用蒸馏水冲洗计数板，并用毛边纸吸干其上的水分 留神：勿用内火焰来烤干，结果用擦镜纸揩明净 2、镜检：镜检清洗后的计数板，直至计数室无污物时，才可用于细胞的计数 3、加样：先将盖玻片安放在计数室上面，然后摇匀样品取悬液，从盖玻片边缘滴加细胞悬液，连续2~3次，直至弥漫计数板和盖玻片间的空隙 4、计数： 将加好样品的记数板置于显微镜载物台的中央，然后按以下步骤操作： （1）找计数室：先在低倍显微镜下探索计数板上的大方格网位置探索时显微镜的光圈要适当缩小，使视野偏暗然后顺着大方格线，移动计数板，使计数室位于视野中间 （2）转高倍镜：转至高倍镜后，适当调理光度，使细胞和计数室线条均明显为止然后将计数室一角的中格移至视野中 （3）计数：计算计数板的四角大格内的细胞数，压线者只计算左侧和上方的，右和下的不计算在内 5、清洗：计数完毕后，记数板先用95%酒精轻轻擦洗，再用蒸馏水淋洗，然后吸干，结果用擦镜纸揩明净 五、测验结果 我们共取了16个计数室，体积均为0.1mm得到的细胞数量数据如下表所示 第一组细胞计数结果 计数室 1 2 3 4 5 6 7 8 细胞总数/个 254 335 188 175 194 287 156 214 死细胞数/个 24 31 18 22 21 24 17 19 3 — 6 —。