自身抗体的检测在风湿病中的诊断意义

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1、 自身抗体测定在风湿病中的诊断意义重庆医科大学附一院检验科陈 瀑风湿病的概念风湿病是以皮肤、关节、血管及多系 统损害为主或伴免疫功能异常的一类疾病。风湿病的发生多与自身免疫异常有关。骨科 呼吸肾内消化风湿病免疫学 皮肤血液风湿病的相关学科急诊大量误诊病例风湿病的诊断临床特征症状：发热、雷诺现象、晨僵等 体征：关节肿胀、皮疹、肌无力等辅助检查自身抗体(ANA、 dsDNA、 RF、 AnuA) 免疫球蛋白、补体及常规化验影像学等概述自身抗体和风湿病的关系n风湿病的概念n风湿病是以皮肤、关节、血管及多系统损害为 主或伴免疫功能异常的一类疾病。n风湿病的发生多与自身免疫异常有关。n风湿病为内科的一类

2、疑难杂症，风湿病的相关 学科：肾内科，皮肤科，呼吸科，血液科，骨 科，消化科n促使风湿科的形成自身抗体的概念(conception of autoantibodies)由各种原因造成的机体B淋巴细胞产生针对自身组 织、细胞及其成分的抗体，称为自身抗体。自身抗体 可以是生理性的，也可以是病理性的。正常人群中生 理性的自身抗体的存在相当普遍，其作用之一就是净 化体内衰老及死亡的细胞。生理性的自身抗体往往滴度很低，与相应抗原的 亲和力弱，大多为IgM型，且受免疫抑制功能控制，含 量低，一般不造成病理性的损害。病理性的自身抗体滴度高，与相应抗原的亲和力强 ，大多为IgG型，体内含量高，往往造成病理性的

3、损害 。自身抗体检测的临床意义自身免疫性疾病患者中，有相当一部份病人的血 清或其它体液中可检测到一种或多种高效价的自身抗 体。自身抗体是自身免疫性疾病的重要标志，每种疾 病都伴有特征性的自身抗体谱。自身抗体的检测能为 自身免疫性疾病的诊断提供非常有价傎的依据。临床疾病诊断、鉴别诊断-疾病标记性抗体或特异性抗 体。n判断疾病的活动性及预后，观察疗效，指导临床治疗 。n进一步研究和阐明自身免疫性疾病的发病机制。国内现状自身抗体的测定不普遍欠规范对其意义了解尚少缺乏研究自身抗体种类繁多n常见自身抗体：n抗核抗体谱(ANAS)检测n抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）检测n类风湿因子和抗CCP抗体n自身免

4、疫性肝病相关自身抗体检测常见的与自身抗体关系较大的风湿病n结缔组织病：类风湿关节炎 RA系统性红斑狼疮 SLE硬皮病 SD皮肌炎 PM 、DM干燥综合征 SS混合性结缔组织病MCTD血管炎 AS抗核抗体谱检测抗核抗体(ANA)概念nANA：指抗细胞核成分（DNA，RNA，蛋白质和 酶）的抗体。ANA存在一个谱nANA新概念：抗核酸（Nucleic acid）和核蛋 白（Nucleoprotein）抗体的总称。n对ANA的理解已不再局限于核成分,它指的是抗 细胞内所有成分的自身抗体的总称。n靶抗原分布:细胞核-细胞核,细胞浆,细胞骨 架,细胞分裂周期。抗核抗体的分类1. 抗DNA抗体抗双链DNA

5、 (dsDNA) 抗体 抗单链DNA (ssDNA) 抗体2. 抗组蛋白抗体3. 抗非组蛋白抗体抗可溶性核抗原(ENA)抗体：Sm、 U1RNP rRNP、SSA、SSB、Scl70、Jo-1、pM-1、 PCNA、RANA、Ku、Mi-1、-2抗体、DNP 抗体等。 抗着丝点抗体(ACA)4. 抗核仁抗体: 抗5rRNA、核小体、U3nRNP、Nor-90抗体 。5. 抗其它细胞成分: 线粒体、中心体等。抗核抗体ANA分类根据细胞内靶抗原的理化特性和分布：n抗DNA（dsDNA,ssDNA)n抗组蛋白（Histone)n抗非组蛋白（抗可溶性核抗原抗体anti-extractable nucl

6、ear antigen antibodies,ENA和抗着丝点抗体ACA）n抗核仁（Nucleolus）ANA的检测通过两级实验完成IIF法检测总ANA-”水平1测定”筛选实验dsDNA、抗ENA抗体 -“水平2测定”特异性实验对实验结果进一步确认许多抗原不易纯化，且许多抗体确切抗原 至今未知，实际上只有一部份的ANA能进行进 一步的特异性检测，单独的“水平2测定”将会漏 掉某些ANA，故应同时进行“水平1测定”。ANA的筛选：间接免疫荧光法+抗原抗体（血清）抗原抗体第二抗体ANA的筛选：间接免疫荧光法荧光显微镜下ANA的染色型别n均质型：与抗组蛋白和抗DNA有关n颗粒（斑点）型：与抗ENA有

7、关n周边型：与抗dsDNA有关n核仁型：4-6sRNAn着丝点型：在SD及CREST中出现n但大部份还须作进一步的实验来验证确定是哪 一种特异性抗体，哪一种自身免疫性疾病的可 能性较大ANA：均质型 EUROIMMUN抗核抗体小 结nANA是诊断弥漫性结缔组织病的重要依 据。各种抗原在其分子量、结构、功能 上有所不同。抗原同DNA的转录、拼接 、复制、翻译等作用有关。研究ANA有 利于对结缔组织病发病机理的了解nANA滴度不一定与疾病活动性相平行， 正常人、尤其老年人可有低滴度ANA。 感染性疾病、肿瘤也可阳性n ANA在各种自身免疫性疾病中的阳性率自身免疫性疾病 ANA阳性率系统性红斑狼疮(

8、SLE)活动期 95%-100%非活动期 80%-100%药物诱导性红斑狼疮(DLE) 100%混合结缔组织病 (MCTD) 100%类风湿性关节炎(RA) 20%-40%进行性系统性硬化症(PSS) 85%-95% 多发性肌炎及皮肌炎(PM/DM) 30%-50%干燥综合症(SS) 70%-80%慢性活动性肝炎(CAH) 30%-40%溃疡性结肠炎(UC) 26% 抗可溶性核抗原(ENA)抗体检测 抗双链检测（抗dsDNA）n抗可溶性核抗原(ENA)抗体：Sm、 U1RNP 、SSA、SSB、Scl70、Jo-1、rRNP 、pM-1、PCNA、 RANA、Ku、Mi-1、-2抗体、DNP

9、抗体等几种ENA的由来及同义词nSm：病人名：SmithnRNP: u1 RNP或nRNP Nuclear RibonucleoproteinnSSA: RO Sjogrens syndrome AnSSB: La, Ha, Sjogrens syndrome BnJo-1: 病人JohnnScL-70: Scleroderma小 结n抗Sm:是SLE标记抗体，帮助前瞻性和回顾性 诊断。对早期、不典型的SLE诊断意义大。经 治疗缓解后SLE回顾性诊断。n抗u1 RNP (nRNP) 在多种结缔组织病中存在 ，高效价的抗u1RNP抗体，且无其它特异性的 ANA，是诊断混合结缔 组织病的重要血清学

10、 依据。nRNP抗原与rRNP不同，前者是含尿嘧 啶的核糖核蛋白，主要在核内，而rRNP是主要 在胞浆内的磷酸蛋白，抗rRNP抗体与SLE 有 关，尤其有精神神经症状的SLE阳性率较高。小 结抗SSA和抗SSB常见于干燥综合征（Sjogrens Syndrome，SS）也见于SLE ，两者同时出现 与干 燥综合征相关性大。有研究发现SSA可造成 新生儿狼疮和先天性心脏传导阻滞抗ScL-70: 硬皮病SD的标记抗体但特异性不 高抗着丝点抗体（ ACA，Centromere ）与雷 诺现象和CREST综合征有关，但并非 CREST综合征(Calcinosis, Raynauds phenomena

11、, Esophageal Dysmotility, Telangiectasia)的标记抗体，在 干燥综合征，某些慢性肝病中亦可阳性n抗Jo-1是PM/DM的标记抗体但特异性不 高，抗Jo-1阳性的肌炎患者，伴关节炎 、“技工手”、雷诺症、肺间质变等称合成 酶抗体综合征。n抗组蛋白抗体与多种结缔组织病 有关，有助于药物性狼疮的诊断n抗核仁型抗体常与SD有关小 结抗双链DNA抗体临床意义为系统性红斑狼疮(SLE)血清学特异性抗体， SLE的诊断标准之 一。SLE患者中阳性率为30-40%左右。抗体滴度的变化与SLE疾病活动程度相关，可用于SLE疾病活动 期判断和药物疗效观察。阳性的病人90%以上

12、处在疾病的活动期 。参与SLE发病机理：介导的免疫复合物病-狼疮肾炎所致的血管炎-典型的喋形红斑非SLE和正常人抗ds-DNA多为阴性，有时其它结缔组织病患 者可为阳性，如 SS、DIL、MCTD，但阳性率低，含量也低，而 且此类病人一般是SLE重叠综合征。抗ss-DNA可存在多种自身免疫性疾病中，也可存在于一些非自身免 疫性疾病中，对疾病诊断缺乏特异性，临床上实用价傎不大。ANA检测的意义n有助于疾病的诊断，如抗Sm是SLE标记抗 体；抗ScL-70 是SD的标记抗体，抗Jo-1是 PM/DM的标记抗体n观察疾病活动度和治疗反应，如抗dsDNAn研究发病机理类风湿因子 如何评价类风湿因子n是

13、诊断RA的标准之一，不是唯一标准，并非 RA特有n作为血清阴性脊柱关节病区分标准 n正常人2%阳性，老年人可达5%阳性nRF与其他蛋白、半抗原有交叉反应n多种结缔组织病（SLE，SD，SS，PM/DM） 感染疾病（SBE，TB，hepatitis）,肝硬化， 弥漫性肺纤维化，结节病等均可阳性n病后半年才产生，有关节外表现者，滴度高。 持续高滴度RF预示疾病严重，预后差多种自身抗体联合检测提高RA诊断准确性n抗核周因子-(APF)n抗角蛋白抗体-（AKA）n抗 Sa 抗 体n抗RA33/36抗体n抗环瓜氨酸多肽(CCP)抗体：对RA诊断高度敏 感和特异，对RA的早期诊断和预后评估都很有 意义抗环

14、瓜氨酸多肽(CCP)抗体1998年 证实抗filaggrin相关抗体识别 的主要抗原决定簇成分是瓜氨酸n2000年 合成环瓜氨酸肽（CCP），并将 抗CCP抗体用于RA检测nELISA法检测n对RA诊断高度敏感和特异n阳性者骨破坏较阴性者严重n对RA的早期诊断和预后评估都很有意义抗中性粒细胞胞浆抗体 ANCA antineutrophil cytoplasmic antibodies nANCA代表一族抗中性粒细胞胞浆成分的抗体谱。n靶抗原：中性蛋白酶3（PR3），髓过氧化物酶（ MPO），杀菌/通透性增高蛋白（BPI），丝氨酸蛋白 酶，人白细胞弹性蛋白酶（HLE），乳铁蛋白（LF） ，组织蛋白酶G，葡萄糖醛酸酶，溶菌酶。n根据ANCA检测出的荧光染色模型可分为：胞浆型ANCACANCA，主要靶抗原为PR3核周型ANCAPANCA，主要靶抗原为MPO ANCA对系统性血管炎的诊断意义n系统性血管炎（Systemic Vasculitis）是一组 以血管的炎症与坏死为主要病理改变的炎性疾 病。临床表现因受累血管的类型、大小、部位 及病理特点不同而表现各异。其常累及全身多 个系统，引起多系统多脏器功能障