《2.2《土壤中分解尿素的细菌的分离与计数》+课件+陈以祥》由会员分享，可在线阅读，更多相关《2.2《土壤中分解尿素的细菌的分离与计数》+课件+陈以祥（27页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与记数,1、思考：,启示：寻找目的菌种时要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。,热泉，因为热泉温度70800C，淘汰了绝大多数微生物只有Taq细菌被筛选出来。,科学家要提取耐高温（930C）的DNA聚合酶应去哪里找？,2、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培养基：,从物理性质看此培养基属于哪类？,固体培养基,在此培养基中哪些作为碳源、氮源？,碳源：葡萄糖、尿素 氮源：尿素,这种培养基对微生物的培养有什么作用？,选择作用,只有能分解尿素，以其作为氮源的的微生物才能生长。,这种培养基叫做选择培养基。,培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿
2、素，以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。,5、培养基选择分解尿素的微生物的原理,1、显微镜直接计数：,利用血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。,.统计菌落数目：,不能区分死菌与活菌； 不适于对运动细菌的计数； 需要相对高的细菌浓度； 个体小的细菌在显微镜下难以观察；,缺点,2.稀释涂布平板法 原理：在稀释度足够高时，微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的，即一个菌落代表原先的一个单细胞。,每克样品中的菌落数(CV)M 其中，C代表某一稀释度下平板上生长的
3、平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(ml)，M代表稀释倍数。,注意事项 为了保证结果准确，一般选择菌落数在30300的平板上进行计数。 为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三个以上的平皿中，经涂布，培养计算出菌落平均数。 统计的菌落往往比活菌的实际数目低。,设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。,.设置对照：,实例：在做分解尿素的细菌的筛选与统计菌落数目的实验时，A同学从对应的106倍稀释的培养基中筛选出大约150个菌落，但是其他同学在同样的稀释度下只选择出大约50个菌落。分析其原因。,原因：土样不同，培养基污染或操作失误(或者是混
4、入了其他的含氮物质),小结：通过这个事例可以看出，实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少的。,方案一：由其他同学用与A同学相同土样进行实验,方案二：将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。,结果预测：如果结果与A同学一致，则证明A无误；如果结果不同，则证明A同学存在操作失误或培养基的配制有问题。,二.实验的具体操作 .土壤取样 从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。 取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。 .制备培养基： 制备以尿素为唯一氮源的选择培养基。,应在火焰旁称取土壤10g。
5、 在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行,分离不同的微生物采用不同的稀释度 原因：不同微生物在土壤中含量不同 目的：保证获得菌落数在30300之间、适于计数的平板,三样品的稀释,为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？,原因：土壤中各类微生物的数量（单位：株/kg）是不同的。例如在干旱土壤中的上层样本中：好氧及兼性厌氧细菌数约为2 185万，放线菌数约为477万，霉菌数约为23.1万。 结论：为获得不同类型的微生物，就需要按不同的稀释度进行分离，同时还应当有针对性地提供选择培养的条件。,.取样涂布,实验时要
6、对培养皿作好标记。注明培养基类型、培养时间、稀释度、培养物等。,如果得到了2个或2个以上菌落数目在30300的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数，如果同一稀释倍数的三个重复的菌落数相差较大，表明试验不精确，需要重新实验。,3自然界中的微生物往往是混杂生长的。人们在研究微生 物时一般要将它们分离提纯，然后进行数量的测定。下 面是对大肠杆菌进行数量测定的实验，请回答有关问题。 实验步骤： (1)制备稀释倍数为102、103、104、105、106的系列稀释液。 (2)为了得到更加准确的结果，你选用_法接种样品。 (3)适宜温度下培养。,稀释涂布平板,结果分析： (1)测定大肠杆菌数
7、目时，在对应稀释倍数为106的培养基中， 得到以下几种统计结果，正确可信的是_，其理 由是_。 A一个平板，统计的菌落数是230 B两个平板，统计的菌落数是220和260，取平均值240 C三个平板，统计的菌落数分别是210、50和520，取平 均值260 D四个平板，统计的菌落数分别是210、300、240和 250，取平均值250,一定要涂布至少三个平板作为重复组，要考虑所设置的重复组的结果是否相当,D,(2)一同学在稀释倍数为105的培养基中测得平板上菌落数的 平均值为234，那么每毫升样品中的菌落数是_( 涂布平板时所用稀释液的体积为0.1 mL)。 (3)用这种方法测定的大肠杆菌密度
8、，实际活菌数量要比测 得的数量_，因为_ _。,2.34108,当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的是一个菌落,多,微生物的培养与观察,五.课外延伸 在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂。培养某种细菌后，如果PH升高，指示剂将变红，说明该细菌能够分解尿素。,测定饮水中大肠杆菌数量的方法是将一定体积的水用细菌过滤器过滤后，将滤膜放到伊红美蓝 培养基上培养，大肠杆菌菌落呈现黑色，通过记述得出水样中大肠杆菌的数量。,大肠杆菌呈 黑色中心 ,有或无金属光泽,大肠杆菌在伊红美蓝琼脂(EMB)上典型特征,计数法,显微镜直接计数（抽样检测法） 稀释涂布平板法 滤膜法,1.使用选择培养基的目的是（
9、 ） A.培养细菌 B.培养真菌 C.使需要的微生物大量繁殖 D.表现某微生物的特定性状与其他微生物加以区别 2.能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分别是( ) A.CO2和N2 B.葡萄糖和NH3 C.CO2和尿素 D.葡萄糖和尿素,实践训练,C,D,3.下列说法不正确的是（ ） A.科学家从7080度热泉中分离到耐高温的TaqDNA聚合酶 B.统计某一稀释度的5个平板的菌落数依次为M1、M2、M3、M4、M5，以M3作为该样品菌落数的估计值 C.设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度 D.同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量最大，种类最多。
10、,B,C,4分离土壤中分解尿素的细菌，对培养基的要求是( ) 加尿素 不加尿素 加琼脂糖 不加琼脂糖 加葡萄糖 不加葡萄糖 加硝酸盐 不加硝酸盐 A B C D,C,5(2012西城模拟)下列关于微生物培养和利用的叙述不正确的是( ) A利用稀释涂布平板法只能分离微生物不能对微生物进行计数 B接种时连续划线的目的是将聚集的菌种逐步稀释获得单菌落 C以尿素为唯一氮源且含酚红的培养基可选择和鉴别尿素分解菌 D用大白菜腌制泡菜的过程中亚硝酸盐含量变化是先增加后减少,A,6(2012赤峰质检)下表为某培养基的配方，有关叙述正确的是( ),A能在此培养基上生长的大肠杆菌，拟核上有抗青霉素的基因 B此培养基是天然鉴别培养基 C此培养基可以用来检测自来水中细菌含量是否符合饮用水标准 D此培养基可以用于选育转基因大肠杆菌菌种的基因工程的操作过程中,D,7(双选)下列是关于“检测土壤中细菌总数”实验操作的叙述，其中错误的是( ) A用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板 D取104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各0.1 mL，分别涂布于各组平板上 C将实验组和对照组平板倒置，27恒温培养2448小时 D确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的实验组平板进行计数,CD,
