《肺癌a549和h446细胞系肿瘤始发细胞的实验研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《肺癌a549和h446细胞系肿瘤始发细胞的实验研究（27页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、肿瘤学专业优秀论文肿瘤学专业优秀论文 肺癌肺癌 A549A549 和和 H446H446 细胞系肿瘤始发细胞的实细胞系肿瘤始发细胞的实验研究验研究关键词：克隆形成关键词：克隆形成 肿瘤细胞肿瘤细胞 非小细胞肺癌非小细胞肺癌 A549A549 细胞系细胞系 H446H446 细胞系细胞系 致瘤能致瘤能 力力摘要：目的：该实验主要是通过克隆形成能力和致瘤能力两方面来研究非小细 胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）A549 细胞系和小细胞肺癌 （small cell lung cancer，SCLC）H446 细胞系中肿瘤始发细胞的比例。 方法：采用有限稀释法将
2、 A549 和 H446 细胞稀释至 10 个/ml，100ul/孔种 96 孔 板，1 周后显微镜下检测细胞单克隆形成的数量及大小。将单克隆传代，以观 察细胞自我更新能力；随机取 6 个大克隆传代，细胞增殖至 106 时，测其生长 曲线，检测其增殖能力；收集来自于 1 个细胞形成的克隆细胞种于 BALB/C 裸鼠 皮下，观察其致瘤能力。以 CD133 为分子标记，使用免疫磁珠细胞分选技术分 选细胞，测定 CD133+细胞和 CD133-细胞的克隆形成能力。测定 Hoechst33342 染色是否会影响非 SP 细胞的增殖能力和单克隆形成能力。 结果：A549 和 H446 细胞均能形成 3
3、种类型的克隆：大克隆（多于 100 个细胞） ，中克隆（50- 100 个细胞）和小克隆（少于 50 个细胞） 。克隆细胞传代后，来源于小克隆的 细胞不能形成新的克隆，在第 2 代就凋亡；来源于中克隆的细胞在第 2 代主要 形成小克隆，只形成数量很少的中克隆，在第 4 代均凋亡；而来源于大克隆的 细胞总是形成 3 种类型的克隆，即使是第 10 代。 45以上的细胞能够形成 大克隆，大克隆传代后又能形成新的克隆；来源于 1 个大克隆的细胞种植到 BALB/C 裸鼠身上，10 天左右就能形成肉眼可见的肿瘤。 磁分选后 CD133+细 胞和 CD133-细胞克隆形成能力及致瘤能力相同；台盼兰染色显示
4、 Hoechst33342 染色能够明显影响细胞活性，种 96 孔板后细胞的克隆形成能力和增殖能力明显 降低（plt;005） 。 细胞周期显示，A549 细胞系中 G1、G2 和 S 期细 胞分别占 4339、1365和 4296；H446 细胞系中 G1、G2 和 S 期细胞 分别占 6275、1329和 2396。A549 中能形成大克隆的单个细胞扩 增至 106 需要的时间 1926 天，H446 中能形成大克隆的单个细胞扩增至 106 需要的时间 1725 天，增长至 106 后增殖曲线显示，细胞增长速度基本相同。 结论：45以上的 A549 细胞和 H446 细胞能够形成大的克隆，
5、该克隆能够自我 更新，并且不断增殖，具有致瘤能力。实验结果表明：45以上的 A549 细胞和 H446 细胞是肿瘤始发细胞。正文内容正文内容目的：该实验主要是通过克隆形成能力和致瘤能力两方面来研究非小细胞 肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）A549 细胞系和小细胞肺癌 （small cell lung cancer，SCLC）H446 细胞系中肿瘤始发细胞的比例。 方法：采用有限稀释法将 A549 和 H446 细胞稀释至 10 个/ml，100ul/孔种 96 孔 板，1 周后显微镜下检测细胞单克隆形成的数量及大小。将单克隆传代，以观 察细胞自我更新能力
6、；随机取 6 个大克隆传代，细胞增殖至 106 时，测其生长 曲线，检测其增殖能力；收集来自于 1 个细胞形成的克隆细胞种于 BALB/C 裸鼠 皮下，观察其致瘤能力。以 CD133 为分子标记，使用免疫磁珠细胞分选技术分 选细胞，测定 CD133+细胞和 CD133-细胞的克隆形成能力。测定 Hoechst33342 染色是否会影响非 SP 细胞的增殖能力和单克隆形成能力。 结果：A549 和 H446 细胞均能形成 3 种类型的克隆：大克隆（多于 100 个细胞） ，中克隆（50- 100 个细胞）和小克隆（少于 50 个细胞） 。克隆细胞传代后，来源于小克隆的 细胞不能形成新的克隆，在第
7、 2 代就凋亡；来源于中克隆的细胞在第 2 代主要 形成小克隆，只形成数量很少的中克隆，在第 4 代均凋亡；而来源于大克隆的 细胞总是形成 3 种类型的克隆，即使是第 10 代。 45以上的细胞能够形成 大克隆，大克隆传代后又能形成新的克隆；来源于 1 个大克隆的细胞种植到 BALB/C 裸鼠身上，10 天左右就能形成肉眼可见的肿瘤。 磁分选后 CD133+细 胞和 CD133-细胞克隆形成能力及致瘤能力相同；台盼兰染色显示 Hoechst33342 染色能够明显影响细胞活性，种 96 孔板后细胞的克隆形成能力和增殖能力明显 降低（plt;005） 。 细胞周期显示，A549 细胞系中 G1、
8、G2 和 S 期细 胞分别占 4339、1365和 4296；H446 细胞系中 G1、G2 和 S 期细胞 分别占 6275、1329和 2396。A549 中能形成大克隆的单个细胞扩 增至 106 需要的时间 1926 天，H446 中能形成大克隆的单个细胞扩增至 106 需要的时间 1725 天，增长至 106 后增殖曲线显示，细胞增长速度基本相同。 结论：45以上的 A549 细胞和 H446 细胞能够形成大的克隆，该克隆能够自我 更新，并且不断增殖，具有致瘤能力。实验结果表明：45以上的 A549 细胞和 H446 细胞是肿瘤始发细胞。 目的：该实验主要是通过克隆形成能力和致瘤能力两
9、方面来研究非小细胞肺癌 （non-small cell lung cancer，NSCLC）A549 细胞系和小细胞肺癌（small cell lung cancer，SCLC）H446 细胞系中肿瘤始发细胞的比例。 方法：采 用有限稀释法将 A549 和 H446 细胞稀释至 10 个/ml，100ul/孔种 96 孔板，1 周 后显微镜下检测细胞单克隆形成的数量及大小。将单克隆传代，以观察细胞自 我更新能力；随机取 6 个大克隆传代，细胞增殖至 106 时，测其生长曲线，检 测其增殖能力；收集来自于 1 个细胞形成的克隆细胞种于 BALB/C 裸鼠皮下，观 察其致瘤能力。以 CD133 为
10、分子标记，使用免疫磁珠细胞分选技术分选细胞， 测定 CD133+细胞和 CD133-细胞的克隆形成能力。测定 Hoechst33342 染色是否 会影响非 SP 细胞的增殖能力和单克隆形成能力。 结果：A549 和 H446 细胞 均能形成 3 种类型的克隆：大克隆（多于 100 个细胞） ，中克隆（50-100 个细 胞）和小克隆（少于 50 个细胞） 。克隆细胞传代后，来源于小克隆的细胞不能 形成新的克隆，在第 2 代就凋亡；来源于中克隆的细胞在第 2 代主要形成小克 隆，只形成数量很少的中克隆，在第 4 代均凋亡；而来源于大克隆的细胞总是 形成 3 种类型的克隆，即使是第 10 代。 4
11、5以上的细胞能够形成大克隆，大克隆传代后又能形成新的克隆；来源于 1 个大克隆的细胞种植到 BALB/C 裸鼠 身上，10 天左右就能形成肉眼可见的肿瘤。 磁分选后 CD133+细胞和 CD133- 细胞克隆形成能力及致瘤能力相同；台盼兰染色显示 Hoechst33342 染色能够明 显影响细胞活性，种 96 孔板后细胞的克隆形成能力和增殖能力明显降低 （plt;005） 。 细胞周期显示，A549 细胞系中 G1、G2 和 S 期细胞分 别占 4339、1365和 4296；H446 细胞系中 G1、G2 和 S 期细胞分别 占 6275、1329和 2396。A549 中能形成大克隆的单个
12、细胞扩增至 106 需要的时间 1926 天，H446 中能形成大克隆的单个细胞扩增至 106 需要的 时间 1725 天，增长至 106 后增殖曲线显示，细胞增长速度基本相同。 结 论：45以上的 A549 细胞和 H446 细胞能够形成大的克隆，该克隆能够自我更 新，并且不断增殖，具有致瘤能力。实验结果表明：45以上的 A549 细胞和 H446 细胞是肿瘤始发细胞。 目的：该实验主要是通过克隆形成能力和致瘤能力两方面来研究非小细胞肺癌 （non-small cell lung cancer，NSCLC）A549 细胞系和小细胞肺癌（small cell lung cancer，SCLC）
13、H446 细胞系中肿瘤始发细胞的比例。 方法：采 用有限稀释法将 A549 和 H446 细胞稀释至 10 个/ml，100ul/孔种 96 孔板，1 周 后显微镜下检测细胞单克隆形成的数量及大小。将单克隆传代，以观察细胞自 我更新能力；随机取 6 个大克隆传代，细胞增殖至 106 时，测其生长曲线，检 测其增殖能力；收集来自于 1 个细胞形成的克隆细胞种于 BALB/C 裸鼠皮下，观 察其致瘤能力。以 CD133 为分子标记，使用免疫磁珠细胞分选技术分选细胞， 测定 CD133+细胞和 CD133-细胞的克隆形成能力。测定 Hoechst33342 染色是否 会影响非 SP 细胞的增殖能力和
14、单克隆形成能力。 结果：A549 和 H446 细胞 均能形成 3 种类型的克隆：大克隆（多于 100 个细胞） ，中克隆（50-100 个细 胞）和小克隆（少于 50 个细胞） 。克隆细胞传代后，来源于小克隆的细胞不能 形成新的克隆，在第 2 代就凋亡；来源于中克隆的细胞在第 2 代主要形成小克 隆，只形成数量很少的中克隆，在第 4 代均凋亡；而来源于大克隆的细胞总是 形成 3 种类型的克隆，即使是第 10 代。 45以上的细胞能够形成大克隆， 大克隆传代后又能形成新的克隆；来源于 1 个大克隆的细胞种植到 BALB/C 裸鼠 身上，10 天左右就能形成肉眼可见的肿瘤。 磁分选后 CD133
15、+细胞和 CD133- 细胞克隆形成能力及致瘤能力相同；台盼兰染色显示 Hoechst33342 染色能够明 显影响细胞活性，种 96 孔板后细胞的克隆形成能力和增殖能力明显降低 （plt;005） 。 细胞周期显示，A549 细胞系中 G1、G2 和 S 期细胞分 别占 4339、1365和 4296；H446 细胞系中 G1、G2 和 S 期细胞分别 占 6275、1329和 2396。A549 中能形成大克隆的单个细胞扩增至 106 需要的时间 1926 天，H446 中能形成大克隆的单个细胞扩增至 106 需要的 时间 1725 天，增长至 106 后增殖曲线显示，细胞增长速度基本相同
16、。 结 论：45以上的 A549 细胞和 H446 细胞能够形成大的克隆，该克隆能够自我更 新，并且不断增殖，具有致瘤能力。实验结果表明：45以上的 A549 细胞和 H446 细胞是肿瘤始发细胞。 目的：该实验主要是通过克隆形成能力和致瘤能力两方面来研究非小细胞肺癌 （non-small cell lung cancer，NSCLC）A549 细胞系和小细胞肺癌（small cell lung cancer，SCLC）H446 细胞系中肿瘤始发细胞的比例。 方法：采 用有限稀释法将 A549 和 H446 细胞稀释至 10 个/ml，100ul/孔种 96 孔板，1 周 后显微镜下检测细胞单克隆形成的数量及大小。将单克隆传代，以观察细胞自我更新能力；随机取 6 个大克隆传代，细胞增殖至 106 时，测其生长曲线，检
