预防医常用学实验技术原理与方法课程教学大纲课程名称：预防医学常用实验技术原理与方法(The Experimental Technologies of Preventive Medicine : Principles and Methods)课程编码：1322016217课程类别：专业课总学时数：20课内实验时数：0学 分：1开课单位：公共卫生学院环境与职业卫生学教研室适用专业：预防医学适用对象：五年制本科一、课程的性质、类型、目的和任务现代毒理学实验技术原理与方法是为适应预防医学专业学生掌握现代毒理学的知识需 要而设置的一门专业选修课程现代毒理学是一门与生命科学有着广泛联系和相互渗透的基 础应用学科现代毒理学研究方法和实验技术在药理学、营养与食品卫生学、环境卫生与劳 动卫生学、临床医学、职业医学、法医学等领域有着极为广泛的应用现代毒理学实验原理 与方法旨在介绍现代毒理学常用实验技术的基本原理、操作方法、最新进展以及这些实验技 术的具体应用通过本课程的学习，一方面为进一步学习劳动卫生学、环境卫生学、营养与食品卫生学 等预防医学专业课程打下必要的毒理学基础；另一方面，为将来卫生防疫实际工作中毒理学 知识的应用提供基本知识和技能。
二、本课程与其它课程的联系与分工本课程宜从四年级第一学期开始，以确保学生学习本课程具有所需要的现代毒理学专业 知识三、教学内容及教学基本要求［1］表示“了解”；⑵表示“理解”或“熟悉”；⑶表示“掌握”;△表示自学内容；o 表示略讲内容；第一章离体器官的灌流技术离体肺灌流技术仪器装备［3］；灌流液体［3］；通气气体［3］；操作步骤［3］；互理学应用举例［3］；考前须知［2］;第一节离体心脏灌流技术［3］；第一节离体肝脏灌流技术［3］；第三节人胎盘灌流技术［2］；重点：离体心脏灌流技术；离体肝脏灌流技术难点：离体心脏灌流技术；离体肝脏灌流技术教学手段：多媒体教学教学方法：讨论教学法第二章细胞毒理学研究方法第一节细胞培养培养细胞生物学［2］；细胞培养技术［3］；常用几种细胞的培养［3］；第二节培养细胞的生物特征与检测培养细胞的常规检查［3］；细胞染色体分析［2］；培养细胞恶性转化［2］；大鼠气管上皮细 胞转化试验［2］；重点：细胞培养技术与培养细胞的常规检查；难点：细胞培养技术教学手段：多媒体教学教学方法：讨论教学法思考题：L细胞培养技术与考前须知？2 .培养细胞的常规检查方法？第三章细胞凋亡常用的研究方法第一节概述⑴第二节 细胞凋亡的形态学评价倒置显微镜和光学显微镜观察法［3］；荧光显微镜观察法［3］；透射电子显微镜观察［2］； 第四节细胞凋亡时DNA的改变DNA Ladder测定⑵；大分子染色体DNA片段的测定［2］；凋亡细胞DNA含量的流式细胞 仪分析⑴；DNA片段原位标记⑴；调亡细胞断裂核小体DNA的免疫化学测定⑴； 重点：细胞凋亡的形态学观察 难点：细胞凋亡的形态学观察教学手段：多媒体教学教学方法：讨论教学法思考题：1、倒置显微镜、光学显微镜与荧光显微镜观察细胞凋亡的方法与考前须知？ 第四章亚细胞组分的制备与功能检测第一节细胞膜的制备红细胞膜的别离与鉴定［3］；肝细胞膜的别离与鉴定［3］；脑突触体膜的别离制备［2］ 第二节肾小管和小肠上皮细胞刷状缘膜的制备肾小管上皮细胞刷状缘膜的别离与鉴定［2］；小肠上皮细胞刷状缘膜的别离与鉴定［2］； 第三节线粒体的别离制备脑线粒体的别离及鉴定［3］；心脏线粒体的别离制备［3］；肝脏线粒体的别离制备［3］；肾 脏线粒体的别离制备［2］；第四节 微粒体的制备及微粒体酶第的测定微粒体的别离制备［3］；微粒体混合功能氧化酶系活性的测定⑴第五节溶酶体和过氧化物酶体的别离制备原理［2］；仪器与试剂［2］；别离技术［2］；溶酶体纯度测定［1］;重点：细胞膜的别离制备；线粒体的别离制备难点：细胞膜的别离制备；线粒体的别离制备教学手段：多媒体教学教学方法：讨论教学法思考题：1、试述红细胞膜的分了与鉴定方法？2、肝脏线粒体的别离制备方法？第五章蛋白质（酶）的别离与纯化第一节蛋白质（酶）的粗别离细胞破碎和蛋白质（酶）的溶剂提取方法［3］；盐析方法［3］；有机溶剂沉淀方法［3］；第二节蛋白质（酶）的层析纯化吸附层析方法［2］；离子交换层析方法［2］；凝胶过滤层析方法［2］；亲和层析方法［2］； 金属螯合层析方法［2］。
第三节 电泳技术别离纯化蛋白质（酶）醋酸纤维素电泳［3］；聚丙烯酰胺凝胶电泳［3］第四节蛋白质受体功能测定受体放射分析法［3］；基因重组检测系统［3］；第五节蛋白加合物测定血红蛋白加合物的测定［2］；白蛋白加合物的测定［2］；重点：蛋白质（酶）的粗别离；电泳技术别离纯化蛋白质（酶）；蛋白质受体功能测定 难点：蛋白质（酶）的粗别离；电泳技术别离纯化蛋白质（酶）；蛋白质受体功能测定 教学手段：多媒体教学教学方法：讨论教学法思考题：1、细胞破碎和蛋白质（酶）的溶剂提取方法？2、蛋白质（酶）的盐析方法？3、蛋白质（酶）的有机溶剂沉淀方法？4、蛋白质（酶）聚丙烯酰胺凝胶电泳别离方法？5、蛋白质受体功能测定方法？第六章分子毒理学基本技术第一节核酸的印迹杂交核酸杂交的基本原理一核酸的变性和复性［3］；核酸杂交的重要工具一核酸探针［3］；常 用的核酸分子杂交技术［3 ］；第二节蛋白质印迹杂交蛋白质样品的制备［3］； SDS 一聚丙烯酰胺凝胶电泳［3］；蛋白质的电转移［3］；蛋白质的杂 交⑶；第三节聚合酶链式反响参与PCR反响体系的因素及其作用［2 ］； PCR反响温度和循环次数⑶；常用的几种PCR 反响⑶；第四节基因的序列测定双脱氧链末端终止法［3］；化学裂解法［2］；第五节重组DNA技术基因工程的重要工具一酶类［1］;基因工程的重要工具一载体［1］;获得的目的基因［1］;目的基因与载体的连接［1］;重组子导入受体菌［1］;重组子的筛选与鉴定［1］;重组体在宿主 细胞中表达与调控［1］;表达产物一蛋白质的别离与纯化［1］;第六节单细胞凝胶电泳技术检测机理［2］；实验程序及方法［2］；结果评价［2］；第七节荧光原位杂交（FISH）技术基本原理［3］； FISH技术的开展［2］；毒理学研究中应用的FISH技术［3］； FISH技术中的注 意事项［2］；重点：核酸的印迹杂交；蛋白质印迹杂交；聚合酶链式反响；荧光原位杂交（FISH）技 术在毒理学研究中应用；难点：核酸的印迹杂交；蛋白质印迹杂交；聚合酶链式反响；荧光原位杂交（FISH）技 术在毒理学研究中应用；教学手段：多媒体教学教学方法：讨论教学法思考题：1、核酸的印迹杂交方法？2、蛋白质印迹杂交方法？3、聚合酶链式反响步骤？4、荧光原位杂交（FISH）技术在毒理学研究中有哪些应用？第七章基因芯片技术第一节 基因芯片的原理和合成方法基因芯片的原理［3］；基因芯片的离片合成法［2 ］；基因芯片的在片合成法［2］；基因芯片 的结果检测与分析［3］；第二节基因芯片的分类载体材料分类［3］；点样方式分类［3］； NDA各类分类［3］；用途分类［3］；用途分类［2］第三节 基因芯片的广泛应用［2］重点：基因芯片的原理与结果分析；难点：基因芯片的原理与结果分析；教学手段：多媒体教学教学方法：讨论教学法思考题：1、基因芯片的原理？2、基因芯结果的检测与分析？第八章信号传递与细胞通讯第一节 细胞间缝隙连接通讯的检测划痕标记染料示踪技术［3］；显微注射染料示踪技术［3］；代谢合作检测法⑶第二节细胞膜受体的别离与纯化概述⑵；受体溶脱；受体纯化⑵；第三节第二信使系统［1］重点：细胞间缝隙连接通讯的检测；难点：细胞间缝隙连接通讯的检测教学手段：多媒体教学教学方法：讨论教学法思考题：1、细胞间缝隙连接通讯的检测及其方法有哪些？第九章免疫毒理学方法第一节B淋巴细胞功能检测方法空斑形成细胞检测方法［3］；血清溶血素测定⑶第二节T淋巴细胞功能检测方法小鼠外周血T淋巴细胞酸性a醋酸蔡酯酶（ANAE）染色法［3］； T淋巴细胞亚群的检测［3］；T淋巴细胞增殖功能测定［3］；迟发型超敏反响试验［2］；第三节巨噬细胞功能测定巨噬细胞非特异性吞噬功能测定⑵；巨噬细胞Fc受体功能检测⑵；肿瘤坏死因子（TNF） 的测定［2］； 一氧化氮生成的测定［2］第四节中性粒细胞和NK细胞活性测定中性粒细胞吞噬功能的测定［2］； NK细胞活性的测定［2］；第五节细胞因子的测定白细胞介素1（IL-1）的检测⑶；白细胞介素2 （IL-2）的检测⑶第六节过敏反响和自身免疫皮肤致敏试验⑵；小鼠耳肿胀试验⑵；耳淋巴结试验⑵；窝淋巴结实验⑵重点：淋巴细胞功能检测方法；细胞因子的测定难点：淋巴细胞功能检测方法；细胞因子的测定教学手段：多媒体教学教学方法：讨论教学法思考题：1、T、B淋巴细胞功能检测的原理及方法？白细胞介素1（IL.1）的检测方法？第十章行为毒理学方法及毒理学指标的统计与分析第一节动物行为评价方法一般行为毒理学方法［3］；行为致畸学方法［3］；神经科学的开展与行为毒理学［2］第二节人的行为功能评价方法开展概况⑵；研究方法⑵第三节毒理学指标联合作用的统计方法比值法⑶；效应图解法⑶；等概率和曲线法⑶；Logistic图解法⑶第四节 存活寿命表的统计指标存活寿命表的统计指标［2］；计算步骤⑵第五节生殖发育试验的统计指标试验动物与剂量⑴；生殖发育的统计指标⑴；数据处理和结果评价田第六节致突变试验的统计指标概述⑴；实例［1］第七节致癌试验的数学模式例如几项指标⑴；实例［1］;第八节行为毒理学⑵第九节毒理学相关学科的统计分析指标数据类型［3］；体重与器官重量［3］；临床化学［3］；血液学［3］；组织病理学损害的发生率⑶第八节样品与染毒方式的统计问题经食物和空气染毒分析［1］;悬浮颗粒物统计量⑴第九节毒理学良好实验室规范⑵重点：一般行为毒理学方法与行为致畸学方法；毒理学指标联合作用的统计方法难点：一般行为毒理学方法与行为致畸学方法；毒理学指标联合作用的统计方法教学手段：多媒体教学教学方法：讨论教学法思考题：1、动物行为评价的一般行为方法和行为致畸方法有哪些？2、毒理学指标联合作用的统计方法有哪些？四、学时分配表章序课程内容理论 学时实验 学时上机 学时课外 学时习题 学时考核 学时小计第一章离体器官的灌流技术22第二章细胞毒理学研究方法22弟二早细胞凋亡常用的研究方法22第四章亚细胞组分的制备与功能检测22第五章蛋白质（酶）的别离与纯化22第六章分子毒理学基本技术22第七章基因芯片技术22第八章信号传递与细胞通讯22第九章免疫毒理学方法11第十章行为毒理学方法及毒理学指标 的统计与分析11考试22合计18220五、课程考核方法及要求.考核方式：考查；1 .。