本文格式为Word版，下载可任意编辑芸香苷和槲皮素 槐花米中芸香苷提取及槲皮素的分开与检识 [适用对象] 药学专业 [测验学时] 18学时 一、测验目的 学习黄酮类化合物的提取、分开和检识，通过测验要求： （1）通过芸香苷提取与精制，掌管沸水提取黄酮类化合物的原理和操作 （2）掌管由芸香苷水解制取槲皮素的方法 （3）掌管黄酮苷和黄酮苷元的分开 （4）掌管黄酮类化合物的主要性质及黄酮苷、苷元和糖片面的检识方法 二、测验原理 由槐花中提取芸香苷的方法好多，本测验是根据芸香苷在冷水和热水中的溶解度差异的特性举行提取和精制，或根据芸香苷分子中具有酚羟基，显弱酸性，能与碱成盐而增大溶解度，以碱水为溶剂煮沸提取，其提取液加酸酸化后那么芸香苷游离析出 三、仪器设备 单口园底烧瓶，冷凝管，铁架台，烧杯，电炉，烘箱、水浴锅、三角烧瓶，微量抽滤器，布氏漏斗，滤纸，试管，层析槽，石棉网，毛细管等 四、相关学识点 槐花为豆科植物槐Sophora japonica L.的枯燥花及花蕾，主要含 芸香苷（芦丁），含量高达12~20%，水解生成槲皮素、葡萄糖及鼠李糖。
芸香苷（rutoside），分子式C27 H30 O16，分子量610.51，淡黄色针状结晶，mp.177~178℃难溶于冷水（1﹕8000），略溶于热水（1﹕200），溶于热甲醇（1﹕7），冷甲醇（1﹕100），热乙醇（1﹕30），冷乙醇（1﹕650），难溶于乙酸乙酯、丙酮，不溶于苯、氯仿、乙醚、石油醚等，易溶于吡啶及稀碱液中 槲皮素（quercetin），分子式C15 H10 O7，分子量302.23，黄色针状结晶，mp.314℃（分解）溶于热乙醇（1﹕23），冷乙醇（1﹕300），可溶于甲醇、丙酮、乙酸乙酯、冰醋酸、吡啶等，不溶于石油醚、苯、氯仿、乙醚中，几不溶于水 HOO OR OHOOH 五、测验步骤 （一）芸香苷的提取（水提取法） 称取槐花米50克，置1000 ml 烧杯中，加沸水800 ml，加热保持微沸1小时，趁热用棉花过滤，滤渣再加600 ml水煮沸1小时，趁热过滤，合并2次滤液，放置夜，析出大量淡黄色沉淀，抽滤，沉淀用水洗3~4次，抽干置于空气中枯燥即得粗芸香苷，称重计算得率 （二）芸香苷的水解 称取芸香苷粗品2克，尽量研细，投入500 ml圆底烧瓶中，加 2%H2SO4溶液150 ml，接上冷凝管，直火加热煮沸1.5小时，滤取沉淀物（即苷元槲皮素），滤液留存以鉴定糖片面，槲皮素沉淀经水洗涤抽干，自然枯燥，称重并计算水解得率。
（三）芸香苷、槲皮素重结晶 称取芸香苷粗品2克，加甲醇50 ml， 加热溶解，趁热过滤，滤液浓缩一半，放置析晶，过滤滤液适当浓缩后放置，复析出结晶，滤取结晶必要时结晶再用甲醇重结晶一次 取槲皮素全部，加适量95%乙醇，同上法重结晶一次 （四）芸香苷、槲皮素和糖的纸色谱鉴定 1、点样：取新华一号色谱滤纸，规格20 cm20 cm，在滤纸下端约2 cm处用铅笔画一向线，间隔2 cm分别点上以下样品或标准溶液： （1）糖样品溶液 （2）标准葡萄糖溶液 （3）标准鼠李糖溶液 （4）芸香苷样品甲醇溶液 （5）芸香苷标准品溶液 （6） 槲皮素样品甲醇溶液 （7）槲皮素标准品溶液 2、开展剂：正丁醇-醋酸-水（4﹕1﹕5）上层上行开展 3、显色：开展完毕，将滤纸取出，记录溶剂前沿位置待溶剂挥尽后，在（3）与（4）点之间剪开，分别显色 （1）糖的显色：喷苯胺-邻苯二甲酸试剂，在105℃烘10分钟，显棕色斑点计算并对比样品和标准品的Rf值 （2）黄酮化合物的显色： ①可见光下查看色斑，紫外灯下查看荧光斑点 ②经氨气薰后再查看。
③待氨气挥尽后，喷1% AlCl3 甲醇溶液，再查看 ④计算并对比样品与标准品的Rf值 （五）芸香苷和槲皮素性质试验 1、酸性试验：取小试管8支，每4支一组，第一组每管中参与芸香苷1mg，其次组每管中参与槲皮素1mg，每组四管中分别参与稀氨水、5%碳酸氢钠水溶液、5%碳酸钠水溶液、1%氢氧化钠水溶液各2 ml，振摇后查看各管溶解处境溶解的溶液应呈黄色再加浓盐酸数滴酸化，黄色褪去或变浅，并有沉淀析出或产生混浊 2、Molish回响：取试样1 mg置小试管中，加乙醇0.5 ml溶解，加α-萘酚试剂1~2滴，摇匀倾斜试管，沿管壁徐徐注入浓硫酸约0.5 ml静置查看两层溶液的界面变化，展现紫色环者为阳性，表示样品分子中含有糖的布局（糖和苷类均呈阳性回响），对比芸香苷和槲皮素的不同 3、Fehling试验：取试样数mg，溶于0.5 ml热水中，加斐林氏试剂甲、乙等量混合液2 ml，沸水浴上加热，如产生氧化亚铜的暗红色或黄色沉淀表示有恢复糖或其它恢复性物质充分加热作用后滤去沉淀，滤液滴加浓盐酸酸化，在水浴上加热水解，水解液以10% NaOH 中和，再举行斐林氏试验，此时显阳性回响者表示样品为糖苷化合物。
对比芸香苷和槲皮素的不同 4、盐酸-镁粉回响：取芸香苷1 mg，加乙醇2 ml，在水浴上加热溶解，加镁粉约50 mg，滴加数滴浓盐酸，溶液由黄色渐变红色者表示有黄酮类化合物以同法试验槲皮素 如用锌粉代替镁粉，那么芸香苷（3-羟基与糖结合成苷）仍有作用，而槲皮素（黄酮醇类）不呈恢复显色回响因此可识别两者 5、锆-柠檬酸回响：取样品1 mg，加甲醇2 ml，在水浴上加热溶解，再加2%二氯氧锆甲醇溶液3~4滴，凡有3-羟基或5-羟基的黄酮即呈鲜黄色然后加2%柠檬酸甲醇溶液3~4滴，有3-羟基的黄酮黄色不褪对比芸香苷和槲皮素的不同 6、三氯化铝回响：取样品1 mg溶于甲醇中，加1%三氯化铝甲醇溶液2~3滴，黄酮类呈鲜黄色，并有荧光 （六）测验流程 鉴定回响 滤液（弃去） 槐花米50g 2g芸香苷粗品 甲醇重结晶 精制芸香苷 加2%硫酸 ，放冷抽滤 95%乙醇重结晶 槲皮素精制品 六、测验报告要求 应包括原理描述、测验流程、数据记录、解决问题的才能、测验结果、测验效果及建议等 七、斟酌题 1、黄酮类化合物还有哪些提取方法？芸香苷的提取还可用什么方法？ 2、酸水解常用什么酸？为什么用硫酸比用盐酸水解后处理更便当？ 3、本测验中各种色谱的原理是什么？解释化合物布局与Rf值的关系。
4、试议论苷类成分的检识程序 八、测验劳绩评定方法 本门测验课程考核劳绩占课程总劳绩的30％，该测验考核劳绩占测验总劳绩的40％考核分测验预习、测验过程操作、测验报告等三个方面，其劳绩计算为预习测验占20%（包括原理描述、测验流程）、测验过程操作占40％（包括数据记录、解决问题的才能）、测验报告占40％（包括测验结果、测验效果） — 7 —。