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1、课题1 微生物的实验室培养,专题2 微生物的培养与应用,一、培养基,人们按照微生物对营养物质的不同需求，配置出供其生长繁殖的营养基质称培养基。,培养基一般都含有_、_、_、_等；满足微生物生长对_、_及_的要求。,概念：,种类：,成分：,固体培养基 液体培养基,（按物理性质分）,水,碳源,氮源,无机盐,特殊营养物质,氧气,pH,获得纯净培养物的关键_,2.实验室常用无菌技术：,杀菌、消毒,较为温和,强烈,部分微生物,全部微生物,不能,能,1.概念：,二、无菌技术,在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法技术称为无菌技术,是防止外来杂菌的入侵,1、煮沸消毒法:100煮沸5-6min 2、巴氏
2、消毒法：70-75 下煮30min或 80 下煮15min 3、化学药剂消毒法:用75%酒精进行皮肤消毒;氯气消毒水源等。 4、紫外线消毒：紫外线照射接种室、接种箱或超净工作台30min。,(1)消毒的方法：,常用的消毒与灭菌的方法,(2)灭菌的方法：,常用的消毒与灭菌的方法,1、灼烧灭菌：接种工具（金属）、试管口、瓶口等,2、干热灭菌：干热灭菌箱玻璃器皿、金属工具 3、高压蒸气灭菌：高压蒸汽灭菌锅,1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？,答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。,2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适方
3、法。,答：（1）（2）需要灭菌，（3）需要消毒。,（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基,三、微生物的实验室培养,（二）纯化大肠杆菌,平板划线法和稀释涂布平板法,倒平板操作,2. 答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。,1. 答：用手触摸锥形瓶，温度下降到刚刚不烫手时即可开始倒平板。,倒平板操作的讨论,3. 答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。,4. 答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不用。,.纯化大肠杆菌,平板划线法和稀释涂布平板法。,微生
4、物常用接种方法有：,1.平板划线的操作方法,平板划线的操作,一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的； 二是存留在划破处的单个细胞无法形成规则的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。,平板划线法获取的微生物经恒温培养后的生长情况,1、为什么在操作的第一步以及划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环？,平板划线法的讨论,答：（1）第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数
5、目逐渐减少，以便得到菌落。（2）划线结束后仍然要灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。,2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？,答：以免接种环温度太高，杀死菌种。,答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。,2.稀释涂布平板法稀释涂布平板法操作过程分两个步骤，即系列稀释操作和涂布平板操作。,101,102,103,104,105,106,系列稀释操作,涂布平板操
6、作讨论,涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应如何进行无菌操作？,答：应从操作的各个细节保证“无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。,稀释涂布平板法获取的菌落,1.答：未接种的培养基在恒温箱中保温12 d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。,2.答：如果接种成功的话，在培养基的表面可观察到大小、形状、颜色相似的菌落。,四、结果分析与评价,3.答：培养12 h与24 h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同。随着时间的延长、菌落的不断生长，使菌落不断增大。,4.答：无菌操作未达到要求：可能是培养基灭菌不彻底；可能是接种时发生了污染；也可能是在培养的过程中受到了污染。,1.试管低温临时保藏,2.甘油管长期保藏,五、课题延伸-菌种的保藏,
