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1、兔子免疫血清和无免疫 血清 成分分析比较作者：钟园园、郑晓阳目录v前言v材料、仪器设备与方法 v结果分析 v讨论与总结 前言血清是血浆中不含纤维蛋白原的胶状液体,具有 维持血液的正常粘度、酸碱度、渗透压等作用。它 主要由水和各种化学成分组成,这些化学成分包括白 蛋白、1 、2 、- 球蛋白,甘油三酯,总胆固醇, 谷丙转氨酶等。动物在生命活动过程中常常会受到 病原微生物的侵袭而发病甚至死亡。为了防止动物 发生传染性疾病,所以常常对其进行免疫接种。动物 获得免疫能力对自身生理有什么影响，这是一个值 得研究的方向。本实验主要是粗略地测量血清中的 成分在免疫后与无免疫中的含量变化，从宏观上把 握免疫对
2、血清成分含量的影响。前言血清总胆固醇测定是血脂分析的常规项目,目前 国内大多数实验室的常用方法有酶法、硫酸一磷酸 一高铁显色法、硫酸一醋醉直接显色法、硫酸一醋 酥煮沸显色法及邻苯二甲醛一硫酸显色法和邻苯二 甲醛法等。本实验我们采用的是邻苯二甲醛法。其 在临床上的意义：血清中总胆固醇的浓度可作为脂 类代谢的指标，但脂类代谢又常与糖类及激素的代 谢密切相关，故在其他物质代谢异常时亦可影响血 清总胆固醇的浓度。前言血清谷丙转氨酶活力的测定为一种较好的早期 诊断肝炎的方法之一。其在临床上有重要意义：正 常时，谷丙转氨酶主要存在于组织细胞内，以肝细 胞含量最多，心肌细胞中含量其次，只有极少量释 放入血中
3、。所以血清中此酶活力很低。当肝脏、心 肌病变、细胞坏死或通透性增加时，细胞内各种酶 释放出来，使血清中此酶活性升高。所以测定血清 中此酶的含量可作为诊断、鉴别诊断及预后观察的 依据。本实验采用纸层析法和比色法探究动物免疫 对血清成分含量的影响。 前言分离、纯化与鉴定球蛋白的方法很多 ，本实验用醋酸纤维素膜电泳法对蛋白质进 行量化、比较及特性鉴定，是较为经济、快 速且可重复的方法。本次血清清蛋白与-球 蛋白的分离与鉴定覆盖了传统生化技术，包 括离心技术、层析技术、分光光度法和电泳 技术。 1. 1材料来源及处理v4号血清：由生命与环境科学学院生化试验室提供。从四只兔子分别提 取血清用于生化实验，
4、其中有一只兔子是有免疫的，其它的是未免疫的 ，血清提取出后置于冰箱冷藏。（血清主要由水和各种化学成分组成,这些化学成分就包括白蛋白、1 、2 、- 球蛋白,甘油三酯,总胆固醇,谷丙转氨酶。大量实验证明将 血清密封放入-10 冰箱中长时间保存,由于水分和这些化学成分没有变 化,因此新鲜血清和-10 保存一年的血清醋酸纤维素薄膜电泳后的血清 白蛋白、1 、2 、- 球蛋白的百分值无显著差异,两种血清的甘油 三酯,总胆固醇,谷丙转氨酶也无明显差异。完全能满足实验的要求。这不 仅不浪费血清,而且方便又节省实验经费）。v猪肝：由生命与环境科学学院生化试验室提供。几天前从菜市场买来置 于冰箱里保鲜处理，到
5、要用时取出（同上，冷藏对谷丙转氨酶影响不大 ）。1.2 仪器与设备v1.2.1 凝胶柱及架v1.2.2 30、37水浴箱v1.2.3 定时器v1.2.4 微量进样器v1.2.5 分光光度计v1.2.6 透析袋v1.2.7 电炉v1.2.8 电子天平v1.2.9 水浴锅v1.2.10 离心机 v1.2.11准确的加样器1.4 方法v1.4.1 血清胆固醇的定量测定：邻苯二甲醛法v1.4.2 血清清蛋白与-球蛋白的分离与鉴定：盐析 法分离提纯蛋白质、透析法脱盐与蛋白质浓缩、凝 胶过滤层析、醋酸纤维素薄膜电泳法分离与鉴定血 清清蛋白v1.4.3 谷丙转氨酶活性的鉴定及活力单位的测定： 纸层析法、分光
6、光度法测定血清丙转氨酶的活力结果分析 2.1.1血清总胆固醇的含量图1血清总胆固醇标准曲线图2 兔子血清总胆固醇含量由图2可知免疫兔子血清中胆固醇含量比未免疫的兔子低很多样样 品吸光度胆固醇含 量/mg 不免疫 兔子 血清0.09837.3 免疫兔 子血 清0.0161.652凝胶层析洗脱结果图3 凝胶层析洗脱曲线图由图3可知蓝色的蓝葡聚糖比黄色的重铬酸钾先流过凝胶柱，且蓝 葡聚糖在第10管，即约流出197ml时,达到溶质数最大,即浓度最大；重 铬酸钾在第24管，即约流出473ml时达到溶质数最大全血清、清蛋白和-球蛋白 电泳结果纯化的-球蛋白样品为一条带 （-球蛋白位置），正常兔子血 清样品
7、为五条带（清蛋白、1、 2、及-球蛋白）上清液的迁移距离=2.50cm -球蛋白的迁移距离=1.57cm全血清中： -球蛋白的迁移距离=1.52cm -球蛋白的迁移距离=2.10cm -球蛋白的迁移距离=2.50cm 上清液的迁移距离 =2.78cm图4 全血清、清蛋白和-球蛋白电泳 谱图兔子血清中谷丙转氨酶的活力单位测 定 图5 A520nm下酶活力单位的标准曲线对对照未免疫兔子4号免疫兔子 分光度00.0850.112 GPT单单位（100ml）066.1196.11由右表可知免疫 兔子血清中酶活 力单位比未免疫 的大图6 纸层析结果图 22讨论与总结 血清成分的变化能够对血液质量产生重
8、要影响。因而对血清成分的分析具有非常重 要的意义。本实验通过邻苯二甲醛法定量测 定血清胆固醇的含量,血清清蛋白与-球蛋白 的分离与鉴定,血清谷丙转氨酶活性的鉴定及 活力测定,对兔子血清的成分进行分析。 血清胆固醇的定量测定（邻苯二甲醛法） 本实验采用邻苯二甲醛法，操作简便，即无须将样 品中的胆固醇提取出来或除去样品中的蛋白质，灵敏、 稳定。在实验中，应注意几个事项，如硫酸含量的高低 对显色有影响，故混合酸的配制和测定过程中的加量应 非常准确；加好溶液混合完毕要静置10minutes左右,使 更好的混合等等。胆固醇是细胞膜的重要成分，人体内 90的胆同醇存在于细胞中，如果没有胆固醇，细胞就 会死
9、亡；胆固醇还是人体内许多重要生物活性物质的合 成材料，如胆汁、性激素(如睾酮、雌二醇)、肾上腺素( 如皮质醇)和维生素D3等。本实验得出免疫兔子血清中 胆固醇含量比未免疫的兔子低很多，原因可能是免疫影 响了胆汁、性激素、肾上激素等的含量，进而影响血清 中胆固醇的含量，这需进一步研究。血清谷丙转氨酶活性的鉴定及活力测定通过本实验测定，免疫兔子血清中酶活力单位比未免 疫的大。可能的原因是免疫的兔子本身发生病变或者 是免疫使兔子的细胞膜通透性增高，从而引起血清中 谷丙转氨酶活性提高，具体原因需进一步研究。本实验误差来来源可能为：将测定管和对照管置于水 浴中与二硝基苯肼作用20分钟过程中反应未完全。氢
10、 氧化钠的加入量不够准确,这道接影响对照管的光密度 , 使酶的活力出现偏高。与显色剂反应的温度未能控 制好。这时, 对照管光密度偏低,而测定管从“ 水浴中 取出后, 管内温度仍高于室温, 反应可能接近完全, 因 此测得的酶活力偏高。血清清蛋白与-球蛋白的分离与鉴定分离蛋白质需要经过很多步骤，这要求实验中 要做好每一步，如盐析、透析等等。在洗脱步骤中 用蓝葡聚糖和重铬酸钾代替蛋白质通过凝胶柱,由结 果知蓝色的蓝葡聚糖比黄色的重铬酸钾先流过凝胶 柱，说明蓝葡聚糖的分子量比重铬酸钾大。在纤维素薄膜电泳中, 纯化的-球蛋白样品为一条带 ,正常兔子全血清样品为五条带（清蛋白、1、2 、及-球蛋白）。由于
11、实验误差较大，因此全血清 中的-球蛋白和清蛋白的迁移距离和纯化的-球蛋 白和清蛋白相差很大。但是通过鉴定也使我们了解 血清中蛋白质的种类。参考文献v1中级医刊2：107，1962v2 林书. 影响血清转氨酶活力测定因素的探讨. 福州市传染 病院,1978, (9):407-410v3 黄天锡. 那些疾病和原因出现转氨酶增高. 右江民族医学 院附院,1998:35-37v4 叶晓健，田纪伟，高岱峰，李家顺，贾连顺，赵书平. 脊 髓半切伤大鼠血清谷丙转氨酶和谷草转氨酶活性变化的研究. 中国临床康复,2004,8(17) :3282-3283 v5 董宁池,潘雪峨,金润昭,郭旭芹,张兴. 五种血清总胆固醇测 定方法的比较. 陕西医学检验,1994,9(4)：24-25v6 童和、胡纹、刘音、朱元因. 人和动物血清谷丙转氨酶活 力的测定. 铁道部劳动卫生研究所工业毒物研究室, 2003： 28-24v7 河南扶沟县人民医院肝炎防治研究小组. 血清谷丙转氛酶 升高在病毒性肝炎保护诊断应用上的凡个问题.新医学,1978 ，9(12):586-587
