宫颈液基细胞学制片技术与镜下形态 彭振武 广州安必平医药科技有限公司,Your Company slogan in here,,主要内容,液基细胞学常见制片技术,液基细胞学染色方法,常见质量问题与镜下形态,宫颈液基细胞学质量控制,4,1,2,3,,（一）液基细胞学常见制片技术,1.膜式技术 2.沉降式技术 3.离心甩片技术 4.手工制片技术 5.其他,,膜式技术,最早出现的液基细胞学制片技术 原理—膜式负压过滤 代表产品：TCT,,膜式技术制片原理,宫颈脱落细胞中常见的成分： 黏液，血液，炎性细胞，上皮细胞，肿瘤细胞 过滤膜孔径8um,黏液，红细胞及部分直径较小的炎性细胞能穿透，而上皮细胞及肿瘤细胞则被“卡”在过滤膜上，从而达到去除杂质，收集有效诊断细胞成分的目的膜孔阻塞会造成细胞成团 细胞通透力度大小不一，中间视野细胞偏少，周边视野细胞量聚集 细胞团被外力压扁，腺细胞团特有的三维立体结构消失,膜式技术对制片的影响,,北京英硕力新柏科技有限公司,,广州鸿琪光学仪器科技有限公司,,福建泰普生物科学有限公司,,湖北泰康医疗设备有限公司,,自动化程度最高的制片技术 原理—分离提取；自然沉降 代表产品：LCT,LBP,沉降式制片技术,,原理一：密度分层去除杂质 宫颈脱落细胞中常见的成分： 黏液，血液，炎性细胞，上皮细胞，肿瘤细胞 分离提取液（密度液）比重较保存液大，细胞沉降到达两者交界处，只有自身比重大，能克服下层分离液阻力的细胞才能继续下降，从而被收集。
样本中的粘液，红细胞比重轻，无法透过分离提取液，被分层在上部，继而被去除；上皮细胞，肿瘤细胞及部分炎性细胞则被收集用来制片沉降式技术制片原理,,LCT,,,LBP,,,,,原理二：重力自然沉降，优先富集有效诊断细胞,,沉降式技术视频,\企业宣传片\LBP旧版.VOB 6分56秒→8分50秒,,细胞自然沉降，与玻片相吸附，没有外力施压，某些成团的细胞保持三维立体结构，一方面对判读来源有帮助，另一方面，镜下细胞不在同一层面上，需要调节微调才能观察清楚,沉降式技术对制片的影响,,广州安必平医药科技有限公司,,广州鸿琪光学仪器科技有限公司,,福建泰普生物科学有限公司,,离心甩片技术,,耗材,,离心收集细胞,,加入样本，甩片制片,,,,离心甩片技术原理,洗衣机“脱水”方法 利用离心机旋转产生的离心力，将“桶里”的细胞甩到“桶壁”上，制成涂片，再经过染色过程完成整个制片离心甩片技术对制片的影响,1.样本只经过简单的离心处理收集细胞，对样本中的杂质成分不能有效去除，片子质量的好坏取决于标本质量的好坏 2.甩片不能很好的让细胞在玻片上均匀分布，一般来说上面少下面多 3.背景欠清晰，细胞量少，杂质多 4.染色效果对比度不好，不鲜艳。
二）液基细胞学染色方法,《细胞病理学技术制作规范及质量控制》： 宫颈细胞学制片需采用巴氏染色 非宫颈细胞学制片可以采用巴氏，HE染色,,巴氏染色是国际通用的细胞学染色方法，在宫颈细胞学染色的效果方面，更是明显优于HE染色 1.显示鳞状上皮细胞的分化层次 2.更清楚的表达核的信息 3.体现胞浆的色彩变化 4.核浆对比度更加鲜明,,通过巴氏染色，表层角化细胞胞浆呈现红色，中层呈蓝色，底层呈蓝绿色；这一特点可以用来判断雌激素水平的高低，同时也能对我们的诊断带来帮助小的细胞本应该呈现蓝绿色，但是当胞浆呈红色，核有异型时，提示鳞癌的可能性大 年龄：40岁 判读结果：HSIL,,巴氏染色能更加清楚的表达核的信息细胞学的诊断关键还是在于核的异型性改变，核膜，核染色质，核仁等信息的表达清楚与否事关重要 年龄：34岁 判读意见：HSIL,,巴氏染色能好的显示胞浆的色彩变化，常见的有：角化不全嗜橘黄改变，病原微生物感染嗜双色改变，放疗反应呈多彩性改变,, 判读意见：滴虫（巴氏染色）,, 判读意见：滴虫 （HE染色）,, 判读意见：放疗反应性改变,,巴氏染色能使细胞，特别是肿瘤细胞有更鲜明的核浆对比效果HE染色的肿瘤细胞往往染色较深，很难观察清楚。
年龄：35岁 活检结果：宫颈管腺癌,,,,个人体会： 巴氏染色对于肿瘤细胞的着色，相比于HE染色，显得“温和很多”，一般不会出现细胞核完全染成看不清楚结构的现象 腺细胞，或成团细胞，着色能力更加强，巴氏染色对这些细胞的观察更加清楚三）液基细胞学制片常见问题与镜下形态,常见问题 1.细胞量 2.细胞分布 3.细胞染色 4.细胞清晰度 5.污染,,1.标本满意度评估，是否属于不满意标准？ 2.出现的问题是属于个别现象还是整体现象？ 3.整体现象从哪几方面检查？,细胞量过少解决思路：,,TBS报告系统对于样本质量的评判 液基制片：至少应有5000个形态清晰完整的鳞状上皮细胞 大致判断标准：400倍镜下，每个视野大于4个（膜式），大于8个（沉降式） 强调说明：1.计数的为鳞状细胞，鳞化细胞也可以算2.计数的为一张制片，而不是几张制片的总和3.最低计数标准适用于宫颈细胞学样本，对于子宫全切术后，阴道取样标本不适合4.任何存在异常细胞的样本均属于合格样本传统涂片最低细胞量在8000-12000个 液基制片最低细胞数量为5000个 以保存完好，形态清晰的鳞状上皮做为计数依据1.计数的为鳞状细胞，鳞化细胞也可以算。
2.计数的为一张制片，而不是几张制片的总和 3.最低计数标准适用于宫颈细胞学样本，对于子宫全切术后，阴道取样标本不适合 4.任何存在异常细胞的样本均不再要求细胞量达到最低标准液基涂片中最低鳞状上皮细胞数量（5000个细胞／每张）参考指南,,,一张非常满意的液基细胞涂片应含有4－7万细胞,,,,,满意的制片效果： 鳞状细胞量 (Bethesda 2001): 40000 ~70000细胞,,鳞状上皮细胞数量过少的原因： 1.取样环节：取样刷过软，取样医生用力过小 2.分泌物过多，取样前没有擦拭干净 3.制片操作环节：抽吸力度过大，转移样本量过少，玻片吸附力差,,传统涂片和液基制片都应具有足够的移形区成分，至少需要10个保存完好的宫颈管上皮细胞或者鳞状化生细胞 单个，成团的颈管细胞都可以做为计数1.子宫全切术后妇女的标本不用计数 2.如果病例诊断为HSIL或者CA，就不用报告有无宫颈管细胞 3.老年萎缩性样本，难以区分基底层，副基底层和鳞状化生细胞,,1.细胞量过多的表现有哪些？ 2.出现的是个别现象还是整体现象？ 3.出现的为整体现象时要考虑哪些因素？,细胞量过多解决思路：,,,细胞量整体过多时要考虑以下因素： 1.吸附力影响 2.转移标本量过多 3.振荡不充分,,1.个别现象还是整体现象？ 2.个别现象考虑什么原因？整体现象考虑什么原因？,细胞分布不均匀解决思路,,个别制片细胞分布不均 1.标本自身原因：粘液，血液过多 2.玻片吸附力不稳定,,整体制片细胞分布不均匀 1.玻片吸附力低 2.技术自身缺陷,,1.个别现象还是整体现象？ 2.染色深了还是染色浅了？ 3.细胞核还是细胞浆的染色问题? 4.影响染色的因素有哪些？,染色问题解决思路,,巴氏染色的几点基本常识： 1.染色原理：物理作用，化学作用。
2.染料分类：碱性染料，酸性染料巴氏染色相关的影响因素 1.时间 2.温度 3.PH值 4.固定是否及时 5. 脱水是否干净,,PH值 当染色效果通过调节时间长短，考虑了温度变化后，仍然不能获得满意效果需要考虑染液自身或者次缓冲液的PH值 在碱性环境下苏木素容易着色，伊红，亮绿，橘黄。