单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版副标题样式*1实验十三 血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳目的n学习醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白质的原理和方法n学习蛋白质染色的方法n了解电泳法分离血清蛋白质的临床意义 原 理1 1、电泳（电泳（electrophoresiselectrophoresis）法）法 在外电场的作用下，带电颗粒在外电场的作用下，带电颗粒，例如不处于等电状态的蛋白质分，例如不处于等电状态的蛋白质分子带电荷的蛋白质，在电场中将向子带电荷的蛋白质，在电场中将向着与其所带电荷电性相反的电极泳着与其所带电荷电性相反的电极泳动这种现象称为电泳动这种现象称为电泳醋酸纤维薄膜电泳 n醋酸纤维薄膜作为支持介质n醋酸纤维薄膜：将纤维素的羟基乙酰化为醋酸酯，溶于丙酮后制成有均一细密微孔的薄膜，其厚度为0.10.15mm血浆蛋白：(1)清蛋白（Alb）、1、2、纤维蛋白原和-球蛋白 ;(2)血浆中蛋白质的PI小于7.0，在PH8.6 Buffer中解离成负离子，在电场中向正极移动3）在同一pH下所带电荷量多少有差异，各蛋白质的分子大小与分子形状也不相同，因而在同一电场中泳动速度不同 染色剂：n一般蛋白质染色常使用氨基黑、考马斯亮蓝、丽春红n糖蛋白用甲苯胺蓝或过碘酸-Schiff试剂n脂蛋白则用苏丹黑或品红亚硫酸染色白蛋白白蛋白a1-a1-球蛋白球蛋白a2-a2-球蛋白球蛋白-球蛋白球蛋白 球蛋白球蛋白点样处醋酸纤维薄膜法显示醋酸纤维薄膜法显示血清蛋白质从阳极端起依血清蛋白质从阳极端起依次为白蛋白、次为白蛋白、a1-a1-球蛋白、球蛋白、a2-a2-球蛋白、球蛋白、 -球蛋白球蛋白和和球蛋白五条区带球蛋白五条区带 。
定量n与蛋白质结合的染料可溶解于碱液，溶液颜色深浅与蛋白质量呈正比 n比色法比较各蛋白质条带溶于碱后的溶液颜色，可计算出各种蛋白质所占的百分比计算nOD总和 T A + 1 + 2 + + n白蛋白 A/T 100n1球蛋白 1/T 100n2球蛋白 2/T 100n球蛋白 /T 100n球蛋白 /T 100操 作1、准备（1）电泳仪的准备（2）薄膜的准备：n在薄膜无光泽面标记点样位置 n将薄膜置于巴比妥缓冲液中浸泡2、点样（1）无光泽面朝上，吸去多余无光泽面朝上，吸去多余Buffer,Buffer,（2 2）用盖玻片蘸取少量血浆，垂直印在划线）用盖玻片蘸取少量血浆，垂直印在划线 处 注意：不能超出边缘；不能重复点样；必须不能超出边缘；不能重复点样；必须与边缘平行要适量、均匀和垂直，并避免弄破与边缘平行要适量、均匀和垂直，并避免弄破薄膜薄膜 杨1.5cm8cm2cm3 3、平衡：、平衡： 无光泽面朝下，点样侧位于阴极（无光泽面朝下，点样侧位于阴极（5min)5min)4 4、电泳：、电泳： 打开电源，打开电源，U U160V160V或或I I1.6mA1.6mA t=45 t=4550min50min；冬季；冬季1 1小时小时5 5、染色：氨基黑、染色：氨基黑10B10B 染色充分，染色充分，5 510min10min6 6、漂洗：、漂洗： 3 34 4个漂洗皿，洗去染料至背景无色。
个漂洗皿，洗去染料至背景无色临床意义 n血浆蛋白是血浆中最主要的固体成分，含量为6080g/L ，绝大部分由肝脏合成，仅球蛋白由浆细胞合成 n正常值：白蛋白5772n 1球蛋白25 n 2球蛋白49 n 球蛋白6.512 n 球蛋白1220 血浆蛋白的主要功能 n维持血浆胶体渗透压 n调节血浆pH值，维持酸碱平衡 n运输营养物质、代谢物、激素、药物及金属离子等 n免疫作用 n肝炎：白蛋白、a1-球蛋白、a2-球蛋白、-球蛋白下降，球蛋白升高n肝硬化：白蛋白、a1-球蛋白、a2-球蛋白下降明显， 球蛋白极度升高n肾病综合症：白蛋白降低，2和球蛋白升高 临床检测：。