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1、如何选用特殊细胞系培养基?培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在MEM中培养的细胞，很可能在DMEM或M199中同样很容易 生长。总之，首选MEM做粘附细胞培养、RPMT-1640做悬浮细胞培养是一个好的开始，各种冃的无血清 培养垠好首选AIM V （12005）培养基（SFM）。L-谷氨酰胺在细胞培养中匝要吗？它在溶液中不稳定吗？L谷氨酰胺在细胞培养时是匝要的。脱抻氨基后，L谷氨醜胺可作为培养细胞的能量來源、参与蛋白质的 合成和核酸代谢。L-谷氨酰胺在溶液中经过一段时间后会降解，但楚确切的降解率一岚没有最终定论。L- 谷氨酰胺的降解导致氨的形成，而氨对于一些细胞具有毒性。GlutaMAX-I
2、是什么？培养细胞如何利用GlutaMAX-I?这个二肽有多稳定？GlutaMAX-I二肽是一个L-谷氨酰胺的衍生物，其不稳定的alpha-氨基用L-丙氨酸來保护。一种肽輛逐渐 裂解二肽，释放L-谷氨酰胺供利用。GlutaMAX-I二肽非常稳定,即使在121磅灭菌20分钟，GlutaMAX-I二肽溶液有最小的降解,如果在相 同条件下，L谷氨醜胺几乎完全降解。什么培养基中可以省去加酚红？酚红在培养基中被用來作为PH值的指示剂：中性时为红色，酸性时为黄色，碱性时为紫色。硏究表明， 酚红可以模拟固酹类激素的作用，（特别是雌激素）。为避免固醉类反应，培养细胞，尤其是哺乳类细胞时, 用不加酚红的培养基。山
3、于酚红干扰检测，一些研究人员在做流式细胞检测时，不使用加有酚红的培养基。酚红在培养基中被用来作为PH值的指示剂:中性时为红色,酸性时为黄色,碱性时为紫色。研究表明, 酚红可以模拟固酹类激索的作用，（特别是雌激索九为避免I古I醉类反应，培养细胞，尤其是哺乳类细胞时, 用不加酚红的培养基。山于酚红干扰检测，一些硏究人员在做流式细胞检测时，不使用加有酚红的培养基。如何用台盼兰计数活细胞？用无血清培养基把细胞悬液稀释到2002000个/亳升，在0.1亳升的细胞悬液中加入0.1亳升的0.4%的台 盼兰溶液。轻轻混匀，数分钟后，用血球计数板计数细胞。活细胞排斥台盼兰，因而染成蓝色的细胞是死 细胞。如何消除
4、纽织培养的污染？当朿要的培养污染时，硏究者可能试图消除或控制污染。冇先，确定汚染物是细菌、貞菌、支原体或酥母, 把污染细胞与其它细胞系隔离开，用实验室消毒剂消毒培养器川L和超净台，检查HEPA过滤器。高浓度的抗生素和抗痔菌索训能对一些细胞系有毒性，因闻，做剂戢反应实验确定抗生索和抗零菌索产生 毒性的剂量水平。这点在使用抗生索如两性霍索B和抗霍菌索如泰乐菌索时尤其頂要。下面是推荐的确定 毒性水平和消除培养污染的实验步骤。1. 在无抗生索的培养基中消化、计数和稀释细胞，稀释到常规细胞传代的浓度。2. 分散细胞悬液到多孔培养板中，或几个小培养瓶中。在一个浓度梯度范围内，把选择抗生索加入到每一 个孔中
5、。例如,两性霉素B推荐下列浓度,0.25, 0.50, 1.0, 2.0, 4.0,8.0 mg/ml.3. 毎天观测细胞毒性指标，如脱落，出现空泡，汇合度下降和变圆。4确定抗生素毒性水平后，使用低于毒性浓度23倍浓度的抗生素的培养液培养细胞23代。5. 在无抗生索的培养基中培养细胞一代。6. 重复步骤4。7. 在无抗生索的培养基中培养46代，确定污染是否以已被消除。培养基中丙酮酸钠的作用是什么？丙爾酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源，尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源，但是，如果没有葡萄糖 的话，细胞也可以代谢丙酮酸钠。目录上说,Hanks平衡盐溶液(HBS)要在空气中使用,不需要CO2培养箱。
6、原因是什么? Hanks平衡盐溶 液(HBS)和Earles平衡盐溶液(EBS)有什么本质的功能差别？HBS和EBS的主要差别在于碳酸氢钠的水平，在Eagles (2.2g/L)中比在Hanks (0.35g/L)中高。碳酸氢钠需 用高水平的CO2平衡，以维持溶液的PH值。Eagles液在空气水平的CO2中，溶液会变碱，Hanks液在 CO2培养箱中会变酸。如果希望在CO2培养箱中保存纽织，需要用Eagles液,。如果仅仅是清洗将要在细 胞培养基中储存的组织，用Hanks液就可以了。二价离子抑制胰蛋白酶活性吗？使用胰蛋白酹时加入EDTA的H的是什么？二价离子的确抑制胰蛋白嗨活性。EDTA用來螯
7、合游离的镁离子和钙离子，以便保持抑制丿I夷蛋白嗨的活性。 建议胰蛋白酶处理细胞前，用EDTA清洗细胞，以消除來自培养基中所有的二价离子。我试用SF900 II时，细胞生长良好，但是我的蛋白产物不如使用Graces液和10%胎牛血清时效果好。如果目的蛋白是一个后期蛋口，它将与蛋白爾一起表达，这些蛋白悔将会作用于目的蛋口。在加有血清的 培养基中，这些蛋口酶将作用到血清中的蛋白，从而使H的蛋口产品保持完好。在无血清配方中，蛋白酶 作用的唯一底物是你的日的蛋白。为了避免这一问题，加入一些蛋白嗨抑制剂或加入少量的血清(少于1 %), 让血清给蛋白酹提供作用底物。20 C下配制的缓冲液，在较高或较低的温度
8、下PH值会改变吗？对于普通使用的缓冲液，PH值随温度变化而变化。下表列出温度改变I(rc时，PH值的变化情况： 例如 20C下配制 PH7.4 Tris 缓冲液,40C时 PH 值为 7.4-(2x0.310)=6.78缓冲系统 pKi/20C DellapKi/IOCMcs 6.15-0.110Ada 6.60 -0.110Pipes 6.80 -0.085Aces 6.90 -0.200Bes 7.15-0.160Mops 7.20 -0.013Tcs 7.50 -0.200Hepes 7.55 -0.140Tricine 8.15-0.210Tris 8.30 -0.310Bicinc 8.35 -0.180Glycyl glycine &40 -0.280室温下(25 )配制的Tris-HCl溶液，在37C使用时PH值是多少？缓冲液的PH值随温度变化而变化。下表列出了 50mM Tris-HC溶液在4C, 25V, 37C时，不同的PH值。4C 25C 37C8.1 7.5 7.262 7.6 7.363 7.7 7.464 7.8 7.565 7.9 7.68.6 8.0 7.767 87.868 8.2 7.969 8.3 8.0
