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1、动物细胞工程,一、动物细胞培养,1、过程,动物组织,胰蛋白酶或胶原蛋白酶,剪碎,单个细胞,制成细胞悬液,装瓶原代培养,接触抑制 ？,分瓶传代培养,胰蛋白酶,幼龄或动物胚胎,细胞株：50代内，遗传物质不变,细胞系：50代后，遗传物质改变（癌变）,2、原理：,动物细胞有丝分裂,3、条件：,无毒、无菌 营养 温度和pH 气体环境,4、应用：,大规模生产蛋白质制品,检测有毒物质,医学上应用于皮肤移植，或病理、药理研究,一 动物细胞培养,比较,植物细胞和动物细胞培养的比较,比较项目,原理,植物组织培养,动物细胞培养,培养基性质,培养基特有成分,培养结果,培养目的,一 动物细胞培养,比较,植物细胞和动物细
2、胞培养的比较,比较项目,原理,植物组织培养,动物细胞培养,培养基性质,培养基特有成分,培养结果,培养目的,细胞的全能性,固体培养基,蔗糖、植物激素,植物体,快速繁殖、培育 无病毒植株等,细胞增殖,液体培养基,葡萄糖、动物血清,细胞群体,获得细胞或 细胞产物,二、动物细胞核移植和克隆动物,1、某植物非常具有观赏价值，你采取什么方法来繁殖后代，使它们继承该植物的全部优良性状？ 、1997年，美国威斯康星州的一个奶牛场有一头名叫卢辛达的奶牛，年产奶量为30.8t，创造了世界奶牛产量的最高记录。目前世界各国高产牛奶场的奶牛，平均每年产量为十几吨，而我国平均水平仅有34吨。你能想办法繁殖卢辛达的后代，使
3、年产奶量为30.8t吗？,问题讨论,、动物的克隆与植物克隆一样吗？,、用动物体细胞进行克隆的过程,其实际操作过程是什么？,不,细胞质,细胞核,细胞核移植,多莉羊的培育过程,动物克隆过程的实际是细胞核移植,动物体细胞核移植概念:,将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新胚胎最终发育成动物个体。用核移植的方法得到的动物称为克隆动物,核移植,胚胎细胞核移植,体细胞核移植（难度高）,受体细胞：M期的卵母细胞,1、过程,思考题,、核在进行体细胞核移植之前，为何要去掉受体卵母细胞的核？,为使核移植动物的遗传物质全部来自有利用价值的动物提供的细胞。,
4、、用于核移植的供体细胞一般都选用传代10代以内的细胞，为什么？,10代以内的细胞保持一般保持正常二倍体的核型，未突变,3、细胞核移植生产的克隆动物是对体细胞供体动物进行了100%的复制吗？为什么？,不是，克隆动物绝大部分DNA来自供体细胞核，但核外还有少部分DNA（如线粒体DNA）来自受体卵母细胞,2、应用：,畜牧业 促进优良畜群繁殖 保护濒危物种 医疗,克隆,生殖性克隆,治疗性克隆,优点：,解决供体器官不足的问题,避免免疫排斥,过程,反对,体细胞核移植技术存在的问题：,1、许多克隆动物表现出遗传和生理缺陷，如体型过大，异常肥胖，发育困难，脏器缺陷，免疫失调等。 2、成功率低,如果将牛的细胞与
5、植物细胞杂交，得到绿色的小奶牛，那岂不是只要晒晒太阳就可以挤出牛奶啦！,动物细胞也能融合吗？,动物细胞融合与单克隆抗体,三、动物细胞融合,细胞融合是正常的生命活动,两个细胞正在融合,受精作用,不同DNA的两个细胞,灭活病毒诱导细胞融合,融合后的细胞进行有丝分裂,1、过程,思考题,1、植物体细胞杂交时首先应用什么方法去掉细胞壁？,酶解法，如纤维素酶或果胶酶,2、动物细胞融合时需要进行去壁处理吗？为什么？,无需，因为动物细胞无细胞壁,3、植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的方法有哪些？,离心、电激等物理方法；PEG等化学方法,思考题,4、动物细胞融合能利用上述两类方法吗？还有其他方法吗？,能 还可
6、以利用灭活的病毒进行诱导,5、植物体细胞杂交过程应先进行原生质体融合再进行组织培养形成完整的个体，动物细胞融合后能形成杂种动物个体吗？,不能,6、你能归纳出什么叫做动物细胞融合吗？,2、概念,动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞形成一个细胞的过程,3、原理：,细胞膜的流动性,4、应用：,利于研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等 诱导形成杂交瘤细胞，制造单克隆抗体。,主要用于制备单克隆抗体,获得杂种植株,用途,物理、化学方法（同左）,灭活的病毒,物理（离心、振动、电刺激）,化学（聚乙二醇）,诱导方法,使细胞分散后诱导细胞融合,去除细胞壁后诱导原生质体融合,细胞融合的方法,细
7、胞膜的流动性,细胞膜的流动性、,植物细胞全能性,原理,动物细胞融合,植物体细胞杂交,比较项目,植物、动物细胞融合的比较,抗体分布在哪里？如何得到抗体？,四、单克隆抗体,抗体的作用？,抗体是由何种细胞产生的？,抗原不纯,抗体不纯,2、特点：特异性差、纯度低；产量低、反应不够灵敏,二、单克隆抗体,（一）传统制备抗体的方法,设计方案： 一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 小鼠骨髓瘤细胞能无限增殖,杂种细胞,浆细胞不能无限增殖，有没有哪种细胞可以无限增殖？,是否有细胞既能产生抗体又能无限增殖？有没有办法可以获得这样的细胞？,1、过程,细胞融合、筛选,足够数量的、能产生特定抗体的细胞群,单克隆抗体,（选
8、择性培养基）,选择性培养基作用 使亲本细胞和具有同种核的杂交细胞不能存活而杂交瘤细胞可存活,诱导其融合的方法有哪些？,抗体检验阳性,细胞系（无限繁殖,与常规抗体相比，单克隆抗体,2、优点：,特异性强,灵敏度高,产量高,纯度高,单克隆抗体实质：,培养（克隆）单一种细胞产生特定的一种抗体,3、应用：,（1）、临床诊断：具有_的优点,（2）、作为载体，运载抗癌药物，形成“生物导弹”治疗肿瘤,准确、高效、简易、快速,植物组织培养与动物细胞培养的比较,植物细胞的全能性,细胞的增殖(全能性没得表达),固体，营养物质，激素,液体，营养物质，动物血清,培育成植株,培育成细胞系或细胞株,快速繁殖，培育无病毒植株
9、等,获得细胞产物或细胞,下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌的实验方案,制备单克隆抗体,B细胞,抗体,细胞融合,灭活病毒,双亲细胞,分泌抗体,无限增殖,原代,传代,50,1.动物细胞工程技术的基础是：（ ）A动物细胞融合 B胚胎移植C动物细胞培养D核移植,在动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确的是（ ）A结果是相同的B杂种细胞的形成过程基本相同C操作过程中酶的作用相同D诱导融合的手段相同,前者产生细胞群，后者产生个体,前者用胰蛋白酶分散细胞，后者用酶解法去除细胞壁,前者还用灭活的病毒作诱导法,. 单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（ ） 淋巴细胞 小鼠骨髓瘤细胞 B淋巴细胞自身融合细胞 小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞 杂交瘤细胞 A B C D,C,
