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1、M：morphology,形态学 I： immunology,免疫学 C： cytogenetics ,细胞遗传学 M：molecular biology ,分子生物学 （molecular genetics，分子遗传学）,M：morphology,形态学（FAB分型）,髓系（acute nonlymphocytic leukemia,ANLL; acute myeloid leukemia,AML） （M0 ：急性髓细胞白血病微分化型） M1 ：急性原粒细胞白血病未分化型 M2 ：急性原粒细胞白血病部分分化型 M3 ：急性早幼粒细胞白血病 M4 ：急性粒-单核细胞白血病 M5 ：急性单核细胞
2、白血病 M6 ：急性红白血病 M7 ：急性巨核细胞白血病,淋系（acute lymphocytic leukemia,ALL） L1 ：原幼淋巴细胞以小细胞为主 L2 ：原幼淋巴细胞以大细胞为主 L3 ：大细胞为主，细胞质多，深蓝，蜂窝状,I： immunology,免疫学,C： cytogenetics，细胞遗传学,染色体核型分析（chromosome karyotyping）,M：molecular biology，分子生物学 molecular genetics，分子遗传学,基因突变（gene mutations） 融合基因（fusion genes） BCR-ABL TEL-AML1,
3、流式细胞术,Flow Cytometry，FCM,检测信号及意义：,FSC/SSC 二维点图（dot plot）,中性粒细胞,单核细胞,淋巴细胞,阈值,细胞碎片,二、数据解释及报告,1.定性的描述（阳性或阴性） 2.评估抗原表达强度 3. 区分弱阳性和阴性群体,运用流式分析造血细胞的抗原表达情况，远远多于对形态学结果的简单证实，能够提供大量的信息，可能帮助形态学确认某些诊断，也可能提出之前没有考虑的诊断；在一些典型表现下，流式免疫分型可以在其他方法的辅助之下诊断疾病。 但是，流式免疫分型结果的解释应与临床、形态学、细胞遗传学等其他方法结合使用，综合考虑，做出疾病的诊断与分类。,正常血细胞发育过
4、程的抗原表达规律,按WHO造血和淋巴组织肿瘤分类（2008年版）,Wood B,etc（2007）,急性白血病的免疫表型,急性髓细胞白血病的免疫表型,刘艳荣，等（2010）,急性淋巴细胞白血病的免疫表型,急性系列不明型白血病的免疫表型,慢性淋巴细胞白血病的免疫表型,一、CLL的免疫表型特点,二、FCM检测CLL的预后指标,ZAP-70 ZAP-70+ CLL预后不好。 CD38 是CLL疾病侵袭的重要标志，CD38+ B-CLL患者预后不好。,三、鉴别单克隆B淋巴细胞增多症,单克隆B淋巴细胞增多症（MBL）指健康个体外周血中存在低水平的单克隆性B淋巴细胞增多。,四、鉴别诊断,CLL是以外周血及
5、骨髓中成熟的淋巴细胞增多为主要临床特点的恶性疾病。除了CLL，还包括其他多种生物学上完全不同的成熟B淋巴细胞肿瘤。正确鉴别将有助于预后评估和治疗方案的选择。,免疫分型的抗体组合原则,一、常用抗体,白细胞分化抗原（leukocyte differentiation antigen）是指血细胞在分化成熟为不同谱系、不同阶段及细胞活化过程中，出现或消失的细胞表面标记分子。 1982年，国际统一使用分化群（cluster of differentiation，CD）作为白细胞分化抗原和相应单克隆抗体的命名，CD分子在流式细胞术的血液学应用中发挥着重要作用。 CD1a 表达于皮质胸腺细胞、树突状细胞和L
6、angerhans细胞，主要用于T淋巴细胞白血病及淋巴瘤的免疫分型。表达CD1a的T-ALL为皮质型。 CD2 泛T细胞标志，表达于T淋巴细胞、胸腺细胞和大多数NK细胞上。急性T淋巴细胞白血病（acute T lymphoblastic leukemia，T-ALL）、成熟T细胞增生异常性疾病、急性双表型白血病、原始NK细胞淋巴瘤/白血病、肥大细胞白血病及少部分急性髓细胞白血病（acute myeloid leukemia，AML），尤其是变异性急性早幼粒细胞白血病（acute promyelocytic leukemia，APL）中有CD2表达。 CD3 表达于T淋巴细胞、胸腺细胞和NK细胞
7、。是T细胞增值性疾病中最特异的标志，在成熟和部分初始T细胞中均有表达。胞浆CD3（cCD3）在初始T细胞（前胸腺细胞）上表达，胸腺细胞表达胞浆和（或）膜表面CD3（mCD3）。前体T细胞肿瘤通常不表达mCD3，但cCD3为阳性。,免疫分型的抗体组合原则,CD4 表达于辅助性T淋巴细胞、外周血单核细胞、巨噬细胞和树突状细胞。大多数外周血T细胞淋巴瘤、部分AML、慢性粒单核细胞白血病（acute myelomonocytic leukemia，CMML）、急性单核细胞白血病（AML-M4/M5）、APL和组织细胞肿瘤中伴有CD4表达。少部分T-ALL中有CD4限制性表达，大多数T-ALL同时表达C
8、D4、CD8或者两者同时为阴性。 CD5 主要表达于胸腺细胞、成熟T淋巴细胞和B淋巴细胞亚型。作为一个泛T细胞抗原，CD5可表达于成熟或不成熟T细胞增值性疾病中，包括T-ALL。在肿瘤性T细胞发育过程中，CD5容易丢失。正常人外周血和淋巴组织中存在CD5+B细胞，儿童及年轻患者更多见。CD5主要表达于慢性淋巴细胞白血病（B-cell chronic lymphocytic leukemia，B-CLL）、小淋巴细胞淋巴瘤（small cell lymphocyte lymphoma，SLL）和套细胞淋巴瘤（mantle cell lymphoma，MCL）。少部分弥漫大B细胞淋巴瘤（diffu
9、se large B-cell lymphoma，DLBCL）表达CD5，而且原发性CD5+DLBCL预后较CD5-DLBCL更差。 CD7 主要表达于T淋巴细胞、NK细胞和多能干细胞。在T细胞发育过程中，CD7是最早出现的T细胞标志，且贯穿表达于整个T细胞分化发育过程中。在外周T细胞异常性疾病中，CD7通常表达异常、减弱或消失。T-ALL中CD7阴性表达者仅占2%。此外，CD7还可表达于原始NK细胞淋巴瘤/白血病和AML，而APL和B系淋巴增值性疾病中，CD7表达多为阴性。,免疫分型的抗体组合原则,CD8 表达于杀伤性或抑制性T淋巴细胞、胸腺细胞和某些NK细胞上。大部分大颗粒T淋巴细胞白血病
10、（T-large granular lymphocyte leukemia，T-LGL）和肠型淋巴瘤、少部分外周T细胞增值性疾病表达CD8。极少T-ALL表达CD8，而CD4阴性。 CD9 表达于单核细胞、前B细胞亚群、激活的T细胞、嗜酸与嗜碱性粒细胞、血小板，主要用于急性白血病免疫分型及微量残留病的检测。 CD10 又名急性淋巴细胞白血病共同抗原（common acute lymphoblastic leukemia antigen，CALLA），表达于前B、前T淋巴细胞、生发中心B细胞和成熟粒细胞绝大多数急性B淋巴细胞白血病（B-ALL）、少数T-ALL、多数滤泡性淋巴瘤（follicul
11、ar lymphoma，FL）、部分DLBCL和Burkitt淋巴瘤、少数AML-M5中有CD10表达。成熟粒细胞缺乏CD10的表达常常与骨髓增生异常综合征（myelodysplasia，MDS）相关。在FL和DLBCL中，CD10+者预后更好。 CD11b 表达在单核细胞、粒细胞和部分NK细胞上，成熟B和T细胞不表达。部分急性髓细胞白血病表达CD11b，常代表单核细胞的分化，AML-M0、M1和M2很少表达。APL通常也是CD11b阴性。常用CD11b观察MDS中单核和粒细胞的发育分化。 CD11c 单核细胞和组织巨噬细胞中强表达，粒细胞中表达强度较低，正常激活的CD8+细胞也可表达。CD1
12、1c强表达式毛细胞白血病（hairy cell leukemia，HCL）和AML-M5的典型特征。其他恶性血液病，包括B-CLL，边缘带B细胞淋巴瘤（marginal zone B-cell lymphoma，MZL）、除APL外的其他AML也有CD11c的弱表达。,免疫分型的抗体组合原则,CD13 表达于粒细胞、单核细胞及其前体细胞上。CD13数全粒细胞分子，不同发育阶段的所有粒系细胞均有表达。大多数AML和5%15%ALL可表达CD13。 CD14 是成熟单核细胞的最好标志，大多数CMML和AML-M4中的单核细胞强表达CD14；AML-M5中，原单和幼单细胞通常为CD14阴性或弱表达。
13、正常粒细胞CD14阴性，但慢性增值性疾病，如CML或真性红细胞增多症（polycythemia vera，PV）中的粒细胞部分有CD14的表达上调。 CD15 除原粒细胞外的所有粒细胞、多数单核细胞、少数巨核细胞和组织细胞表达CD15。CML、部分AML和大多数经典型霍奇金淋巴瘤（Hodgkin lymphoma，HL）表达CD15。 CD16 表达于正常的粒细胞、NK细胞和大颗粒T细胞上。T-LGL、NK细胞增生、肝脾T细胞淋巴瘤和部分单核系肿瘤中常表达CD16，而原粒细胞和典型APL细胞中CD16阴性。粒细胞发育异常时常可见CD16表达下调。 CD19 表达于B系细胞核滤泡状树突细胞上，成
14、熟和不成熟B系肿瘤中均表达CD19，良性浆细胞、少数恶性浆细胞也可见CD19的表达，部分AML表达CD19，常与t（8；21）相关。,免疫分型的抗体组合原则,CD20 表达前B细胞晚期和成熟B细胞上，但前体细胞和终末浆细胞不表达。CD20出现在免疫球蛋白（Ig）轻链基因重排和表面Ig表达之间的B细胞表面。多发性骨髓瘤（multiple myeloma，MM）表达CD20者预后不好。 CD22 为泛B细胞标志，其表达与CD22抗体所标记的荧光素有直接关系。利用CD22-PE抗体，可以发现CD22表达于B细胞分化的早期，在成熟期表达强度增加。而利用CD22-FITC抗体，只能发现在成熟的B细胞表面
15、CD22阳性，此时表面CD22可与表面IgM和（或）IgD同时或提前表达。绝大多数TdT+前体B细胞呈胞浆CD22阳性；多数淋巴细胞恶性肿瘤、特别是HCL、脾MZL和幼淋巴细胞白血病（prolymphocytic leukemia，PLL）强表达CD22，而B-CLL中CD22表达较弱。 CD23 表达在正常成熟B细胞上，大多数B-CLL/SLL强表达。CD5+CD23+是B-CLL/SLL的典型特征，而MCL为CD5+CD23-，少部分MCL表达CD23，但表达较弱。部分FL和DLBCL、少数AML-M5和CMML中表达CD23. CD25 表达于激活的T、B细胞，主要表达于HCL、成人T细
16、胞白血病/淋巴瘤（adult T-cell leukemia/lymphoma，ATCL）和少数其他T、B细胞增殖异常的疾病中。变异性HCL不表达CD25，对经典的HCL治疗不敏感，生存期短。 CD30 主要表达于激活的T、B淋巴细胞和单核细胞。经典型HL和间变大细胞淋巴瘤（anaplasic large cell lymphoma，ALCL）可伴有CD30强表达，部分B系淋巴瘤又有CD30的表达。HL患者胞浆CD30水平增高时预后不良标志。,免疫分型的抗体组合原则,CD33 表达髓系前体细胞、粒细胞和单核细胞，正常人的CD33的表达强度有变异。各AML亚型均有CD33的表达，10%20%的ALL也可伴CD33表达。 CD34 表达于早期造血干/祖细胞，是髓系早期细胞和TdT+不成熟淋巴细胞的表面标志。大多数ALM和前体B/T淋巴细胞白血病表达CD34，粗颗粒型APL通常不表达，而细颗粒型APL往往伴有CD34部分表达。 CD36 表达于单核细胞、红细胞、巨核细胞和血小板，与CD64联合分析单核细胞的分化比CD14更敏感。
