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1、44文件编号：LABOPMY020第 页，共 页 版本：A/0生效日期：2008-02-01XXXXXX 医院检验科免疫室分析项目作业指导书 Elecsys E 170/E 411乙甲状腺球蛋白(Tg)1. 分析原理采用双抗体夹心法原理，整个过程18分钟完成。 第1步：20l标本、生物素化的抗甲状腺球蛋白单克隆抗体和钌（Ru）标记的抗甲状腺球蛋白单克隆抗体混匀，形成夹心复合物。 第2步：加入链霉亲和素包被的微粒，让上述形成的复合物通过生物素与链霉亲和素间的反应结合到微粒上。 第3步：反应混和液吸到测量池中，微粒通过磁铁吸附到电极上，未结合的物质被清洗液洗去，电极加电压后产生化学发光，通过光电倍
2、增管进行测定。检测结果由机器自动从标准曲线上查出。此曲线由仪器通过2点定标校正，由从试剂条形码扫入仪器的原版标准曲线而得。2. 标本要求血清：按标准常规方法采集。血浆：肝素、EDTA-K3、枸橼酸钠和氟化钠/草酸-K抗凝均可。标本在15-25度可稳定24小时，28度可稳定3天，-20可稳定1个月。标本只可冻融1次。有沉淀的标本使用前需离心。加热灭活的标本不可使用。标本和质控品禁用叠氮钠防腐。甲状腺球蛋白核实试验（抗甲状腺球蛋白中和试验）甲状腺球蛋白测定可受到患者血清中抗甲状腺球蛋白抗体（抗-Tg）和非特异性因素的干扰。因此结果必须按以下步骤核查：在标本杯中加入200ul标本和50ul R3试剂
3、，混匀，与不加入的标本作平行测定。3. 试剂、校准品、质控品和其他所需材料采用罗氏原装配套试剂。试剂：M： 链霉亲和素包被的微粒（透明瓶盖），1瓶，6.5ml。粒子浓度0.72mg/ml，生物素结合能力： 470ng生物素/mg粒子。含防腐剂。R1：生物素化的抗甲状腺球蛋白单克隆抗体（灰盖），1瓶，10ml。浓度0.7mg/l，磷酸缓冲液0.04mol/l，pH6.1含防腐剂。R2：Ru(bpy)32+标记的抗甲状腺球蛋白单克隆抗体（黑盖），1瓶，10ml。浓度1.0mg/l，磷酸缓冲液0.04mol/l，pH 6.1含防腐剂。R3：甲状腺球蛋白核实试剂（黑盖），2瓶，3ml/瓶，含约800n
4、g/ml甲状腺球蛋白（人）。瓶标签上标有该批次的准确浓度。校准品（货号11820940）：Cal 1 阴性定标液（白盖），2瓶，1.0 ml/瓶，甲状腺球蛋白浓度约为4 ng/ml,人血清，含防腐剂Cal 2 阳性定标液（黑盖），2瓶，1.0 ml/瓶，甲状腺球蛋白浓度约为800 ng/ml,人血清，含防腐剂质控品：Elecsys 通用质控品（PreciContorl Universal）1和2 ,货号11731416其他所需材料： Elecsys 2010、E170、E601或 E411分析仪 Elecsys 2010和 E411分析仪需要： Elecsys 系统缓冲液（ProCell）货号
5、11662988 Elecsys测量池清洗液（CleanCell）货号11662970 Elecsys 添加剂液（SysWash）货号11930346 Elecsys 系统清洗液（SysClean）货号11298500Elecsys E170和 E601分析仪需要： Elecsys 系统缓冲液（ProCell）货号12135019 Elecsys测量池清洗液（CleanCell）货号12135027 Elecsys 系统清洗液（SysClean）货号112985004. 仪器和校准使用仪器：瑞士罗氏诊断公司生产Elecsys 2010/E 170/E 601/E 411全自动电化学发光免疫自动
6、分析仪仪器校准：每批甲状腺球蛋白试剂盒必须用新鲜试剂和甲状腺球蛋白 Cal 1,Cal 2定标一次。另外，以下情况需要再次定标：Elecsys2010/E 170/E601/E 411： 一个月（同一批号试剂） 7天（放置仪器上的同一试剂盒）各种分析仪均适用的情况：根据要求进行定标：如质控结果超出范围时；根据规定进行多次定标。5. 操作步骤（以E 170为例）5.1 校准操作步骤：在编缉各项目的参数时，已经在ApplicationCalib菜单中定义好了定标类型和几点定标。因此在对各项目进行定标时，只需在定标菜单Calibration中进行即可。3.2进入CalibrationStatus菜单
7、，用鼠标选择需定标的项目，再根据需要点单点定标（BLANK键）或两点定标（TWO POINT键）、跨距定标（SPAN键）、多点定标（FULL键），再选择其它项目进行相应选择，最后点SAVE，将定标物放入在CalibrationCalibrator中定义好的位置，点Start，再点Start，仪器开始定标。 在CalibrationStatus菜单中看定标结果，点Calibration Result键看定标结果，点Reaction Monitor键看每个定标物的反应曲线。5.2 样本检测程序： 单个样本输入，在主菜单下选择Workplace- Testslection，在Sequence No栏
8、输入标本号，然后选择该标本所需做的单个项目或组合项目，点SAVE键，样本号自动累加。批量常规标本的输入，在主菜单下选择Workplace- Testslection，在Sequence No栏输入起始标本号，然后选择该标本所需做的单个项目或组合项目，点REPEAT，输入该批标本的最后一个标本号，点OK即可。进样分析，将标本按在Workplace菜单中输入的标本号顺序在样本架上排好，放入进样盘内,按START键，输入该批上机标本的起始标本号，再点START键，仪器自动开始推架检测标本。6. 质量控制用Elecsys 通用质控品（PreciContorl Universal）1和2。质控品1和质控
9、品2至少每24小时或每一次定标后测定一次。质控间隔期应适用于各实验室的具体要求。检测值应落在确定的范围内，如出现质控值落在范围以外，应采取校正措施。7. 计算方法对每一个标本，仪器会自动计算甲状腺球蛋白含量。单位是ng/ml或ug/l。在分析测定结果时，标本中可能存在的抗甲状腺球蛋白抗体的干扰因素应该考虑进去。未处理标本（Tg标本）的测定值和加入甲状腺球蛋白核实试剂（保本R3）的测定值代入以下算式求出回收率：甲状腺球蛋白含量（保本R3）0.8甲状腺球蛋白含量（标本） 100 0.2R3的甲状腺球蛋白含量（见瓶签）正确的回收率应在70-130之间。如果回收率不在此范围内，结果报告应注明。8. 参
10、考范围1.4-78 ng/ml,(5-95)甲状腺完全去除后就不再有甲状腺球蛋白可测出。在这些病人中如有甲状腺球蛋白升高，需要做进一步诊断检查。9. 分析性能 0.100-1000 ng/ml(ug/l)10. 干扰因素该方法不受黄疸（胆红素36mg/dl）、溶血（血红蛋白1.9g/dl）、脂血（脂质2000mg/dl）和生物素5mg/天）治疗的病人，至少要等最后一次摄入生物素8小时后才能采血。不受类风湿因子干扰（2500U/ml）。甲状腺球蛋白浓度高达120000 ng/ml也不出现前带现象。21种常用药物经试验对本测定无干扰。接受过小鼠单抗治疗或诊断的病人可能会出现假阳性反应。偶尔会遇到抗
11、链酶亲和素抗体和抗钌抗体的干扰。甲状腺球蛋白测定可受到患者血清中抗甲状腺球蛋白抗体（抗-Tg）和非特异性因素的干扰。因此结果必须经平衡回收试验核查过。甲状腺球蛋白测定结果应结合病人病史、临床其他检查结果综合起来进行诊断。11. 临床意义甲状腺球蛋白属糖蛋白，分子量约660KD，由两条蛋白链构成。甲状腺球蛋白绝大多数由甲状腺细胞合成并释放进入甲状腺滤泡的残腔中。TSH，甲状腺体内碘缺乏和甲状腺刺激性免疫球蛋白等因素可刺激甲状腺球蛋白的产生。甲状腺球蛋白在外周甲状腺激素T3和T4的合成中起决定作用。它含有约130个酪氨酸残基，在甲状腺过氧化物酶和碘的存在下，一部分可碘化为单-和双-碘酪氨酸（MIT
12、和DIT），并可进一步偶联成T3和T4。甲状腺球蛋白在甲状腺细胞中合成并运输到滤泡的过程中，少量可进入血液。因此，在正常人的血液中可有低浓度的甲状腺球蛋白存在。有低浓度的甲状腺球蛋白存在提示有甲状腺组织的存在。甲状腺全切除术后就不再有甲状腺球蛋白可测出。在先天性甲状腺功能低下患者中，检测甲状腺球蛋白可以鉴别甲状腺完全缺损、甲状腺发育不全或其它病理情况。另一方面，甲状腺滤泡壁的损伤可导致大量的甲状腺球蛋白进入血液，因此，甲状腺球蛋白也被认为是甲状腺体形态完整性的特殊标志物。甲状腺球蛋白也可用于鉴别亚急性甲状腺炎和假的甲状腺毒症。后者，因TSH的抑制，甲状腺球蛋白含量特别低。抗甲状腺球蛋白抗体的存在可导致甲状腺球蛋白测定的错误结果。Elecsys甲状腺球蛋白测定方法采用针对人体甲状腺球蛋白的单克隆抗体。12参考文献编写： 审核： 批准：批准日期： 年 月 日
