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1、预防兽医学专业毕业论文预防兽医学专业毕业论文 精品论文精品论文 猪囊尾蚴单链抗体猪囊尾蚴单链抗体 PE40PE40 重重组载体构建组载体构建关键词：猪囊尾蚴病关键词：猪囊尾蚴病 绿脓杆菌绿脓杆菌 PE40PE40 重组免疫毒素重组免疫毒素 重组载体构建重组载体构建摘要：猪囊尾蚴病是全球性寄生性蠕虫病，发展中国家更为常见，尤其在我国， 该病的流行给人民生产和生活带来诸多危害，给人类的健康带来严重的影响。 我国至少已有 31 个省(市、自治区)有过该病的报道，囊尾蚴病患者约 1000 万， 每年屠宰的囊尾蚴病猪约 1200 万头，直接经济损失约 20 亿元。脑囊尾蚴病对 人类的健康危害极大，在某些
2、发展中国家，脑囊尾蚴病是引起人死亡的主要原 因之一。 由于抗药性的不断出现以及药物残留等问题的严重性，使得利用免 疫预防技术来取代药物成为控制猪囊尾蚴病的必然。免疫毒素是一种导向药物， 它将毒素基因和靶向基因融合，表达融合蛋白，具有识别和选择性地破坏受体 靶细胞的功能，它由导向部分和毒性部分组成。 绿脓杆菌外毒素通常作为重 组毒素的毒性成分，其毒性本质是它能够催化真核细胞延伸因子的 ADP 核糖基 化，阻止肽链延长并中断细胞蛋白质的合成而行使细胞毒作用。作为重组毒素 的导向部分，除能够与特定靶细胞表面受体结合外，同时能够与毒素基因相融 合，表达出融合蛋白，且二者不影响各自独立结构和功能。将猪囊
3、尾蚴头节单 链抗体基因与绿脓杆菌外毒素 PE40 基因连接，装入表达载体 pET-28(a)中，以 获得重组毒素，研究其对猪囊尾蚴的杀灭作用。 从绿脓杆菌 ATCC27853 菌株 中提取基因组，根据 GenBank 发表的绿脓杆菌外毒素基因全序列，自行设计引 物，分别引入 Xba和 Hind酶切位点。 采用 PCR 方法扩增 PE40 基因，在 反应体系中加入 10总体积的甘油，电泳检测，纯化的 PCR 产物与 pMD18-T 载 体连接构建质粒 pMD18-T-PE40，转入大肠杆菌感受态 JM109 中，蓝白斑筛选阳 性克隆菌，提取质粒进行酶切鉴定及 PCR 鉴定，并测序。 质粒 pMD
4、18-T- PE40 经：Xba和 Hind双酶切后电泳显示 2692bp 和 1083bp 两条带，测序结 果显示扩增的 PE40 基因共有 10 个碱基发生改变，变异的碱基引起 7 个氨基酸 发生变化，但 PE40 肽段的重要活性位点与绿脓杆菌标准产毒株 PA103 相比均未 发生变化。 含有 ScFv 基因的质粒 pMD18-T-ScFv 已经构建，且 ScFv 基因两 端的酶切位点分别为 EcoR和 Xba，用 Xba和 Hind分别对质粒 pMD18-T- PE40 和 pMD18-T-ScFv 进行双酶切，利用 Xba和 Hind酶切位点将 PE40 基因 与质粒 pMD18-T-
5、ScFv 相连接，转入大肠杆菌感受态 JM109 中，挑取阳性菌酶切 鉴定。 经酶切电泳分析，得到大小约为 1800bp 的目的片段，与预期结果相 同，说明 ScFv 与 PE40 已连接成功。用 EcoR和 Hind分别对重组质粒 pMD18-T-ScFv-PE40 和表达载体 pET-28(a)进行酶切，将 ScFv-PE40 转入 pET- 28(a)表达载体中构建融合毒素 pET28-ScFv-PE40，转入大肠杆菌感受态细胞 DH5 中，挑取阳性菌落提取质粒，酶切电泳检测，得到目的条带大小约为 1800bp，保存菌种，为进一步研究重组免疫毒素对猪囊尾蚴的杀灭作用奠定基 础。正文内容正
6、文内容猪囊尾蚴病是全球性寄生性蠕虫病，发展中国家更为常见，尤其在我国， 该病的流行给人民生产和生活带来诸多危害，给人类的健康带来严重的影响。 我国至少已有 31 个省(市、自治区)有过该病的报道，囊尾蚴病患者约 1000 万， 每年屠宰的囊尾蚴病猪约 1200 万头，直接经济损失约 20 亿元。脑囊尾蚴病对 人类的健康危害极大，在某些发展中国家，脑囊尾蚴病是引起人死亡的主要原 因之一。 由于抗药性的不断出现以及药物残留等问题的严重性，使得利用免 疫预防技术来取代药物成为控制猪囊尾蚴病的必然。免疫毒素是一种导向药物， 它将毒素基因和靶向基因融合，表达融合蛋白，具有识别和选择性地破坏受体 靶细胞的
7、功能，它由导向部分和毒性部分组成。 绿脓杆菌外毒素通常作为重 组毒素的毒性成分，其毒性本质是它能够催化真核细胞延伸因子的 ADP 核糖基 化，阻止肽链延长并中断细胞蛋白质的合成而行使细胞毒作用。作为重组毒素 的导向部分，除能够与特定靶细胞表面受体结合外，同时能够与毒素基因相融 合，表达出融合蛋白，且二者不影响各自独立结构和功能。将猪囊尾蚴头节单 链抗体基因与绿脓杆菌外毒素 PE40 基因连接，装入表达载体 pET-28(a)中，以 获得重组毒素，研究其对猪囊尾蚴的杀灭作用。 从绿脓杆菌 ATCC27853 菌株 中提取基因组，根据 GenBank 发表的绿脓杆菌外毒素基因全序列，自行设计引 物
8、，分别引入 Xba和 Hind酶切位点。 采用 PCR 方法扩增 PE40 基因，在 反应体系中加入 10总体积的甘油，电泳检测，纯化的 PCR 产物与 pMD18-T 载 体连接构建质粒 pMD18-T-PE40，转入大肠杆菌感受态 JM109 中，蓝白斑筛选阳 性克隆菌，提取质粒进行酶切鉴定及 PCR 鉴定，并测序。 质粒 pMD18-T- PE40 经：Xba和 Hind双酶切后电泳显示 2692bp 和 1083bp 两条带，测序结 果显示扩增的 PE40 基因共有 10 个碱基发生改变，变异的碱基引起 7 个氨基酸 发生变化，但 PE40 肽段的重要活性位点与绿脓杆菌标准产毒株 PA
9、103 相比均未 发生变化。 含有 ScFv 基因的质粒 pMD18-T-ScFv 已经构建，且 ScFv 基因两 端的酶切位点分别为 EcoR和 Xba，用 Xba和 Hind分别对质粒 pMD18-T- PE40 和 pMD18-T-ScFv 进行双酶切，利用 Xba和 Hind酶切位点将 PE40 基因 与质粒 pMD18-T-ScFv 相连接，转入大肠杆菌感受态 JM109 中，挑取阳性菌酶切 鉴定。 经酶切电泳分析，得到大小约为 1800bp 的目的片段，与预期结果相 同，说明 ScFv 与 PE40 已连接成功。用 EcoR和 Hind分别对重组质粒 pMD18-T-ScFv-PE
10、40 和表达载体 pET-28(a)进行酶切，将 ScFv-PE40 转入 pET- 28(a)表达载体中构建融合毒素 pET28-ScFv-PE40，转入大肠杆菌感受态细胞 DH5 中，挑取阳性菌落提取质粒，酶切电泳检测，得到目的条带大小约为 1800bp，保存菌种，为进一步研究重组免疫毒素对猪囊尾蚴的杀灭作用奠定基 础。 猪囊尾蚴病是全球性寄生性蠕虫病，发展中国家更为常见，尤其在我国，该病 的流行给人民生产和生活带来诸多危害，给人类的健康带来严重的影响。我国 至少已有 31 个省(市、自治区)有过该病的报道，囊尾蚴病患者约 1000 万，每 年屠宰的囊尾蚴病猪约 1200 万头，直接经济损
11、失约 20 亿元。脑囊尾蚴病对人 类的健康危害极大，在某些发展中国家，脑囊尾蚴病是引起人死亡的主要原因 之一。 由于抗药性的不断出现以及药物残留等问题的严重性，使得利用免疫 预防技术来取代药物成为控制猪囊尾蚴病的必然。免疫毒素是一种导向药物， 它将毒素基因和靶向基因融合，表达融合蛋白，具有识别和选择性地破坏受体靶细胞的功能，它由导向部分和毒性部分组成。 绿脓杆菌外毒素通常作为重 组毒素的毒性成分，其毒性本质是它能够催化真核细胞延伸因子的 ADP 核糖基 化，阻止肽链延长并中断细胞蛋白质的合成而行使细胞毒作用。作为重组毒素 的导向部分，除能够与特定靶细胞表面受体结合外，同时能够与毒素基因相融 合
12、，表达出融合蛋白，且二者不影响各自独立结构和功能。将猪囊尾蚴头节单 链抗体基因与绿脓杆菌外毒素 PE40 基因连接，装入表达载体 pET-28(a)中，以 获得重组毒素，研究其对猪囊尾蚴的杀灭作用。 从绿脓杆菌 ATCC27853 菌株 中提取基因组，根据 GenBank 发表的绿脓杆菌外毒素基因全序列，自行设计引 物，分别引入 Xba和 Hind酶切位点。 采用 PCR 方法扩增 PE40 基因，在 反应体系中加入 10总体积的甘油，电泳检测，纯化的 PCR 产物与 pMD18-T 载 体连接构建质粒 pMD18-T-PE40，转入大肠杆菌感受态 JM109 中，蓝白斑筛选阳 性克隆菌，提取
13、质粒进行酶切鉴定及 PCR 鉴定，并测序。 质粒 pMD18-T- PE40 经：Xba和 Hind双酶切后电泳显示 2692bp 和 1083bp 两条带，测序结 果显示扩增的 PE40 基因共有 10 个碱基发生改变，变异的碱基引起 7 个氨基酸 发生变化，但 PE40 肽段的重要活性位点与绿脓杆菌标准产毒株 PA103 相比均未 发生变化。 含有 ScFv 基因的质粒 pMD18-T-ScFv 已经构建，且 ScFv 基因两 端的酶切位点分别为 EcoR和 Xba，用 Xba和 Hind分别对质粒 pMD18-T- PE40 和 pMD18-T-ScFv 进行双酶切，利用 Xba和 Hi
14、nd酶切位点将 PE40 基因 与质粒 pMD18-T-ScFv 相连接，转入大肠杆菌感受态 JM109 中，挑取阳性菌酶切 鉴定。 经酶切电泳分析，得到大小约为 1800bp 的目的片段，与预期结果相 同，说明 ScFv 与 PE40 已连接成功。用 EcoR和 Hind分别对重组质粒 pMD18-T-ScFv-PE40 和表达载体 pET-28(a)进行酶切，将 ScFv-PE40 转入 pET- 28(a)表达载体中构建融合毒素 pET28-ScFv-PE40，转入大肠杆菌感受态细胞 DH5 中，挑取阳性菌落提取质粒，酶切电泳检测，得到目的条带大小约为 1800bp，保存菌种，为进一步研
15、究重组免疫毒素对猪囊尾蚴的杀灭作用奠定基 础。 猪囊尾蚴病是全球性寄生性蠕虫病，发展中国家更为常见，尤其在我国，该病 的流行给人民生产和生活带来诸多危害，给人类的健康带来严重的影响。我国 至少已有 31 个省(市、自治区)有过该病的报道，囊尾蚴病患者约 1000 万，每 年屠宰的囊尾蚴病猪约 1200 万头，直接经济损失约 20 亿元。脑囊尾蚴病对人 类的健康危害极大，在某些发展中国家，脑囊尾蚴病是引起人死亡的主要原因 之一。 由于抗药性的不断出现以及药物残留等问题的严重性，使得利用免疫 预防技术来取代药物成为控制猪囊尾蚴病的必然。免疫毒素是一种导向药物， 它将毒素基因和靶向基因融合，表达融合
16、蛋白，具有识别和选择性地破坏受体 靶细胞的功能，它由导向部分和毒性部分组成。 绿脓杆菌外毒素通常作为重 组毒素的毒性成分，其毒性本质是它能够催化真核细胞延伸因子的 ADP 核糖基 化，阻止肽链延长并中断细胞蛋白质的合成而行使细胞毒作用。作为重组毒素 的导向部分，除能够与特定靶细胞表面受体结合外，同时能够与毒素基因相融 合，表达出融合蛋白，且二者不影响各自独立结构和功能。将猪囊尾蚴头节单 链抗体基因与绿脓杆菌外毒素 PE40 基因连接，装入表达载体 pET-28(a)中，以 获得重组毒素，研究其对猪囊尾蚴的杀灭作用。 从绿脓杆菌 ATCC27853 菌株 中提取基因组，根据 GenBank 发表的绿脓杆菌外毒素基因全序列，自行设计引 物，分别引入 Xba和 Hind酶切位点。 采用 PCR 方法扩增 PE40 基因，在 反应体系中加入 10总体积的甘油，电泳检测，纯化的
