本文格式为Word版，下载可任意编辑医学复习资料生化测验汇总 手工法 1. 血清总蛋白（ Total protein,TP ） （双缩脲法） 分子中含有两个或两个以上甲酰胺基（CONH 2 ）的化合物都能和碱性铜溶液作用，形成紫色复合物，这种回响称双缩脲回响蛋白分子中含有大量肽键(CONH)，都能发生双缩脲回响，而且各种血浆蛋白质成色程度根本一致因此在确定浓度范围内与肽键数量及蛋白质含量成正比，经与同样处理的蛋白质标准液对比，即可求得蛋白质含量双缩脲回响式如下： 测验试剂：6mol/L NaOH 溶液、双缩脲试剂、双缩脲试剂空白试剂、60-70g/L 蛋白质标准液 测验仪器：722 分光光度计 步骤：（1）按下表参与试剂（S：R＝1：80） 血清总蛋白测定 参与物（ml） 空白管（B） 标准管（S） 测定管（U） 血清 0.04 蛋白质标准液 0.04 蒸馏水 0.04 双缩脲试剂 3.2 3.2 3.2 （2）37 C水浴10min，在波长=540nm比色，以空白管调零，读取各管A值举行计算 （3）结果计算 血清总蛋白（ g/L ）= = （测定管（或校正）吸光度/ / 标准管吸光度）* * 蛋白标准液浓度（ g/L） ） 参考区间： 60- - 80g/L 2. 血清蛋白（ Albumin,A ） ( ( 溴甲酚绿法) ) 血清蛋白在 PH4.1 环境中带正电荷，在非离子去垢剂聚氧化乙烯月桂醚存在时，与带电的染料溴甲酚绿（ＢＣＧ）结合形成蓝绿色化合物。
在 630nm 有吸收峰，颜色深浅与清蛋白浓度成正比，与同样处理的清蛋白标准对比，可求得血清中白蛋白含量，回响式如下： 测验试剂：BCG 试剂（琥珀酸缓冲液（PH 4.2）、溴甲酚绿、聚氧乙烯月桂醚）、白蛋白标准液（40g/L） 测验仪器：722 分光光度计 步骤：（1）按上表参与试剂（S：R=1:300） （2）混匀， 室温放置 0 30 秒，波长 630nm，用空白管调零，读取各管 A 值 (3)结果计算 血清蛋白（ g/L ）= = （测定管吸光度/ / 标准管吸光度）* * 标准清蛋白浓度（ g/L ） 参考区间：40-55g/L 留神事项: : G 1..BCG 是一种 H PH 指示剂，变色域为 PH3.8 （黄色）- - 5.4 （蓝绿色），操纵 H PH 是关键！ 3 3. . 尿酸的检测原理（终点法） 546nm 波优点检测吸光度，颜色深浅与尿酸的量成正比 试剂：R1（粉）：尿酸酶、 POD、 4-AAP、TOOS R2（液）：磷酸盐缓冲液 R1+R2=R 尿酸标准液（301mol/L） S：R=1:50 3ml 体系 检测血清 步骤：混匀，37℃保温10 min，以空白管校零后，在546nm波长下读取标准管及样本管吸光度A标、A测。
健康成年男性：202-416mol/L 健康成年女性：142-339mol/L 4 4. . 尿素的检测原理（两点法） 脲酶 尿素+H 2 O 2NH 3 +CO 2 GLDH NH 3 +-酮戊二酸+NADH+H+ 谷氨酸+NAD + + H2 O 340nm 波长下吸光度下降的速率与尿素的量成正比 测验试剂：R1（粉）： 脲酶、谷氨酸脱氢酶、NADH R2（液）：缓冲液、-酮戊二酸 R1+R2=R 尿素标准液（ 7.1mmol/L ） S：R=1:100(1ml 体系) 检测血清 步骤： 空白管 标准管 待测管 蒸馏水 3ml 标准品 30ul 待测血清 30ul 工作液 3ml 3ml 回响30秒和60秒两点检测吸光度， 波长=340nm 参考区间： 2.9 - - 8.2 mmol/L 留神事项： 1、先打定好试剂，一加样立刻混匀并检测 2 、防止氨离子的污染 3、血氨升高可使尿素测定结果偏高，两点速率法能较好地消释内源性氨的干扰 4、用蒸馏水空白调零即可 5. 肌酐的检测原理（两点法） 肌酐+碱性苦味酸 橘红色的苦味酸肌酐复合物 505nm 波长下处检测吸光度，颜色深浅与肌酐的量成正比 试剂：R1（液）：氢氧化钠 R2（液）：苦味酸 R1+R2（1:1）=R 肌酐标准液（133mol/L ） S:R=1:10（3ml 体系） 检测血清 仪器：722 分光光度计 半自动生化分析仪 空白管 标准管 待测管 蒸馏水 300ul 标准品 300ul 待测血清 300ul 工作液 3ml 3ml 3ml 波长=505nm （留神：确定要混匀后立刻上机检测） 参考区间：男性 62-115 mol/，L 女性 53-97mol /L 留神事项： 1、标本即加即检 2 、不宜使用全血标本，全血中假肌酐物质较多 3 、需举行试剂空白调零 6 6. . 甘油三酯测定的原理（酶法）: : 试剂： R1(液)(Tris 缓冲液（PH 7.6）、4－氯酚) R2(粉)(ATP，4-AAP，LPL，GPO，GK ， POD) 甘油三酯标准液(2.26mmol/L) 步骤： 1.样品与试剂按 1:100 比例混匀，其中试剂为 3ml，设置空白管、标准管与待测管； 2.放置于 37℃水浴箱中水浴 10min； 用 722 分光光度计测量每支管的吸光度（波长=505nm） TG 测定 参与物（ml） 测定管（U） 标准管（S） 空白管（B） R 3 3 3 标准液 - 0.03 - 待测液 0.03 - - 参考区间[0.55～1.70] 7. 总胆固醇测定原理（酶法） 试剂： R1(粉)(CHE、CHOD、POD) R2(液)(磷酸缓冲液(PH7.7) 、4-AA、酚) 总胆固醇标准液(4.85mmol/L) 1.样品与试剂按 1:100 比例混匀，其中试剂为 3ml，设置空白管、标准管与待测管； 2.放置于 37℃水浴箱中水浴 10min； 3.用 722 分光光度计测量每支管的吸光度（波长=505nm） CH 测定 参与物（ml） 测定管（U） 标准管（S） 空白管（B） R 3 3 3 标准液 - 0.03 - 待测液 0.03 - - 参考区间[3.0,5.18] TG 和 CH 留神事项： 1.饮食的影响。
2. Trinder 回响的干扰恢复性物质干扰） 8. 血清总钙的测定 邻甲酚酞络合酮法 在 pH 11 的碱性溶液中，邻-甲酚酞络合酮(OCPC)与钙络合生成紫红色螯合物，此紫红色螯合物在 575nm 波优点有吸收峰，与同样处理的钙标准液对比，利用比尔定律举行计算，以求得血清总钙的含量 试剂：待测血清标本、蒸馏水（最好用去离子水或重蒸馏水）、R1：乙醇胺缓冲、R2：8-羟基喹啉、邻-甲酚酞络合酮（OCPC）、血清钙标准液（2.34mmol/L） R1：R2＝1：1 混合成应用液 R 测验仪器：半自动生化分析仪 1.按S:R=1:50配3ml体系 血清总钙测定 参与物（ml） 空白管（B） 标准管（S） 测定管（U） R 3 3 3 蒸馏水 0.06 - - 钙标准液 - 0.06 - 待测血清 - - 0.06 2.37℃水浴 5 分钟 3.722 分光光度计，波长=575nm 参考区间：成年人：2.03~2.54mmol/L 留神事项： 1.外源性 Ca2+污染 2.标本最好用血清或肝素抗凝的血浆 3.镁对钙测定的干扰 方法学评价 9. 批内重复性试验 批内重复性试验是指在一致条件下(用同样的方法，同一种试剂和标准品，同一台仪器，在同一测验室由同一人操作)对同一标本在尽可能短的时间内举行屡屡分析测定，以获得批内细致度数据的试验方法。
其结果能反映各次测定结果相互接近的程度，用于客观评价 GOD-POD 法测血糖随机误差的大小 配制试剂：R1+R2混匀即可 按下表参与试剂，其中测定管按照5轮，每轮4次举行血糖测定，即可获得20个测定数据 各管混匀后，37C水浴10min，在505nm波长下举行比色 利用722分光光度计测量每支管的吸光度，利用已知标准管GLU浓度为5.55mmol/L，然后根据A=KbC，浓度与吸光度成正比，通过公式 Glu（mmol/L）=测定管 A\标准管 A*5.55，来计算血清血糖浓度 留神事项：为了缩小测定值的离散程度，操作中务必切实参与标准液及标本量，并严格操纵回响时间，切实读数比色杯成套性测验：用蒸馏水测，选用波长（420nm440nm），透光率相差在 0．5%以内为合格 ） 10. 回收测验： 1.回收试验主要是用来分析某临床检测方法正确测定参与常规分析样品的纯分析物的才能，目的是测定比例系统误差，以此来评价候选方法的切实度 血清标本、葡萄糖标准(80mmol/L)、蒸馏水、质控品 1 和 2 GOD-POD 试剂（A、B 液）、Glu 标液：5.55mmol/L 步骤： 1.样品制备 根基样品 血清 0.9ml + 0.1ml 蒸馏水 回收样品Ⅰ 血清 0.9ml＋0.01ml 80mmol/L 葡萄糖标准液＋0.09ml 蒸馏水 回收样品Ⅱ 血清 0.9ml＋0.06ml 80mmol/L 葡萄糖标准液＋0.04ml 蒸馏水 回收样品Ⅲ 血清 0.9ml＋0.09ml 80mmol/L 葡萄糖标准液＋0.01ml 蒸馏水 2.血糖浓度测定按 GOD-POD 法测定各制备样品的血糖浓度，每份样品作 2 次检测，结果取平均值。
3.参与浓度计算（理论真实值） 参与浓度(mmol/L)=标准液浓度（ml）血清量(ml)+标准液量(ml)+蒸馏水（ml） 回收量计算（实际测得值） 回收量＝回收样品测得值－根基样品测得值 回收率计算：回收率(%)=100 11. 干扰测验： 本测验选用 VitC 做 GOD-POD 法测血糖的干扰试验 1.维生素 C 具有恢复性，可与 GOD 回响生成的 H2O2 发生回响，干扰 H2O2 加入其次步POD 的偶联回响，从而降低显色强度，使检测结果偏低 因此， VitC 对该回响有干扰，但不是 VitC 被测定 2.干扰试验可反映分析物以外其他物质对分析方法对分析物测定切实度的影响以评价分析方法的切实性干扰物浓度确定时，产生的误差是恒定系统误差 试剂： 1.血清标本、VitC（15mmol/L）、蒸馏水 2.室内质控：测定1号和2号2个质控品 3.室间质评：测定5个具有靶值的血清样品 4.GOD-POD 试剂（A、B 液） 5.Glu 标液：5.55mmol/L 1. 室内质控：按GOD-POD法分别测定1号和2号2个质控品（测验前测一次、测验中测一次），同时测定标准管以及空白管。
2. 室间质评：按GOD-POD法分别测定5个具有靶值的血清样品 3. 样品制备 4. GOD-POD 法测血糖 （测两次求平均值） 按GOD-POD法分别测定4个制备样品的血糖浓度 各管混匀后，37C水浴10min，在512nm（校正值）波长下举行比色利用。