细菌的染色和细菌细胞构细菌的染色和细菌细胞构造的观察造的观察•目的要求目的要求•染色原理染色原理•实验材料实验材料•实验程序实验程序•思考题思考题 目的要求目的要求•无菌操作无菌操作•微生物涂片微生物涂片•掌握细菌的芽孢染色（枯草杆菌）掌握细菌的芽孢染色（枯草杆菌）•熟炼显微镜使用熟炼显微镜使用 实验材料实验材料•涂片染色用的细菌培养物涂片染色用的细菌培养物 –芽孢染色（枯草杆菌）芽孢染色（枯草杆菌）24-48h的斜面培养物的斜面培养物•5%孔雀绿水溶液、孔雀绿水溶液、0.5%番红番红水水溶液溶液 •显微镜、镜头油、擦镜纸、吸水纸等显微镜、镜头油、擦镜纸、吸水纸等 细菌的芽孢染色原理细菌的芽孢染色原理•细菌的芽孢具有厚而致密的壁，透性低，不易着色，细菌的芽孢具有厚而致密的壁，透性低，不易着色，若用一般染色法只能使菌体着色而芽孢不着色（芽孢若用一般染色法只能使菌体着色而芽孢不着色（芽孢呈无色透明状）芽孢染色法就是根据芽孢既难以染呈无色透明状）芽孢染色法就是根据芽孢既难以染色而一旦染上色后又难以脱色这一特点而设计的所色而一旦染上色后又难以脱色这一特点而设计的所有的芽孢染色法都基于同一个原则：除了用有的芽孢染色法都基于同一个原则：除了用着色力强着色力强的染料的染料外，还需要外，还需要加热加热，以促进芽孢着色。
当染芽孢，以促进芽孢着色当染芽孢时，菌体也会着色，然后水洗，芽孢染上的颜色难以时，菌体也会着色，然后水洗，芽孢染上的颜色难以渗出，而菌体会脱色然后用对比度强的染料对菌体渗出，而菌体会脱色然后用对比度强的染料对菌体复染复染，使菌体和芽孢呈现出不同的颜色，因而能更明，使菌体和芽孢呈现出不同的颜色，因而能更明显地衬托出芽孢，便于观察显地衬托出芽孢，便于观察•Schaeffer与与Fulton氏染色法氏染色法 ，改良的，改良的Schaeffer和和Fulton氏染色法氏染色法 芽孢染色的方法和步骤芽孢染色的方法和步骤1.涂片、干燥、固定：待涂片晾干后在酒精灯火焰上通过2—3次2.染色：①加染色液：加5%孔雀绿水溶液于涂片处（染料以铺满涂片为度），然后将涂片放在铜板上，用酒精灯火焰加热至染液冒蒸汽时开始计算时间，约维持5-10min加热过程中要随时添加染色液，切勿让标本干涸加热时温度不能太高）②水洗：待玻片冷却后 ，用水轻轻地冲洗，直至流出的水中无染色液为止③复染：用蕃红液染色1-2min3.水洗、晾干或吸干4.镜检：观察：观察：芽孢（菌体）颜色、形状、芽孢（菌体）颜色、形状、着生位置、芽孢囊特征等。
着生位置、芽孢囊特征等 •简约流程简约流程 涂片－－干燥－－固定――5%孔雀绿水溶液，加热至染液冒蒸汽，约维持5min（勿干）――冷却――水洗――番红液染色1-2min――水洗－－晾干或吸干――镜检――记录 •录像演示录像演示 思 考 题思 考 题•芽孢染色法蕃红为什么用水溶液？芽孢染色法蕃红为什么用水溶液？•芽孢染色法为什么使用孔雀绿？芽孢染色法为什么使用孔雀绿？ 实实 验验 2- 2-2 2结结 束束 染色简约流程染色简约流程•荚膜染色荚膜染色– 制片――干燥（空气中晾干或用冷风吹干――复红染色液染色3-5min――水洗――干燥（晾干）――涂苯胺黑（薄层）――风干――镜检――记录 •芽孢染色芽孢染色– 涂片－－干燥－－固定――5%孔雀绿水溶液，加热至染液冒蒸汽，约维持5min（勿干）――冷却――水洗――番红液染色1-2min ――水洗－－晾干或吸干――镜检――记录 。