实验动物饲养与管理

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1、实验动物饲养与管理江西中医学院 罗小泉实验动物饲养管理内容 微生物控制及环境设施管理 饲料营养管理 育种繁殖管理 常用实验动物的日常管理一微生物控制及环境设施管理1、实验动物按微生物等级分类2、普通动物的概念3、清洁级动物的概念4、无特定病原体动物的概念5、无菌动物的概念6、屏障环境的管理1、实验动物按微生物等级分类 普通动物 清洁动物 无特定病原体动物(SPF动物) 无菌动物2、普通级动物的概念普通级动物 conventional (CV ) animal是微生物和寄生虫控制级别最低的实验动物；是微生物和寄生虫控制级别最低的实验动物；要求不携带主要的要求不携带主要的人兽共患病病原人兽共患病病

2、原、动物烈性传动物烈性传染病病原染病病原及及人兽共患寄生虫人兽共患寄生虫，如沙门菌、结核分，如沙门菌、结核分枝杆菌、狂犬病病毒和兔出血症病毒等。枝杆菌、狂犬病病毒和兔出血症病毒等。普通级动物有豚鼠、地鼠、兔、犬和猴等，普普通级动物有豚鼠、地鼠、兔、犬和猴等，普通级小鼠和大鼠等级被取消。通级小鼠和大鼠等级被取消。3、清洁级动物的概念清洁动物清洁动物 clean (CL) animalclean (CL) animal是根据我国国情而设立的等级动物，除普通是根据我国国情而设立的等级动物，除普通级动物应排除的病原和寄生虫外，不携带对动物级动物应排除的病原和寄生虫外，不携带对动物危害大和对科学研究干扰

3、大的病原和寄生虫，如危害大和对科学研究干扰大的病原和寄生虫，如小鼠肝炎病毒、仙台病毒等。小鼠肝炎病毒、仙台病毒等。清洁动物有小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠、兔等清洁动物有小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠、兔等动物。犬和猴没有清洁级。动物。犬和猴没有清洁级。4、无特定病原体动物的概念无特定病原体动物（无特定病原体动物（SPFSPF动物）动物）specific pathogen free (SPF) animalspecific pathogen free (SPF) animal通常被称为通常被称为SPFSPF动物，除动物，除清洁动物应清洁动物应 排除的病原和寄生虫外，排除的病原和寄生虫外，不携带主要潜在不携带主

4、要潜在 感染或条件致病和对科学实验干扰大的病感染或条件致病和对科学实验干扰大的病 原和寄生虫。如绿脓杆菌等。原和寄生虫。如绿脓杆菌等。SPFSPF动物包括小鼠、大鼠、豚鼠、地动物包括小鼠、大鼠、豚鼠、地 鼠、兔、犬和猴等。鼠、兔、犬和猴等。5、无菌动物的概念 无菌动物germ free (GF) animal指无可检出一切生命体的动物。其来源是普通指无可检出一切生命体的动物。其来源是普通动物经无菌剖腹产手术，幼子在无菌隔离器中人动物经无菌剖腹产手术，幼子在无菌隔离器中人工哺育或由其他无菌动物代乳饲育而成。工哺育或由其他无菌动物代乳饲育而成。“ “无菌无菌”只是一个相对概念，仅仅指以目前的只是一

5、个相对概念，仅仅指以目前的技术手段未能查出微生物。技术手段未能查出微生物。6.屏障环境管理 严格规定人员、物品、动物的流向 合理选择消毒方法 积极开展各项指标的检测工作 认真做好屏障环境内外的清洁消毒工作 加强人员队伍建设和管理 有效的检测措施严格规定人员、物品、动物的流向 人员流向:外环境第一更衣淋浴第二 更衣洁净走廊实验室次洁净走廊 缓冲间外环境 动物流向:购买SPF 级动物检疫/ 观察室 实验室 次洁净走廊缓冲间解剖室 物品流向:洗消间高压灭菌设备/ 渡槽/ 传 递窗消毒物品储存室实验室次洁净 走廊缓冲间外环境合理选择消毒方法 饲养笼盒、饮水瓶、垫料、衣服和各种实 验用具采用高压蒸汽灭菌

6、器消毒; 动物食用饲料采用放射性照射(60Co ) 的消 毒方法; 工作人员用的拖鞋等采用渡槽浸泡的方法 (0.15 %灭菌净溶液) 消毒; 对于不耐热、不耐水、不耐酸碱和不能进 行放射性照射的物品采用传递窗紫外线消 毒。 积极开展各项指标的检测工作 经常对空调通风系统进行保养,每12 周更 换排风口过滤膜,每两个月更换一次初效和 中效过滤袋,每年更换一次高效过滤膜; 每半年检测一次外购饲料的微生物指标和营养成分,每半年检测一次纯净水的微生物指标;每天对温湿度、压差等进行监测。 认真做好屏障环境内外的清洁消毒工作 保持屏障环境内的洁净度是SPF 级动物房正常运行的关键。 每天的实验和饲养工作完

7、成后,对室内环境进行清洁,每周3 次用灭菌净消毒水对整个屏障系统的内环境和饲养笼架进行消毒。 屏障系统动物实验室的管理者 屏障系统动物实验室的使用者屏障系统动物实验室的管理者 专职技术人员（包括实验管理人员,设施设备维护人员和试验操作人员） 既要掌握对屏障系统动物实验室生物安全性防护 知识和维护、操作技术 又要有一种对屏障系统动物实验室的高度责任心, 随时关注系统的安全和正常运行,及时发现和解决问题。 屏障系统动物实验室的使用者 进行项目研究的科研人员 ： 必须接受专职的管人员对其进行培训 了解屏障系统的流程、路线,人员、物品和动物进出屏障系统动物实验室的方式方法,注意事项 有效的检测措施 环

8、境设施的检测 日常消毒灭菌物品的检测环境设施的检测 主要参数包括温度、湿度、噪音、光照、 室内风速、氨浓度、室内换气次数、各区 域压力差等。要根据检测的指标调整或适 时更换维护系统的设备, 对多项环境参数的 正常维持都有着重要的作用。 温、湿度和压差需每日记录,根据它们的变 化,需要对风阀或空气过滤器进行更换处理 。环境指标的全面系统检测一般一个季度 检测一次。日常消毒灭菌物品的检测 双扉高压真空灭菌器,用于所有可经高压灭菌的物品; 消毒液渡槽,用于可浸泡消毒的物品; 紫外线灭菌渡舱,用于不能高压,又不能浸泡的物品。 加强人员队伍建设和管理 人员污染是洁净动物设施失败的重要原因。 人与动物直接

9、接触之间的防护仅仅是洗澡和穿上灭菌衣、戴上手套和口罩。裸露部分很容易对环境造成污染。 工作人员容易出汗，偶尔也打喷嚏，但灭菌衣、口罩并不具备初、中、高效过滤功能，也容易对环境造成污染。二.饲料营养管理1、啮齿类实验动物的营养需要2、实验动物饲料的质量标准3、饲料的质量要求4、饲料对实验结果的影响实验动物的食性与营养需要实验动物的食性与营养需要：* 食性不同种动物摄取食物的习性。* 依食性将动物分为三大类：草食性动物：豚鼠、兔、羊；肉食性动物：狗、猫；杂食性动物：小鼠、大鼠、金黄地鼠、猴。实验动物的基本营养需要实验动物对蛋 白质、碳水化合物、脂类、矿物质、维生素和水 等营养素的日平均需求量。1、

10、啮齿类实验动物的营养需要大鼠、小鼠 饲料蛋白质占18%-20%左右，粗 纤维5%，粗脂肪4%。维生素A需求量为每公斤饲料含 7000-14000IU，通常以加入1%的清鱼肝油来满足。 应适当补充维生素E，每公斤饲料含60-120IU，以提 高受孕率。金黄地鼠 饲料蛋白质占21%24%，动物性蛋白 尚应含相当比例，主要来源于鱼粉 和鸡蛋。植物性蛋白主要来源于黄 豆和豆粉。此外, 应喂饲一些白菜 、萝卜、黄瓜等青饲料。豚鼠 饲料蛋白质占17%-20%左右，尤其 对精氨酸的需要量较高。由于它的盲肠较发 达，因而对纤维素亦有较高需要，应占饲料 总量的10%-15%左右。豚鼠体内不能合成维生 素C，因此

11、要在饲料中添加。一般每公斤饲料 含维生素C 1500mg，妊娠豚鼠每公斤饲料含 维生素C 1800mg。实际喂养时，主要可喂饲 苜蓿草粉、干草粉和(或)绿色蔬菜等。兔新生家兔一般要哺乳一个月左右才 能开始吃饲料。家兔饲料中蛋白质应占 14%-17%，粗脂肪占3%，粗纤维占10%- 15%以上。饲料中应含大量干草,以补足 其对粗纤维的基本需要量，从而可防止 家兔因粗纤维摄入不足而导致腹泻。犬和猴的营养需要犬 为肉食性动物，其饲料中 应含2024%蛋白质，4.5%-6.5%粗脂 肪，3%粗纤维。注意添加维生素A、 D、B1、B2, 特别是维生素E。猴 为杂食性动物，其饲料中的蛋 白质应占16%21

12、%，粗脂肪4% 5%。 猴体内不能合成维生素C，其需求量为 每公斤饲料含1700-2000mg，因而要注 意补充。在人工喂养时， 应以 面粉、鸡蛋、食盐、骨粉 制作的蛋糕或饼干作为 主食，此外还应有苹果、 香蕉、蔬菜等作为辅食。2、实验动物饲料的质量标准饲料的种类及营养特点* 按来源-植物性和动物性饲料。* 按物理性状-粉状饲料、颗粒饲料、膨化饲料 等。* 按其营养特性-粗饲料、青绿和青贮饲料、能 量饲料、蛋白质饲料、矿物质饲料、维生素饲料、添 加剂。* 粗饲料-干苜蓿、干青草粉、稻草等。* 青绿和青贮饲料-天然牧草、树叶等。* 能量饲料-玉米、高粱、大麦等。苜蓿苜蓿以“牧草之王”著称，不 仅

13、产量高，而且草质优良，各种 畜禽均喜食。最适宜的条件是土 质松软的沙质壤土,在陕西、河北 、山西、山东、天津、北京地区 ，以秋播最好。 鼠料兔料犬膨化饲料* 蛋白质饲料-植物性蛋白饲 料如大豆、黑豆等, 动物性蛋白 饲料有肉粉、鱼粉、骨粉等。 * 矿物质饲料-食盐、石灰石 、贝壳等。 * 维生素饲料-酵母、鱼肝油、 各种人工合成或提纯的单一维生素 、复合维生素制剂等。 * 添加剂-防腐剂、抗氧化剂、着色剂、激素等非营养性添加剂。 大豆豆粕鱼粉3、饲料的质量要求1. 原料来源清楚，应不含化学药品，无 虫害、细菌及霉菌污染，不发生变质，农药残 留不应超过国家规定的标准。2. 对于SPF动物，饲料要

14、求无菌：而无菌 动物和悉生动物的饲料则要求完全无菌。3. 选择品质新鲜的原料进行加工。4. 贮存原料的仓库要保持通风、低温、 干燥，以防霉变产生黄曲霉素。5. 饲料经配制加工后，应严密包装，以 防蝇、鼠、昆虫、细菌等污染。4、饲料营养素对动物实验结果的影响 影响动物采食量而影响实验结果 实验动 物的采食量，以其能达到对能量的需求量 为标准。饲料的原料组成影响饲料中能量 的含量，必然影响动物的采食量，而动物 采食量多少又对某些实验结果产生影响。 例如：某些实验的药物是掺在饲料中给予 的，如果动物采食量发生变化，动物摄人 药物的量也就会发生变化，最终影响实验 结果。 影响动物生长发育 在生物医学研

15、究中，以 动物生长发育(包括体重、体型和组织器官 的发育等)为指标的实验是常见的。如果日 粮中营养素含量水平过高或过低，势必影 响以生长发育指标的实验结果。例如：SD 大鼠日粮蛋白水平低于14时，极显著降 低肝脏重量。 影响动物生理生化指标而影响实验 主要是实 验动物饲料中所含的营养素经过动物的消化、 吸收后对动物的生理状态产生影响。当饲料中 某种营养素含量发生改变时，必然导致动物血 液及某些脏器、组织中改种营养素含量的改变 ，并对与之相关的生理生化指标造成影响。当 这种改变加深或持续时间较长时，就会造成动 物对该种营养索的缺乏或中毒。 影响动物营养而影响实验结果 与营养相关研 究中动物日粮的控制问题日益受到重视，特别 是营养与免疫，营养与美容，营养与衰老已成 为研究热点。三 .育 种 繁 殖管理1、实验动物育种繁殖方法2、近交系的育种保种繁殖方法3、封闭群动物的育种繁殖方法1、实验动物繁殖主要有三种方法 近亲繁殖 异系杂交 随机繁殖近交系动物的育种繁殖 近交系(inbred strain)动物经至少连续20代的全同胞兄妹之间或亲代与子代之间交配培育而成的动物。如BALB/c小鼠、C57BL/6J小鼠等。 近交系(inbred strain)动物育种原理 是人为地使动物连续进行近亲交配， 逐代提高基因纯合率并固定