项目五植物油中磷脂含量的测定食品分院刘深勇 主要内容n实验目的实验目的n 掌握用油脂中磷脂测定的原理和方法n 学习吸收曲线的制作和结果计算n 进一步熟练掌握分光光度计的使用方法 磷脂的定义 实验原理•植物油脂中的磷脂经灼烧成五氧化二磷，被热盐酸变成磷酸，遇钼酸钠生成磷钼酸钠，用硫酸联氨还原形成钼蓝，在680nm，用分光光度法测定其含量 磷脂测定仪器和器具n 钼蓝比色法 钼蓝比色法n1. 瓷坩埚或石英坩埚；n2. 分光光度计或带塞的50 ml比色管；n3. 移液管：5、10 ml；n4. 电炉、高温炉；n5. 容量瓶：100、500、1000 ml；n6. 表面皿、烧杯、量筒；n7. 恒温水浴锅；n8. 漏斗、坩埚钳、试剂瓶等 磷脂测定的试剂1. 50％氢氧化钾溶液；2. 盐酸、硫酸、氧化锌、滤纸；3. 0.015％硫酸联氨溶液；4. 2.5％钼酸钠稀硫酸溶液：量取140 ml硫酸注入300 ml水中，摇匀，冷却至室温，加入 12.5 g钼酸钠，溶解后加水至500 ml，摇匀，静置24 h备用5. 磷标准溶液：称取无水的磷酸二氢钾0.4391 g溶于1000 ml水中，作为1号液，含磷0.1 mg/ml，吸取1号液10 ml，加水稀释至100 ml，含磷0.01 mg/ml，作为2号液，比色用。
操作步骤1. 绘制标准曲线绘制标准曲线：取4只50 ml比色管，编成1，2，4，8五个号码，按号码顺序分别注入磷标准2号液1，2，4，8 ml，再按顺序分别加水9，8，6，2 ml接着向4只管内各加0.015％硫酸联氨溶液8.0ml；各加钼酸钠稀硫酸溶液2.0 ml，加塞、摇匀去塞，将4只管置于正在沸腾的水浴中加热10 min，取出冷却至室温，用水稀释至50 ml，充分摇匀，静置10 min后，用分光光度计在波长650 nm 下，用1cm液槽，用水调整零点，分别测定吸光度值以吸光度为纵坐标，以磷量（0.01、0.02、0.04、 0.08 mg）为横坐标绘制标准曲线 操作步骤2. 制备被测液 制备被测液：用坩埚称取试样约10 g（准确至0.001 g），加氧化锌0.5 g（氧化锌在灰化中能和磷形成磷酸锌防止磷以氧化物的形式挥发造成损失），先在电炉上加热炭化，然后送入550～600℃的高温炉中灼烧至灰化（白色），灼烧时间约1 h，取出坩埚冷却至室温，用热盐酸（1∶1）10 ml溶解灰分，并加热微沸5 min，将溶解液过滤注入100 ml容量瓶中，用热水冲洗坩埚和滤纸，待滤液冷却至室温后，用50％氢氧化钾溶液中和至出现混浊，缓慢滴加盐酸使氧化锌沉淀全部溶解后，再滴2滴，最后用水稀释至刻度，摇匀。
操作步骤操作步骤3. 比色比色：用移液管吸取被测液10 ml注入50 ml比色管中，加入0.015％硫酸联氨8.0 ml，加2.0 ml钼酸钠稀硫酸溶液，加塞，摇匀去塞，将比色管置于正在沸腾的水浴中加热10 min，取出冷却至室温，用水稀释至50 ml，充分摇匀，静置10 min后，用分光光度计在波长650 nm下，用1cm液槽，用水调整零点，测定吸光度值 结果计算结果计算 根据被测液的吸光值，从标准曲线查得磷量（P），按公式（1）计算磷脂含量：式中：P─标准曲线查得的磷量，mg；V1──样品灰化后稀释的体积，ml；V2──比色时所取的被测液体积，ml；26.31─每毫克磷相当于磷脂的毫克数；W──试样重量，g双试验结果允许差不超过0.04％，求其平均数，即为测定结果测定结果取小数点后第二位 大豆油中磷脂含量在1.1%-3.5% The EndThank you 。