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1、有机磷对雄性淡水鱼生殖毒性的研究报告人：陈玉明 专业：细胞生物学 研究方向：生殖细胞 导师：胡家会聊城大学2008级硕士研究生开题报告主要内容n一、选题背景n二、选题的目的和意义n三、研究现状和发展趋势n四、课题主要研究内容n五、技术路线n六、可行性分析n七、创新点n八、预期研究成果 n九、学位论文工作计划安排一、选题背景n1、农药对环境的污染的问题越来越受到人们的关注n2、有机磷农药在农药的生产和使用中占主导地位n3、有机磷可通过多种方式对生物（包括人类）产生 生殖毒性作用n4、生物检测在环境监测中的作用越来受到人们的重 视n5、用精子细胞检测环境毒物是生物检测的一种新方 法二、选题的目的和
2、意义 1、选题目的 本课题通过急性和慢性毒性实验，从组织 水平、细胞水平和亚细胞水平反映有机磷 对雄性淡水硬骨鱼生殖毒理效应，并对其 作用机制进行探讨 。二、选题的目的和意义 2、选题的意义 2.1、可为淡水鱼养殖和资源保护提供参考； 2.2、可为相关法律法规的制定提供提供科学依据 ； 2.3、可为男性不孕症的预防和治疗提供依据； 2.4、可为环境污染物的检测和环境保护提供依据 ； 2.5、有助于生物检测检测技术的完善和应用； 三、研究现状和发展趋势 1、研究现状 国内外具有研究，是环境毒理研究的热点 1.1、国外：开始的较早，研究的层次较深 、水平较高，但受试物以除草剂和灭草剂 为主。 1.
3、2、国内：起步较晚，研究的人较少，研 究的范围较狭窄，层次相对较低，受试物 多是单一类型，并以杀虫剂类为主。三、研究现状和发展趋势 2、发展趋势 2.1、由受试物单一类型的毒性研究向多种 类型联合毒性作用发展 2.2、由单一层次向从多层次、多角度方面 的研究发展整体，组织，细胞，亚细胞，分子水平； 神经毒性，内分泌毒性，生殖毒性； 酶干扰剂，氧化作用，细胞溶剂；四、课题主要研究内容 1、材料与方法： 以玫瑰无须鲃、泥鳅等淡水鱼实验材料， 以敌敌畏阿维菌素等有机磷农药为受试物 ，应用计算机辅助分析（CASA）、分光光 度法、石蜡切片、超薄切片等技术方法进 行研究。四、课题主要研究内容 2、有机磷
4、对淡水鱼精子活力的毒理作用 在显微镜下观察精子运动，并用计算机辅助分析系统 (CASA)摄影，进行数据分析，计算出运动率、速度，并 记录运动时间；最后用统计软件比较分析，探讨有机磷对 精子活力的影响及作用机理。 3、有机磷对淡水鱼雄性生殖系统形态和结 构的毒理作用 测定精巢/体重 比值 显微观察 亚显微观察四、课题主要研究内容 4、有机磷对淡水鱼雄性生殖系统氧化损伤 测定精细胞中超氧化物歧化酶(S0D)、硫代巴比妥酸值1 （TBARS）：实验溶液对精液处理后，离心，除去上清液得到精子细胞，采用物理 或化学方法使精子细胞充分破坏，再离心获得上清液，用分光光度计 进行测定。五、技术路线 1、有机磷
5、对雄性生殖系统形态结构影响饲养鱼解剖取精巢称重计算精巢/体重比值固定逐级脱水透明浸蜡切片染色镜检脱水双固定包埋染色切片组织水平细胞水平亚细胞水平说明：五、技术路线 2、有机磷对精子运动的影响2-4取精液制精子悬液药物处理饲养鱼显微观察运动率运动时间运动速度显微观察五、技术路线 3、有机磷对淡水鱼精子的氧化损伤 离心饲养鱼取精液药物处理细胞破裂离心用分光光度计测定超氧化物歧化酶(S0D)硫代巴比妥酸值（TBARS）五、技术路线 4、染色体核型分析5饲养鱼PHA处理秋水仙碱处理解剖取肾脏和精巢制细胞悬液离心水洗离心低渗处理离心固定滴片染色观察六、可行性分析 1、生命科学学院有石蜡切片机、正置荧光
6、显微镜（CASA）、倒置荧光显微镜（ CASA）、分光光度计、离心机等设备，完 全能满足实验的需要 2、电镜观察在青岛大学医学院完成 3、本试验有一定的研究基础和较成熟的实 验技术 4、有相关研究文献可供参考 5、指导教师和同学们帮助，一定能完成。 七、创新点 1、生物实验的新材料玫瑰无须鲃是近几年才使用的一种生物学研究的新材料，国内外研究较少， 由于它的优点被广泛应用于生殖、发育及毒理学等方面。 以泥鳅作为实验材料在生物学领域更是少见，但是它的营养价值和经济价值 ，以及其特有的生物学特性正越来越受到人们的重视。 有机磷农药种类很多，多达160余种，而当前的研究却不是很多。 2、玫瑰无须鲃染色
7、体核型分析还未见到有 人研究 3、精子生物学在毒理学方面的应用时间不 长 4、农药联合毒性的研究较少八、预期研究成果 筛选2-3种有机磷农药影响玫瑰无须鲃鱼和泥鳅精 子活力的最低浓度， 并测定精巢/体重比的变化情况，从显微、亚显微 水平揭示有机磷农药对鱼精子的毒性作用 探索玫瑰鱼染色体核型分析方法，进一步揭示玫 瑰鱼的遗传信息。 从生化角度研究环境有机磷对精子细胞的氧化损 伤，并对有机磷生殖毒性的作用机制进行探讨。 发表研究性论文2-3篇。 九、学位论文工作计划安排 序号工作阶段名称及内容 起止日期 1查阅 文献：实验 前参考、试验 中改进、 试验 后论文写作2008.9-2011.42有机磷
8、对淡水鱼精子运动的影响2009.3-2010.3 3玫瑰无须鲃 染色体核型分析2009.11-2010.2 4有机磷对淡水鱼雄性生殖系统氧化损伤 的研究2009.12-2010.45有机磷对淡水鱼雄性生殖系统形态结 构 的影响2010.2-2010.106前期未按时完成的工作 2010.11-2011.3 7数据分析、学术论 文写作 2010.1-2011.1 8学位论文的写作2011.1-2011.4 参考文献1 Bingsheng Zhoua,b, Wenhua Liu et al. Exposure of spermatozoa to duroquinone may impair rep
9、roduction of the common carp (Cyprinus carpio) through oxidative stress, Aquatic Toxicology 77 (2006) 136-142 2胡家会,张士崔,张永忠等.水胺硫磷对玫瑰无须鲃精子的体外毒性作 用.高技术通讯.2005,15:104-107 3 Mokhtar I. Yousef , Kamel I. Kamel et al. An in vitro study on reproductive toxicity of aluminium chloride on rabbit sperm: The pro
10、tective role of some antioxidants. Toxicology 239 (2007) 213223 4Mokhtar I.Yousef , Kamel I. Kamel et al. An in vitro study on reproductive toxicity of aluminium chloride on rabbit sperm: The protective role of some antioxidants.Toxicology 239 (2007) 213223 5王小丽,郑元升,戴云 ,蒲含林.巨石斑鱼染色体核型分析. 水利渔业 .2008,22:62-63专家提问 请各位老师、同学提问谢谢大家！
