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1、The analysis of vitamins Chapter 9 维生素类药物的分析 第九章The analysis of vitamin AThe analysis of vitamin EThe analysis of thiamine (B1)The analysis of L-ascorbic acid(C)The structures of other vitamins 基本要求 掌握维生素A的结构，主要化学性质、鉴别反应 及含量测定中的紫外分光光度法 了解三氯化锑比色法 掌握维生素E的结构、主要化学性质、鉴别反应 及含量测定中的气相色谱法 了解其他含量测定的方法 掌握维生素B1
2、结构、性质、鉴别试 验及含量测定方法中的非水滴定法 了解其他含量测定方法 掌握维生素C结构、性质、鉴别试验 及含量测定中的碘量法 了解其他含量测定方法 了解HPLC在复方维生素测定中的应 用 Fundamental requirementMastering the structures, the main chemical properties, identification tests and the application of UV spectroscopy in assays of vitamin A. Understanding the colorimetric method of
3、antimonic chloride. Mastering the structure, the main chemical properties, identification tests and the application of GC in assays of vitamin E. Understanding other assays of vitamin E.Mastering the structure, properties, identification tests and the non-aqueous titration of thiamine. Understanding
4、 other assays of thiamine.Mastering the structure, properties, identification tests and the iodometric titration of L-ascorbic acid. Understanding other assays of L-ascorbic acid. Understanding the application of HPLC in compound vitamins analysis.The analysis of vitamin AStructure and properties St
5、ructure The physical and chemical propertiesIdentification testsAssays Ultraviolet absorption method (three-point geometric correction method ) colorimetric method of antimonic chlorideSection1v StructuresRetinol and its esters 共軛多烯侧链的环己烯Crystalform REmpiricalformulaMolecularweightMeltingpointH（Reti
6、nol） COCH3 (Retinyl acetate) COC15H31 (Retinyl Palmitate) C20H30O C22H32O2 C36H60O2 286.44 328.48 524.84 Pale yellow prisms Amorphism or crystal 6264 5758 2829 1.Ultraviolet absorption维生素A分子中具有共轭多烯醇侧链结构，在325328nm 有强烈最大吸收。 2.Easily oxidation 维生素A 中有多个不饱和键，性质不稳定，易被氧化，易 被紫外光裂解，特别在加热和金属离子存在时，更易氧化变 质，生成无
7、生物活性的环氧化物维生素A醛及维生素A酸。 3.Color reaction with antimonic chloride维生素A在氯仿中能与三氯化锑试剂作用，产生不稳定的蓝 色 4.Solubility 维生素A能与氯仿、乙醚、环己烷或石油醚任意混合，在 乙醇中微溶，在水中不溶 v Identification tests1.Carr-Price reaction (三氯化锑反应） 维生素A在饱和无水三氯化锑的无醇氯仿溶液中，即显蓝色，渐变成紫红色。 Mechanism of reaction：.2.Ultraviolet absorption spectrum维生素A分子中含有5个共轭双
8、键，其无水 乙醇溶液在波长326nm处有最大吸收峰。当在 盐酸催化下加热，则发生去水反应生成脱水维 生素A，比维生素A多一个共轭双键，故其最 大吸收峰往长波方向移动，同时在350nm 390nm波长之间出现3个最大吸收峰。 维生素A和去水 维生素A的紫外吸收光谱 1.维生素A 2.去水维生素A3.Thin-layer chromatographyBP(1998)鉴别浓缩合成品维生素A（油剂）的 各种酯类的方法: 以硅胶G为吸附剂，环己烷-乙醚（80：20）为流动 相，以供试品与标准品的环己烷溶液点样，以三氯化 锑显色，比较供试品溶液和对照品溶液所显蓝色斑点 的位置，即可鉴别。 USP(24)采
9、用的方法:以硅胶为吸附剂，环己烷-乙醚（80：20）为流动 相，维生素A的氯仿溶液点样，以磷钼酸为显色剂。 v Assays Ultraviolet absorption method (three-point geometric correction method ) 紫外分光光度法（三点校正法） Colorimetric method of antimonic chloride 三氯化锑比色法 Ultraviolet absorption methodPrinciple This method is based on measurement of absorption of a solut
10、ion of retinol in isopropanol at 325nm, where absorbance is maximum. The method is applicable to pharmaceutical preparations and vitamin A concentrates in which vitamin A content is relatively high and amounts of substances causing irrelevant absorption are relatively small and can be corrected for
11、by taking additional readings at 310nm and 334nm. Care must be exercised in using the correction since it does not apply for some preparations. If tocopherol is present (absorption maximum, 298nm), a correction is made employing a hydrogenation technique to destroy absorption due to retinol. Solutio
12、ns with appreciable carotenoids are purified by chromatography, but carotenoids are generally not a problem in samples to which this method is applied. 目前各国药典均采用紫外分光光度法（三点校正法）测定维生 素A的含量。维生素A在325 328nm波长之间具有最大吸收峰， 可用以含量测定，其最大吸收峰的位置随溶剂不同而异。维生素A醋酸酯 维生素A醇 溶剂 max,nm E1%1cm 换算因数 max,nm E1%1cm 换算因数 环己烷 327
13、.5 1530 1900 326.5 1755 1900 异丙醇 325 1600 1830 325 1820 1830本法的测定结果较能正确的反映出维生素A的真实生物效价。 由于维生素A制剂中含有稀释用油和维生素A原料中混有其他 杂质，所以，测得的吸收度不是维生素A所独有。为了消出误差 ，应用校正公式进行校正。 Method如供试品中干扰测定的杂质较少，可以直接用溶剂 溶解供试品后测定。否则应照皂化法测定含量。 原 理： 杂质的吸收在310340nm波长范围内呈一条直线， 且随波长的增大吸收度变小。 The absorption of impurities is linear between
14、 310nm and 340nm. The absorbance decreases while the wavelength increases. 物质对光的吸收具有加和性。 The absorption has additivity. 三点波长的选择法 Three wavelengths selection 第1点：选择维生素A的最大吸收波长（即1） 第2点和第3点：在最大吸收波长的两侧各选一点（ 2和3）等波长差法：在1的左右各选一点为2和3，使3- 11-2。中国药典（2000年版）测定维生素A醋酸酯 时，规定1328nm, 2316nm, 3340nm。 等吸收度法：在1的左右各选一
15、点为2和3，使 A2=A3=6/7A1。中国药典（2000年版）测定维生素 A醇时，规定1325nm, 2310nm, 3334nm。 The absorption of impurities 对维生素A的测定有影响的杂质： 维生素A2和维生素A3(dehydroretinol and anhydroretinol)：维生素A2在345350nm波长范围内有 吸收。 维生素A的氧化产物：环氧化物、维生素A醛和维生 素A酸。 维生素A在光照下产生的无生物活性的聚合物鲸醇。 维生素A的的异构体。 合成时产生的中间体。 这些杂质在310340nm波长范围内有吸收，因此， 在测定维生素A的含量时，必须考虑这些杂质的干扰。 三点校正法可以消除这些杂质的影响。 测定法 第一法（适用于维生素A醋酸酯） 方法 计算法 关于换算因数 A值的选择法第二法（适用于维生素A醇） 测定方法 计算法 A值的选用法 Method取维生素A醋酸酯，精
