实验二 静脉注射氨茶碱血药浓度测定及药动学参数的计算 生物药剂学与药物动力学实验课件 一、实验目的 : 1.掌握紫外双波长法测定氨茶碱血药浓度的方法； 2.熟悉家兔耳缘静脉注射给药后药动学处理原理和方法； 3.熟悉血清中药物提取方法及双波长测定法在血药浓度测定中的应用 生物药剂学与药物动力学实验课件 二、基本原理 1.氨茶碱 • 氨茶碱又名茶碱乙烯双胺，由茶碱与乙二胺缩合而成，氨茶碱能抑制体内磷酸二酪酶，减慢环磷酸腺苷（ cAMP）的分解速度，从而增加其在细胞内的含量，促使支气管平滑肌舒张，有扩张胆管、冠状动脉作用；减少肾小管对电解质的再吸收而呈现强心利尿作用， 一般应用于支气管哮喘、胆绞痛、心绞痛等 2. 静脉注射药物动力学 • 氨茶碱经静脉进入血液，随血液循环进行组织分布，达到平衡后转入消除相血药浓度 -时间曲线呈 二室药物动力学模型 3. 氨茶碱血药浓度的 测定 • 双波长法测定原理： 在酸性条件下，可用有机溶剂从血清中提取出茶碱，并同时沉淀血清蛋白，再用碱液将茶碱从有机溶剂中提出，然后采用双波长 法 进行紫外测定，即测定 λ274和 λ298处的吸光度（ λ274为茶碱和本底，即溶剂、血清的吸收， λ298为本底的吸收 ），△ A= λ274 - λ298 ，可根据标准曲线进行浓度换算。
生物药剂学与药物动力学实验课件 生物药剂学与药物动力学实验课件 所用材料 日本大耳白或新西兰兔 兔子固定器 婴儿称 1.5 ml EP管 其它 :1 ml注射器 ,1.5 ml EP管离心机 ,漩涡振荡器 ,离心机 ,紫外检测仪 ,10 ml离心管 ,三氯醋酸 ,氢氧化钠 ,等 . 氨茶碱注射液 生物药剂学与药物动力学实验课件 三、实验操作 1.氨茶碱标准曲线的绘制： 取 5支 0.5 ml空白家兔血清，分别加入氨茶碱注射液（ 2.5 mg/2 ml）使其浓度分别达到 0.5、 1.0、1.5、 2.0、 2.5 ml， 加 0.1mol/L盐酸 0.2ml、 5%异丙醇氯仿液（抽提液） 5ml，蜗旋混合后， 3000r/min离心 10min吸取 下层氯仿液 4 ml至另一试管中，加入 0.1mol/L NaOH溶液 4ml，蜗旋混合后、 3000r/min，离心 10min吸取 上层碱液 ，以 0.1mol/NaOH溶液做参比，测定其在 λ274和 λ298的吸收度（ A274和 A298 ），计算△ A， 以茶碱浓度为横坐标， △ A为纵坐标描点绘图，用 Excel软件求直线回归方程和相关系数。
2.静脉注射氨茶碱和血药浓度的测定 ①取体重 2.5~3.0kg健康雄性家兔 1只，于耳缘静脉（外侧）注射氨茶碱 10mg/kg（ 2min内注完），另一耳用锐利刀片切割耳缘静脉取血分别在给氨茶碱后 5、 10、 20、 30、 60、 120、 180 min取血约 1.5ml，室温下静置 60 min ② 分离血清： 等 EP管中血液凝固后， 10000 r/min离心 15 s分离血清，各管均取血清 0.5ml于 10ml试管中，加 0.1mol/L盐酸 0.2ml、 5%异丙醇氯仿液（抽提液） 5ml，蜗旋混合后， 3000r/min离心10min ③吸取 下层氯仿液 4 ml至另一试管中，加入 0.1mol/L NaOH溶液 4ml，蜗旋混合后、 3000r/min，离心 10min ④吸取 上层碱液 ，以 0.1mol/NaOH溶液做参比，测定其在 λ274和 λ298的吸收度（ A274和 A298 ），计算△ A ⑤将测得血清样品的△ A代入标准曲线的方程，求得相应的 C， C× 10即为茶碱的血药浓度 以时间（ T）为横坐标， 浓度对数 （ logC）为纵坐标，进行相应的药动学数据处理。
生物药剂学与药物动力学实验课件 3.药动学参数的计算 作时间 t-浓度 C-lgC表，画 lgC – t图，求算 Vc、 K21、 K10、 K12（按课本 P229例 1处理） 4. 本实验 3人一组 每组进行家兔耳缘静脉给药及家兔氨茶碱血药浓度药物动力学数据的计算 四、实验结果： 生物药剂学与药物动力学实验课件 T (min) 5 10 20 30 60 120 180 △ A C (μg/ml) 二、氨茶碱血药浓度 -时间表 一、氨茶碱血药浓度与 △ A的标准曲线 C = 1.84*△ A- 0.00002 C单位 ： mg/ml, r = 1 2 三、药物动力学参数的计算结果 生物药剂学与药物动力学实验课件 作时间 t-浓度 C-lgC表，画 lgC – t图，求算 Vc、 K21、 K10、 K12（按课本 P229例 1处理） 五、讨论与思考 1.氨茶碱家兔体内的药时曲线呈几室模型，如何解释？有几种判断是二室模型的方法，判断的依据是什么？ 2.为什么要测定两个波长下氨茶碱的吸光度并取其差值？ 生物药剂学与药物动力学实验课件 生物药剂学与药物动力学实验课件 二、氨茶碱血药浓度 -时间表 一、氨茶碱血药浓度与 △ A的标准曲线 六、参考结果： 序号 时间（ min） 不同波长下吸光度 △ A 浓度（ mg/ml） 274 nm 298 nm 1 5 0.274 0.174 0.1 0.1841 2 10 0.168 0.098 0.07 0.1289 3 20 0.139 0.075 0.064 0.1178 4 30 0.155 0.093 0.062 0.1141 5 60 0.263 0.207 0.056 0.1031 6 120 0.148 0.092 0.056 0.1031 7 180 0.274 0.174 0.1 0.1841 8 240 0.168 0.098 0.07 0.1289 C单位 ： mg/ml C = 1.84*△ A- 0.00002 生物药剂学与药物动力学实验课件 T (min) 5 10 20 30 60 120 180 240 C (mg/ml) 1.84 1.29 1.178 1.141 1.031 1.031 1.841 1.289 lgC 0.265 0.110 0.071 0.057 0.0133 0.013 0.265 0.110 二、氨茶碱静脉注射后时间 t – C - lgC表 00.20.40.60.811.21.40 30 60 90 120 150 180 210 240lgC家兔氨茶碱耳缘静脉注射后血药浓度对数 -时间曲线 时间 (min) 生物药剂学与药物动力学实验课件 七、注意事项： 一、 注射时不宜快速注射，也不宜过多，否则会引起兔子心悸死亡。
药液注射入血管时，原来红色的血管充满无色的药液则说明注射成功，若药液未进入血管，表现在推注时阻力较大，且在注射部位药液会流出 二、 血液最好自然滴入 EP管中，一般不宜刮取，否则血细胞将破裂，血清颜色变红，也不要用注射器抽取、用吸管吸取 三、 计算浓度时，计算出△ A后，所求得的 C需 × 10，才是真正血清中的药物浓度，因为我们在处理样品时稀释 10倍 四、 血清样品要放置 1h以上再处理才较好，最好 120 min后其充分凝结，少于 1h则离心得到的是血浆，其中纤维蛋白较多，对样品的后处理不佳 五、 用注射器吸取血清 0.5ml，最后一个时间点最好超过 1h，否则血清中蛋白质会凝固，导致血清移取困难 生物药剂学与药物动力学实验课件 七、注意事项： 六、 取血时不要用凉水润湿取血部位 七、 若离心用 10000 r/min离心血清，当转速显示到达 10000r/min后， 15s即可 八、 若血清与氯仿乳化，可用超声仪超声破乳 九、 血清样品测定时，可用空白对紫外仪调零，波长分别用 274nm、 298nm调零，之后可用同一比色杯样品分别在两个波长处测定读数，无需重新调零取△ A。
十、 实验结束后，兔笼应清洗干净，刀片和注射器（ 1ml）要回收 [1] 崔福德 .药剂学 .人民卫生出版社 .第 7版，北京 .2013年 11月 . [2] 刘建平 .生物药剂学与药物动力学 .人民卫生出版社 .第 4版，北京 .2012年 5月 . [3] 杨伟，等 .生物药剂学与药物动力学实验 .自编教材 . 2013年 . 生物药剂学与药物动力学实验课件 八、参考文献： 。