《12基因工程的基本操作程序_高二理化生_理化生_高中教育_教育专区》由会员分享，可在线阅读，更多相关《12基因工程的基本操作程序_高二理化生_理化生_高中教育_教育专区（20页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、 基因工程的基本操作程序n（1）目的基因的获取n（2）n（3）将目的基因导入受体细胞n（4）目的基因的检测与鉴定基因表达载体的构建一、目的基因的获取1 1、目的基因：、目的基因：P9P9 2 2、获取方法：、获取方法： （1 1）从）从基因文库基因文库中获取目的基因；中获取目的基因； （2 2）利用）利用PCRPCR技术扩增目的基因；技术扩增目的基因； （3 3）化学方法直接人工合成）化学方法直接人工合成（一）从基因文库中获取目的基因（一）从基因文库中获取目的基因基因文库基因组DNA文库cDNA文库补：真核细胞、原核细胞基因结构编码区非编码区非编码区与RNA聚合酶 结合位点 内含子 外显子 启
2、动子终止子（二）利用（二）利用PCRPCR技术扩增目的基因技术扩增目的基因 概念：前提条件：其他条件：原理：变性子链延伸（三）化学方法人工合成目的基因条件：二、基因表达载体的构建核心u构建基因表达载体的目的u基因表达载体的组成：a、目的基因b、启动子c、终止子d、标记基因位置 作用作用三、将目的基因导入受体细胞转化： （1）农杆菌转化法感染特点：原理：Ti质粒上的T-DNA转化过程:2.将目的基因导入动物细胞（1）方法：显微注射法 （2）受体细胞：受精卵常用法：Ca2+处理微生物作受体细胞原因：过程：Ca2+处理大 肠杆菌感受态 细胞表达载体 与感受态 细胞混合感受态 细胞吸 收DNA3.将目
3、的基因导入微生物细胞思考：为什么要用Ca2+处理受体细胞 ？检测目的基因是否导入受体细胞标记基因1、检测转基因生物染色体的DNADNA上是否插入上是否插入 了目的基因了目的基因 （1）方法: DNA分子杂交（2）探针:四、目的基因的检测与鉴定放射性同位素标记的目的基因提取转基因 生物DNA探针与提取 的DNA杂交 杂交带4、鉴定（个体生物学水平）2 2、检测目的基因是否转录出了、检测目的基因是否转录出了mRNAmRNA3 3、检测目的基因是否翻译成蛋白质、检测目的基因是否翻译成蛋白质抗虫、抗病接种实验、活性鉴定等方法:分 子 杂 交方法: 抗原-抗体杂交过程:探针和转基因生物的mRNA杂交,若出 现杂交带,表明目的基因转录出了mRNA。类型步骤检测内容方法结果显示分 子 检 测第一 步目的基因是否插入 转基因生物DNA 上DNA分子杂交是否成功显示 出杂交带第二 步目的基因是否转录 出mRNA分子杂交技术是否成功显示 出杂交带 第三 步目的基因是否翻译 出蛋白质抗原抗体杂交是否成功显示 出杂交带个体 水平 鉴定包括抗虫、抗病的接种实验，以确定是否有抗性以及抗性的程度；vv目的基因的检测与鉴定目的基因的检测与鉴定目的基因导入受体细胞后的检测
