药品的无菌检查技术药品的无菌检查技术授课人:汪穗福汪穗福(高级讲师高级讲师) 苏惠虹苏惠虹(助理讲师助理讲师) 广州市医药中专学校广州市医药中专学校2005年年3月月 教学目标教学目标1、学会直接接种法无菌检查的操作学会直接接种法无菌检查的操作2、懂得无菌检查供试品溶液的制备懂得无菌检查供试品溶液的制备 3、熟知无菌检查的结果判断熟知无菌检查的结果判断4、学习薄膜无菌检查法的使用学习薄膜无菌检查法的使用5、掌握影响无菌检验的因素和解决办法掌握影响无菌检验的因素和解决办法教学重点：教学重点：直接接种法无菌检查的操作直接接种法无菌检查的操作教学难点：教学难点：薄膜无菌检查法的使用薄膜无菌检查法的使用 第五节第五节 直接接种检查技术直接接种检查技术 药品无菌检查法的具体操作方法可分为直接接种法和薄膜药品无菌检查法的具体操作方法可分为直接接种法和薄膜过滤法《中国药典》（过滤法《中国药典》（20052005年版）指出：年版）指出：如供试品性状如供试品性状允许，应优先采用薄膜过滤法进行供试品无菌检查时允许，应优先采用薄膜过滤法进行供试品无菌检查时，，所采用的检查方法和检验条件应与验证的方法相同。
直接所采用的检查方法和检验条件应与验证的方法相同直接接种法即每支（或瓶）供试品按规定量分别接种至各接种法即每支（或瓶）供试品按规定量分别接种至各含硫含硫乙醇酸乙醇酸盐流体培养基和改良流体培养基和改良马丁培养基的容器中，除另有丁培养基的容器中，除另有规定外，定外，每个每个容器中培养基的用量容器中培养基的用量应符合接种的供符合接种的供试品体品体积不得大于培养基体不得大于培养基体积的的1010％，同％，同时，硫乙醇酸，硫乙醇酸盐流体培流体培养基养基每管装量不少于每管装量不少于1515mlml，，改良改良马丁培养基丁培养基每管装量每管装量不少不少于于1010mlml培养基的用量和高度同方法培养基的用量和高度同方法验证；；每种每种培养基接培养基接种的管数同种的管数同供试品的检验数量供试品的检验数量 由由于于直直接接接接种种法法具具有有操操作作简简便便等等优优点点，，特特别别适适宜宜无无抑抑菌菌和和防防腐腐作作用用药药品品的的无无菌菌检检查查据据统统计计，，《《中中国国药药典典》》（（20052005年年版版( (二二部部) )共共有有5757种单列品种（占种单列品种（占39.339.3％）采用该法规定。
％）采用该法规定 操操作作时时，，用用适适当当的的消消毒毒液液对对供供试试品品容容器器表表面面或或外外包包装装采采用用浸浸没没或或擦擦试试的的方方法法彻彻底底消消毒毒如如果果容容器器内内有有一一定定的的真真空空度度，，可可用用适适宜宜的的无无菌菌器器材材（（如如带带有有除除菌菌过过滤滤器器的的针针头头）），，向向供供试试品品容容器器内内导导入入无无菌菌空空气气，，再再按按无无菌菌操操作作启启开开容容器器取取出出内容物 无无论论使使用用何何种种检检查查法法，，其其检检查查操操作作过过程程均均包包括括供试品的处理及接种供试品的处理及接种与与培养及观察培养及观察两大步骤两大步骤 除除另另有有规规定定外外，，供供试试品品处处理理按按照照样样品品的的不不同同用用以以下下方方法法处理与接种处理与接种 1 1．．混混悬悬液液等等非非澄澄清清水水溶溶液液供供试试品品 该该类类供供试试品品操操作作最最简简单单，，取规定量的供试品直接无菌操作接种至各管培养基中取规定量的供试品直接无菌操作接种至各管培养基中 2 2．．固固体体制制剂剂供供试试品品 取取规规定定量量的的供供试试试试品品，，无无菌菌操操作作直直接接接接种种至至各各管管培培养养基基中中；；或或供供试试品品中中加加入入适适宜宜的的溶溶剂剂溶溶解解，，或或按标签说明复溶后，取规定量无菌操作接种至各管培养基中按标签说明复溶后，取规定量无菌操作接种至各管培养基中。
3 3．．ββ- -内内酰酰胺胺类类或或磺磺胺胺类类供供试试品品 取取规规定定量量供供试试品品，，混混合合，，加加入入适适量量的的无无菌菌β-β-内内酰酰胺胺酶酶溶溶液液或或对对氨氨基基苯苯甲甲酸酸溶溶液液使使中中和和，，接接种种至至各各管管培培养养基基中中，，或或直直接接接接入入含含β-β-内内酰酰胺胺酶酶或或对对氨氨基基苯苯甲酸的各管培养基中甲酸的各管培养基中 4 4．．非非水水溶溶性性供供试试品品 取取规规定定量量供供试试品品，，混混合合，，加加入入适适量量的的聚聚山山梨梨酯酯8080或或其其它它适适宜宜的的乳乳化化剂剂及及稀稀释释剂剂使使其其乳乳化化，，接接种种至至各各管管培培养养基基中中或或直直接接接接种种至至含含聚聚山山梨梨酯酯8080或或其其它它适适宜宜乳乳化化剂剂的各管培养基中的各管培养基中 一、供试品的处理及接种一、供试品的处理及接种 5．．敷敷料料供供试试品品 取取规规定定数数量量，，每每个个包包装装以以无无菌菌操操作作拆拆开开，，于于不不同同部部位位剪剪取取约约100 mg或或１１cm××3cm的的供供试试品品；；接接种种于于各各管管足足以以浸浸没没供供试品的适量培养基中。
试品的适量培养基中 6．．肠肠线线、、缝缝合合线线等等供供试试品品 肠肠线线、、缝缝合合线线及及其其它它一一次次性性的的医医用用材材料料按按规规定定量量取取最最小小包包装装，，无无菌菌拆拆开开包包装装，，接接种种于于各各管管足足以以浸浸没没供供试试品品的的适量培养基中适量培养基中 7 7．．灭灭菌菌医医用用器器具具供供试试品品 取取规规定定量量，，必必要要时时应应将将其其拆拆散散或或切切成成小小碎碎块块，，接接种种于于各各管管足足以以侵没供试品的适量培养基中侵没供试品的适量培养基中 8．．放放射射性性药药品品 取取供供试试品品1瓶瓶（（支支）），，接接种种于于装装量量为为7．．5ml的的硫硫乙乙醇醇酸酸盐盐流流体体培培养养基基和和改改良良马丁培养基马丁培养基中每每管接种量为管接种量为0．．2ml 接种阴性对照接种阴性对照 与此同时另取与此同时另取1 1支硫乙醇酸盐培养基管，支硫乙醇酸盐培养基管，加入上述同一容器内的供试品稀释液或加入上述同一容器内的供试品稀释液或0.90.9％％灭菌氯化钠溶液灭菌氯化钠溶液1 1 mlml，，作阴性对照作阴作阴性对照。
作阴性对照的目的是说明未接检品前的培养基和性对照的目的是说明未接检品前的培养基和供试品稀释液及无菌检查操作都是无菌生长供试品稀释液及无菌检查操作都是无菌生长的，而供试品阳性检出的菌确是来自检品的，而供试品阳性检出的菌确是来自检品[ [如供试品液未经验证试验，可同步进行，方如供试品液未经验证试验，可同步进行，方法见第五节的直接接种法的验证试验法见第五节的直接接种法的验证试验] ] 接种阳性对照接种阳性对照 根根据据GMPGMP和和《《中中国国药药典典》》要要求求，，接接种种阳阳性性对对照照应应在在阳阳性性对对照照室室中中进进行行，，以以防防交交叉叉污污染染接接种种时时应应按按验验证证试试验验的的结结果果选选择择阳阳性性对对照照菌菌方方法法是是：：在在相相应应的的培培养养基基中中接接入入小小于于100100个个cfucfu的的阳阳性性对对照照菌菌（（菌菌液液的的制制备备和和同同培培养养基基灵灵敏敏度度检检查查菌菌液液的的制制备备相相同同））供供试试品品用用量量同同供供试试品品无无菌菌检检查查每每份份培培养养基基接接种种的的样样品品量量（（见见表表6 6－－2 2、、表表6 6－－3 3））相相同同。
阳阳性性对对照照管管培培养养48~72 48~72 h h应应生生长良好 二、培养及观察二、培养及观察培培养养基基按规定的温度培养按规定的温度培养14 14 d d逐日观察并记录逐日观察并记录浑浊浑浊新鲜培养新鲜培养基或划线基或划线斜面培养斜面培养基基培养液涂片，染色，镜检培养液涂片，染色，镜检判断是否有菌判断是否有菌 三、结果判断三、结果判断供试品符供试品符合规定合规定培养基管均澄清，或虽显浑浊但培养基管均澄清，或虽显浑浊但经确证无菌生长经确证无菌生长供试品供试品不符合不符合规定规定培养基管中任何培养基管中任何1 1管显浑浊并确证管显浑浊并确证有菌生长有菌生长 除非能充分证明生长的微生物非供试品所含当满足下列至除非能充分证明生长的微生物非供试品所含当满足下列至少一个条件时，判试验结果无效：少一个条件时，判试验结果无效：⑴⑴ 对无菌检查试验相关设施对无菌检查试验相关设施的微生物监控数据表明其不符合规定的微生物监控数据表明其不符合规定⑵⑵ 对无菌试验过程的回对无菌试验过程的回顾，揭示了本操作程序是错误的顾，揭示了本操作程序是错误的⑶⑶ 阴性对照管有菌生长阴性对照管有菌生长。
⑷⑷ 供试品管中生长的微生物经鉴定后，确证微生物生长是因无菌供试品管中生长的微生物经鉴定后，确证微生物生长是因无菌试验中所使用的物品和（或）无菌操作技术不当引起的试验中所使用的物品和（或）无菌操作技术不当引起的 试验若经确认无效，应重试重试时，重新取同量试验若经确认无效，应重试重试时，重新取同量供试品，依法重试，若无菌生长，判供试品符合规定；供试品，依法重试，若无菌生长，判供试品符合规定；若有菌生长，判供试品不符合规定若有菌生长，判供试品不符合规定 直接接种法图示直接接种法图示无抗菌无抗菌作用的作用的供试品供试品抽抽样样接种于培养基接种于培养基硫乙醇酸盐流体硫乙醇酸盐流体培养基及改良马丁培养基管培养基及改良马丁培养基管 培培养养 每天观察每天观察观察观察14天天报告报告澄清无混浊澄清无混浊合格合格混浊（疑混浊（疑似情况）似情况）镜检镜检重新重新培养培养确证确证无菌无菌有菌有菌不合格不合格培培养养基基 直接接种法教学片 第六节第六节 薄薄膜过滤法检查技术膜过滤法检查技术 该法是各国药典和《中国药典》规定的第二种该法是各国药典和《中国药典》规定的第二种无菌检查的方法，适用于任何类型药品的无菌检无菌检查的方法，适用于任何类型药品的无菌检查。
具有适用性广，准确性强的特点具有适用性广，准确性强的特点《中国药《中国药典》（典》（2005年版）规定：如供试品性状允许，应年版）规定：如供试品性状允许，应优先采用薄膜过滤法据统计，《中国药典》优先采用薄膜过滤法据统计，《中国药典》（（2005年版二部）共有年版二部）共有88种单列规定品种（占种单列规定品种（占60.7％）规定采用该法薄膜过滤法可采用封闭式薄％）规定采用该法薄膜过滤法可采用封闭式薄膜过滤器（图膜过滤器（图6－－2）或一般薄膜过滤器（图）或一般薄膜过滤器（图6－－3），但应优先选用封闭式薄膜过滤器但应优先选用封闭式薄膜过滤器 待待过过滤滤的的液液体体滤膜滤膜接接负负压压吸吸引引抽抽滤机滤机图图6-4：：HTY微孔滤膜孔径测定仪微孔滤膜孔径测定仪 图：滤膜阻挡的细菌图：滤膜阻挡的细菌 一一般般新新购购得得一一批批滤滤膜膜，，因因各各厂厂家家生生产产相相同同规规格格的的滤滤膜膜其其质质量量不不尽尽一一致致，，应应对对滤滤膜膜任任选选以以下下三三种种方方法法中中的的一一种种进进行行孔孔径径大大小小的的测测试试，，符符合合规规定定的的滤膜才能用于无菌检查滤膜才能用于无菌检查。
（（一一）） 气气泡泡法法 其其原原理理是是测测滤滤膜膜孔孔径径的的大大小小，，可可用用气气泡泡压压力力方方法法（（图图6-46-4））测测定定先先将将滤滤膜膜浸浸入入水水中中，，使使完完全全湿湿润润，，然然后后用用镊镊子子夹夹住住一一片片滤滤膜膜放放于于气气泡泡点点测测定定装装置置上上(硬硬聚聚氯氯乙乙烯烯气气泡泡点点测测定定装装置置，，上上海海化化工工厂厂生生产产DY＝＝25)或或滤滤膜膜孔孔径径测测定定仪仪上上，，膜膜上上放放一一块块与与滤滤膜膜大大小小相相同同的的尼尼龙龙筛筛网网，，再再加加上上多多孔孔板板，，将将螺螺旋旋固固定定圈圈旋旋紧紧，，在在多多孔孔板板上上加加3～～5 mm深深的的水水(注注意意排排除除气气泡泡)关关闭闭放放气气阀阀，，启启动动空空压压机机或或氮氮气气阀阀，，使使压压力力缓缓缓缓上上升升，，注注意意观观查查水水面面上上产产生生第第一一个个气气泡泡时时，，记记录录压压力力表表的的压压力力，，气气泡泡点压力不应小于点压力不应小于0.2 MPa(2.2 kg/cm2) （二）水流量法（二）水流量法 其原理是在一定的压力下，定量的水在单其原理是在一定的压力下，定量的水在单位时间内通过滤膜的流量与孔径及孔隙率有关。
位时间内通过滤膜的流量与孔径及孔隙率有关将滤膜装于除菌滤器上，开动真空泵，压力在将滤膜装于除菌滤器上，开动真空泵，压力在93 KPa(700 mm Hg)下，抽滤已滤清的水约下，抽滤已滤清的水约500 ml，，计算出每计算出每1 mim的滤速《中国药典的滤速《中国药典》对滤膜的滤速未明确规定，而》对滤膜的滤速未明确规定，而SP(ⅩⅩⅢ)规定在规定在93 KPa(700 mm Hg)压力下，滤膜直径压力下，滤膜直径47 mm；；流速流速55～～75 mm/min此法操作简单，此法操作简单，但误差大但误差大 （三）（三） 细菌过滤法细菌过滤法 其原理是利用细菌细胞大小稳定的特性，可将标其原理是利用细菌细胞大小稳定的特性，可将标准菌株制备的菌液，用待测滤膜过滤，其滤液经培准菌株制备的菌液，用待测滤膜过滤，其滤液经培养无菌生长，则该滤膜孔径符合规定常用的细菌养无菌生长，则该滤膜孔径符合规定常用的细菌为粘质沙雷菌为粘质沙雷菌(CMCC(B)41002)，，将该菌的斜面培养将该菌的斜面培养物，接种于营养肉汤培养基中，物，接种于营养肉汤培养基中，30～～35Ｃ培养Ｃ培养18～～20 h，，用用0.9％氯化钠溶液稀释至％氯化钠溶液稀释至10-3(约相当于约相当于7x105cfu/ml)取此菌液取此菌液1 ml加至加至50 ml 0.9％％氯化钠氯化钠溶液中，按薄膜过滤法过滤，取该滤液溶液中，按薄膜过滤法过滤，取该滤液5 ml接种于接种于营养肉汤培养基营养肉汤培养基40 ml中，中，30～～35℃℃培养培养24 h，，应应无菌生长，而将滤膜加至营养肉汤培养基管中应有无菌生长，而将滤膜加至营养肉汤培养基管中应有菌生长，证明该滤膜滤效合格。
菌生长，证明该滤膜滤效合格 三、三、薄薄膜过滤法检查的操作膜过滤法检查的操作 应根据不同供试品而用不同的样品处理法来进行应根据不同供试品而用不同的样品处理法来进行 应应优优先先选选用用封封闭闭式式薄薄膜膜过过滤滤器器，，滤滤膜膜孔孔径径不不大大于于0.450.45μμm m，，直直径径为为4747mmmm根根据据供供试试品品及及其其溶溶剂剂的的特特性性选选择择滤滤膜膜材材质质滤滤器器及及滤滤膜膜使使用用前前应应采采用用适适宜宜的的方方法法灭灭菌菌使用时，应保证滤膜在过滤前后的完整性使用时，应保证滤膜在过滤前后的完整性 水水溶溶性性供供试试液液过过滤滤前前先先将将少少量量的的冲冲洗洗液液过过滤滤以以润润湿湿滤滤膜膜油油类类供供试试品品，，其其滤滤膜膜和和过过滤滤器器在在使使用用前前应应充充分分干干燥燥为为发发挥挥滤滤膜膜的的最最大大过过滤滤效效率率，，应应注注意意保保持持供供试试品品溶溶液液及及冲冲洗洗液液覆覆盖盖整整个个滤滤膜膜表表面面供供试试液液经经薄薄膜膜过过滤滤后后，，若若需需要要用用冲冲洗洗液液冲冲洗洗滤滤膜膜，，每每张张滤滤膜膜每每次次冲冲洗洗量量为为100100mlml，，且且总总过过滤滤量量不不宜宜太太大大，，以以避避免免滤滤膜膜上上的的微微生生物物受受损损伤伤。
下面就不同供试品的处理操作介绍如下：下面就不同供试品的处理操作介绍如下： 1．水溶液供试品．水溶液供试品 取规定量，直接过滤，或混合至含适量稀释液取规定量，直接过滤，或混合至含适量稀释液的无菌容器内，混匀，立即过滤如供试品具有的无菌容器内，混匀，立即过滤如供试品具有抑菌作用或含防腐剂，须用适量的冲洗液冲洗滤抑菌作用或含防腐剂，须用适量的冲洗液冲洗滤膜，冲洗次数不得少于三次膜，冲洗次数不得少于三次 冲洗后，如用封闭式过滤器，分别将冲洗后，如用封闭式过滤器，分别将100ml硫硫乙醇酸盐流体培养基及改良马丁培养基加入相应乙醇酸盐流体培养基及改良马丁培养基加入相应的滤筒内如果仅用薄膜过滤器，则无菌操作取的滤筒内如果仅用薄膜过滤器，则无菌操作取出滤膜，将其剪成出滤膜，将其剪成3等份；分别置于含等份；分别置于含50ml硫乙醇硫乙醇酸盐流体培养基及改良马丁培养基容器中，其中酸盐流体培养基及改良马丁培养基容器中，其中1份接种阳性对照值做阳性对照用份接种阳性对照值做阳性对照用 2．可溶于水的固体制剂供试品．可溶于水的固体制剂供试品 取规定量，加取规定量，加适宜的溶剂溶解或按标签说明复溶，然后照水适宜的溶剂溶解或按标签说明复溶，然后照水溶液供试品项下的方法操作。
溶液供试品项下的方法操作 3．．β-内酰胺类供试品 取规定量，按水溶液内酰胺类供试品 取规定量，按水溶液或固体制剂供试品的处理方法处理，立即过滤，或固体制剂供试品的处理方法处理，立即过滤，用适宜的冲洗液冲洗滤膜再用含适量用适宜的冲洗液冲洗滤膜再用含适量β-内酰胺内酰胺酶的冲洗液清除残留在滤筒、滤膜上的抗生素后酶的冲洗液清除残留在滤筒、滤膜上的抗生素后接种培养基，必要时培养基中可加入少量的接种培养基，必要时培养基中可加入少量的β-内内酰胺酶；或将滤膜直接接入含适量酰胺酶；或将滤膜直接接入含适量β-内酰胺酶的内酰胺酶的培养基中接种培养基的方法照水溶液供试品项培养基中接种培养基的方法照水溶液供试品项下的方法操作下的方法操作 4．非水溶性制剂供试品非水溶性制剂供试品 取规定量，直接过滤；或混取规定量，直接过滤；或混合溶于含聚山梨酯合溶于含聚山梨酯80或其它适宜乳化剂的稀释液中，或其它适宜乳化剂的稀释液中，充分混合，过滤用含充分混合，过滤用含0．．1%～～1%聚山梨酯聚山梨酯80的冲的冲洗液冲洗滤膜至少三次滤膜于含或不含聚山梨酯洗液冲洗滤膜至少三次滤膜于含或不含聚山梨酯80的培养基中培养。
培养基接种照水溶液供试品项下的的培养基中培养培养基接种照水溶液供试品项下的方法操作方法操作 5．可溶于十四烷酸异丙酯的膏剂和粘性油剂供试品可溶于十四烷酸异丙酯的膏剂和粘性油剂供试品 取取规定量，混合至适量的无菌十四烷酸异丙酯（无菌十四规定量，混合至适量的无菌十四烷酸异丙酯（无菌十四烷酸异丙酯的制备：采用薄膜过滤法过滤除菌选用孔烷酸异丙酯的制备：采用薄膜过滤法过滤除菌选用孔径为径为0.22μm的脂溶性滤膜，并经的脂溶性滤膜，并经140℃干热灭菌干热灭菌2 h）中，）中， 剧烈振摇，使供试品充分溶解，如果需要可适当加热，剧烈振摇，使供试品充分溶解，如果需要可适当加热，但温度不得超过但温度不得超过44℃），趁热迅速过滤若无法过滤，），趁热迅速过滤若无法过滤，应加入不少于应加入不少于100ml的稀释液，充分振摇萃取，静置，取的稀释液，充分振摇萃取，静置，取下层水相作为供试液过滤过滤后滤膜冲洗及培养基接下层水相作为供试液过滤过滤后滤膜冲洗及培养基接种照非水溶液供试品项下的方法操作种照非水溶液供试品项下的方法操作 6．无菌气（喷）雾剂供试品无菌气（喷）雾剂供试品 取规定量，将各容器取规定量，将各容器置冰室冷冻约置冰室冷冻约1 h。
以无菌操作迅速在溶器上端钻一以无菌操作迅速在溶器上端钻一小孔，释放抛射剂后再无菌开启容器，然后照水溶小孔，释放抛射剂后再无菌开启容器，然后照水溶性制剂或非水溶性制剂项下的方法操作性制剂或非水溶性制剂项下的方法操作 7．装有药物的注射器供试品装有药物的注射器供试品 取规定量，装上无菌取规定量，装上无菌针头（非包装中所配带的），若需要可吸入稀释液针头（非包装中所配带的），若需要可吸入稀释液或标签所示的溶剂溶解，然后照水溶性制剂或非水或标签所示的溶剂溶解，然后照水溶性制剂或非水溶性供试品项下方法操作同时应采用直接接种法溶性供试品项下方法操作同时应采用直接接种法进行包装中所配带的无菌针头的无菌检查进行包装中所配带的无菌针头的无菌检查 8．具有导管的医疗器具（输血、输液袋等）．具有导管的医疗器具（输血、输液袋等）供试品 取规定量，每个最小包状用供试品 取规定量，每个最小包状用50~100ml冲洗液分别冲洗内壁，收集冲洗液冲洗液分别冲洗内壁，收集冲洗液于无菌容器中，然后照水溶液供试品项下方法于无菌容器中，然后照水溶液供试品项下方法操作同时应采用直接接种法进行包装中所配操作同时应采用直接接种法进行包装中所配带的针头的无菌检查。
带的针头的无菌检查四、培养及观察 同直接接种检查法四、培养及观察 同直接接种检查法五、结果判断 同直接接种检查法五、结果判断 同直接接种检查法 开开放放式式薄薄膜膜过过滤滤法法操操作作将药品加入将药品加入无菌稀释剂溶液中无菌稀释剂溶液中无菌无菌稀释剂溶剂分稀释剂溶剂分3次洗涤滤膜次洗涤滤膜取下滤膜取下滤膜 除去掉上层滤纸除去掉上层滤纸将滤膜分成将滤膜分成3份份加加硫乙醇酸盐流体培养基及改良马丁培养基管硫乙醇酸盐流体培养基及改良马丁培养基管按规定温度和时间进行培养按规定温度和时间进行培养 薄薄膜过滤法检查膜过滤法检查 教学片教学片 第七节第七节 无菌检查无菌检查各种中和各种中和(灭活灭活)剂的作用机理剂的作用机理一一、、硫硫乙乙醇醇酸酸盐盐、、半半胱胱氨氨酸酸、、巯巯基基化化合合物物的的作作用用机理 机理 此此类类化化合合物物因因含含有有SH基基，，可可以以和和重重金金属属结结合合,因因而而能能解解除除或或阻阻止止含含汞汞、、含含砷砷盐盐等等重重金金属属化化合合物物对对细细菌菌的的毒毒害害或或抑抑制制作作用用此此外外硫硫乙乙醇醇酸酸盐盐可可维维持持培培养养基基中中氧氧化化还还原原电电位位，，特特别别是是保保持持培培养养基基下下层层的的厌厌氧氧条条件件，，有有利利于于厌厌氧氧菌菌生生长长。
而半胱氨酸可作为细菌长所需的氮源而半胱氨酸可作为细菌长所需的氮源 二、青霉素酶的作用机理 二、青霉素酶的作用机理 青霉素酶是目前较理想的青霉素灭活剂，它能通青霉素酶是目前较理想的青霉素灭活剂，它能通过破坏青霉素结构中的过破坏青霉素结构中的β—内酰胺环迅速完全而特异内酰胺环迅速完全而特异地使青霉素灭活地使青霉素灭活三、三、 对氨基苯甲酸的作用机理 对氨基苯甲酸的作用机理 磺胺类药物的分子结构与对氨基苯甲酸非常相似，磺胺类药物的分子结构与对氨基苯甲酸非常相似，因此它可以竟争性地取代叶酸结构中的对氨基苯甲因此它可以竟争性地取代叶酸结构中的对氨基苯甲酸的地位，导致二氢叶酸合或酶失去作用而使细菌酸的地位，导致二氢叶酸合或酶失去作用而使细菌生长受阻碍此类作用属竞争性抑制作用，其抑制生长受阻碍此类作用属竞争性抑制作用，其抑制作用的强弱受底物的浓度而影响，故此在培养基中作用的强弱受底物的浓度而影响，故此在培养基中加入足够量的对氨基苯甲酸才能发挥较强的解决抑加入足够量的对氨基苯甲酸才能发挥较强的解决抑制作用而有利于细菌生长，无菌检查的效果才真实制作用而有利于细菌生长，无菌检查的效果才真实。
关于对氨基苯甲酸的作用机理见图关于对氨基苯甲酸的作用机理见图6-5示 叶酸合成酶 二氢叶酸还原酶(PABA)────────→ FAH2 ───────→ FAH4 (对氨基苯甲酸) ↑ (二氢叶酸) (四氢叶酸) 磺胺类药物磺胺类药物 ↖ / TMP ←───── UMP (胸苷酸) 胸腺嘧啶合成酶 (尿苷酸) ↓ ↓ 胸腺嘧啶 ←───── 胸苷 DNA 胸苷磷酸化酶 图6-5 :对氨基苯甲酸的作用机理 。