灵芝螺旋藻片免疫调节功能的研究贾福怀 1 邢晓伟 1* 袁媛 1 黄雪敏 1（1. 宁波御坊堂生物科技有限公司，浙江 宁波 315012）【作者简介】贾福怀，男，高级工程师，主要从事中药产品开发方面的研究【通讯作者】邢晓伟，男，助理工程师，主要从事中药产品开发方面的研究摘要：目的 观察灵芝螺旋藻片增强免疫力的功能作用方法 经口给予0.083、0.83、2.5g//kgBW 剂量的灵芝螺旋藻片 30d，测定迟发型变态反应、抗体生成细胞数、半数溶血值和单核—巨噬细胞廓清影响试验结果 灵芝螺旋藻片能提高小鼠的半数溶血值、小鼠抗体生成细胞数，即能增加体液免疫功能，能增强小鼠的迟发型变态反应，及增加细胞免疫功能；能提高小鼠单核—巨噬细胞的碳廓清能力，增强非特异性免疫功能结论 御坊堂牌灵芝螺旋藻片具有免疫力调节功能作用关键词：破壁灵芝孢子粉；螺旋藻；免疫调节Experimental research of Ganoderma lucidum spirulina tablets on immunization FunctionFuhuai Jia1 Xiaowei Xing Yuanyuan Xuemin Huang(Ningbo Yu Fang Tang Biological Science and Technology Co.,Ltd. Ningbo Zhejiang 315012)【Abstract】Objective：To observe the immunemodulation effect of Ganoderma lucidum spirulina tablets in mice．Methods：After administration of Ganoderma lucidum spirulina tablets for 30 days conscutively with the dose of 0.083、0.83、2.5g/kgBW，immunological indexes were measured，which were delayed hypersensitivity，antibody secreting cell，HC50 and Mononuclear Macrophage.Results：the number of antibody-producing cells and the level of serum hemolysin and thephagocytosis of macrophage in abdominal cavity were raised．Proliferation and transformation of spleen lymphocytes in the mice were also increased，delayed anaphylactic reaction was intensified. Conclusion：Ganoderma lucidum spirulina tablets can strengthen the immunofunction of mice．【Key Words】Ganoderma lucidum karst spores ；spirulina ；immunofunction ；前言：灵芝药用在我国已有2000多年的历史，具有益气血、安心神、健脾胃的功效，主虚劳，心悸，失眠，头晕[1]。
古今皆以为瑞草，仙草灵芝含有122种三萜类成分，另外还含有灵芝多糖、核苷酸类、生物碱类等活性成分[3]灵芝孢子粉是灵 芝 在 生 长 成 熟 期 ， 从 灵 芝 菌 褶 中 弹 射 出 来 的 极 其 微 小 的 卵 形 生 殖细 胞 即 灵 芝 的 种 子 ， 是 灵芝的精华部分，集中了灵芝的全部有效成分，具有抗癌、增强免疫力、降血脂、降血糖、清除自由基、抗衰老等作用螺旋藻属于蓝藻门中的螺旋藻属，含有丰富的蛋白质、多糖类、β-胡萝卜素、维生素、微量元素、矿物质据报道，螺旋藻具有明显提高抗应激能力 促进造血功能、升高白细胞 及增强免疫功能作用[4]本试验根据卫生部《保健食品检验与评价技术规范》 （2003版）规定的增强免疫力功能检验方法，使用御坊堂牌灵芝螺旋藻片通过小鼠迟发型变态反应（DHT）验证增强细胞免疫功能；通过小鼠半数溶血值（HC 50）测定和抗体生成细胞数检测验证增强体液免疫功能，通过单核-巨噬细胞廓清实验验证非特异性免疫功能的强弱，来观察灵芝螺旋藻片增强免疫的功能作用1 材料与方法1.1 样品：灵芝螺旋藻片，灰绿色片，破壁灵芝孢子粉、螺旋藻及少量辅料压制而成由宁波御坊堂生物科技有限公司提供，批号20091201。
1.2 实验动物：吉林大学基础医学院动物实验中心提供的清洁级ICR雄性小鼠，生产许可证号：SCXK-（吉）20070031.3 实验剂量与分组：各选健康雄性小鼠192只，体重18g—22g，分16组，每组12只，分别4组做一个实验，分别是迟发型变态反应、抗体生成细胞数、半数溶血值、单核—巨噬细胞廓清影响试验灌胃剂量按人体推荐摄入量的1倍、10倍、30倍为0.083、0.83、2.5g//kgBW1.4 主要仪器设备电子天平（0.1g） ，分析天平、游标卡尺、722分光光度计1.5 实验方法1.5.1 迟发型变态反应（足跖增厚法DTH）取羊血，生理盐水洗涤3次，小鼠用2%（V/V）SRBC腹腔免疫，每只鼠注射0.2ml（约1×10 8个SRBC） 在免疫后4天，测量左后足跖厚度，然后再测量部位皮下注射20%（V/V）SRBC，每只鼠20ul（约1×10 8个SRBC） ，注射后24h测量左后足跖厚度同一部位测量三次，取平均值1.5.2 抗体生成细胞数（Jerne改良玻片法）绵羊颈静脉取血对小鼠进行腹腔注射，然后，按试验规程处理后肉眼观察玻片上的空斑，计数溶血空斑数1.5.3 半数溶血值测定取羊血，对小鼠进行腹腔注射，然后，按试验规程处理后在540nm处以对照管作空白，分别测定各管光密度值。
溶血素的量以半数溶血值（HC 50）表示，按下式计算1.5.4 单核—巨噬细胞碳廓清影响试验小鼠尾静脉注射1:4倍稀释的印度墨汁，待墨汁注入，立即计时注入墨汁2、10min，分别从内眦静脉丛取血20ul，并立刻将其加到2ml0.1%碳酸钠溶液中用722分光光度计在600nm波长处光密度值（OD） ，以碳酸钠溶液做阴性对照将小鼠处死，取肝脏和脾脏用滤纸吸干脏器表面血污，分别称重，按下式计算吞噬指数α：2 结果2.1 灵芝螺旋藻片对小鼠体重和迟发型变态反应（DTH）的影响由表1可见，经口给予灵芝螺旋藻片30天，各剂量组小鼠增重在低、中、高剂量组和阴性对照组间比较无显著性差异（P＞0.05） ；其足趾肿胀度在低剂量组与阴性对照组间无显著性差异（P＞0.05） ，在中剂量组与阴性对照组间比较有显著性差异（P＜0.05） ，在高剂量组与阴性对照组间比较有高度显著性差异（P＜0.01） ，及中、高剂量组的灵芝螺旋藻片能增强小鼠的迟发型变态反应表1.灵芝螺旋藻片对小鼠体重和迟发型变态反应（DHT）的影响组别 动物数（只） 始重（g） 终重（g） 增重（g） P1 足趾肿胀度（mm）P2阴性对照 12 19.2±1.2 36.3±1.3 17.0±1.6 ---- 0.50±0.09 ----低剂量组 12 19.1±0.9 36.6±1.1 17.5±1.5 0.457 0.55±0.07 0.166中剂量组 12 19.3±0.8 36.7±0.9 17.4±1.1 0.570 0.57±0.09* 0.036高剂量组 12 19.4±1.1 37.1±1.3 17.7±1.5 0.265 0.61±0.06** 0.002P1：各实验组与阴性对照组比较； P2：各实验组与阴性对照组比较*：与阴性对照组比较P＜0.05 **：与阴性对照组比较P＜0.012.2 灵芝螺旋藻片对小鼠抗体生成细胞数的影响由表2可见，经口给予小鼠不同剂量的灵芝螺旋藻片30天，经统计学处理，其抗体生成细胞数在低、中剂量组与阴性对照组间比较无显著性差异（P＞0.05） ；高剂量组与阴性对照组比较有高度显著性差异（P＜0.01） ，即高剂量组的灵芝螺旋藻片对小鼠的抗体生成细胞数有明显的影响。
表2.灵芝螺旋藻片对小鼠抗体生成细胞数的影响组别 动物数（只） 溶血空斑数（×103/全脾） P阴性对照 12 179.5±9.9 ----低剂量组 12 182.7±12.7 0.461中剂量组 12 186.0±10.0 0.134高剂量组 12 192.0±8.7** 0.005P：各实验组与阴性对照组比较； *：与阴性对照组比较P ＜0.01 2.3 灵芝螺旋藻片对小鼠半数溶血值（HC 50）的影响由表3可见经口给予小鼠不同剂量的灵芝螺旋藻片30天，经统计学处理，其半数溶血值在低、中剂量与阴性对照组间比较无显著性差异（P＞0.05） ，在高剂量与阴性对照组比较有显著性差异（P＜0.05） ，即高剂量组的灵芝螺旋藻片能提高小鼠半数溶血值表3.灵芝螺旋藻片对小鼠半数溶血值（HC50 ）的影响组别 动物数（只） 溶血空斑数（×103/全脾） P阴性对照 12 166±8 ----低剂量组 12 172±10 0.579中剂量组 12 177±13 0.332高剂量组 12 189±11* 0.0422.4 灵芝螺旋藻片对小鼠单核—巨噬细胞碳廓清功能的影响由表4可见，经口给予小鼠不同剂量的灵芝螺旋藻片30天，经统计学处理，其碳廓清功能在低剂量组与阴性对照组比较无显著性差异（P＞0.05） ，在中剂量组与阴性对照组间比价有显著性差异（P＜0.05） ，在高剂量组与阴性对照组比较有高度显著性差异（P＜0.01） ，及中、高剂量组的灵芝螺旋藻片能提高小鼠单核—巨噬细胞的碳廓清能力。
表4.灵芝螺旋藻片对小鼠单核—巨噬细胞碳廓清功能的影响组别 动物数（只） 吞噬指数（a） P阴性对照 12 6.38±0.33 ----低剂量组 12 6.68±0.50 0.078中剂量组 12 6.75±0.45* 0.031高剂量组 12 6.84±0.32** 0.007P：各实验组与阴性对照组比较； *：与阴性对照组比较P ＜0.05 **：与阴性对照组比较P＜0.013 讨论研究表明，中药多糖具有免疫调节、抗肿瘤、抗炎、抗病毒、抗氧化、抗辐射、降血糖、降血脂、保肝等多种功能[5]；螺旋藻中含有的藻蓝蛋白、多糖等，也有提高免疫力[6] 江振友[7]等用灵芝多糖喂药后 2 周，高、中、低 3 个剂量组小鼠抗体生成细胞、高剂量组小鼠血清溶血素(抗体积数)和对照组比较均有显著性差异，表明灵芝多糖对小鼠的体液免疫功能具有一定的调节作用，并且与其剂量有密切关系本试验经口给予小鼠不同剂量的灵芝螺旋藻片 30 天，能提高小鼠的半数溶血值、小鼠抗体生成细胞数，即能增加体液免疫功能，能增强小鼠的迟发型变态反应，及增加细胞免疫功能；能提高小鼠单核—巨噬细胞的碳廓清能力，即增强非特异性免疫功能。
说明御坊堂牌灵芝螺旋藻片具有增强免疫力功能作用[参考文献][1] 国家中医药管理局.中华本草.上海科学技术出版社.1999[2] 卫生部，保健食品检验与评价技术规范.2003[3] 曾祥丽，包海鹰. 灵芝三萜类成分与药理学研究进展[J]. 菌物研究, 2004, 2 (1) : 68.[4] 陈伟平，王汝俊等.螺旋藻的化学成分分析及其药效学研究[J].中药材，2000,23(8):470-473.[5] 何朝勇，王立为.多糖的免疫调节作用综述[J].安徽中医学院学报，2002，21（4）：62-64. [6] 王文博等.螺旋藻的营养保健价值及其在预防医学中的应用[J].中。