《GrB和PFP在胃癌中表达及意义与局部免疫状态的初步研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《GrB和PFP在胃癌中表达及意义与局部免疫状态的初步研究（78页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、 G r B 和P F P 在胃癌中表达及意义与局部免疫状态的初步研究中文摘要研究背景和目的：胃癌是消化道最常见的恶性肿瘤，其发生是一个复杂的过程。一般认为，胃黏膜上皮经慢性萎缩性胃炎、肠上皮化生和非典型性增生之后，可能会发展为胃癌。当肿瘤发生后，机体可通过免疫效应机制发挥抗肿瘤作用。近年来认为，在抗肿瘤免疫效应中，细胞免疫是抗肿瘤免疫的主力，体液免疫通常起协同作用。细胞免疫的效应细胞主要为活化的细胞毒T 淋巴细胞( C y t o t o x i cTl y m p h o c y t e s ，C T L ) 和自然杀伤细胞( N a t u r ek i l l e rc e l l ，
2、N K ) ，它们可通过穿孔素( p e r f o r i n ，P F P ) 颗粒酶B ( g r a n z y m e B ，G r B ) 介导的细胞毒途径和F a s F a s L 介导的细胞凋亡途径发挥作用，其中P F P G r B 介导的细胞毒作用是主要途径。G r B 是C T L 和N K 细胞中含量最丰富、发挥细胞毒作用最快且有效的颗粒酶，是主要的效应分子。P F P 是发挥细胞毒作用的另一特征性标志物，它与G r B 共存于活化的C T L 和N K 细胞胞浆中。G a B 与P F P 主要表达于C D 4 + C T L 、C D 8 + C T L 及N K
3、 细胞，其中以C D 8 + C T L 和N K 细胞为主，故在肿瘤组织中浸润的G r B + 和P F P + 的淋哩墼型丑酗锄瓤陋鼬隧划迄 近年来国内外研究发现，和P F P 不仅存在于C T L 和N K 细胞中，而且也存在于其它一些细胞中，尤其值得关注的是在肿瘤细胞中发现G r B 和P F P 的表达。目前研究显示，它们不仅可在一些淋巴肿瘤细胞中表达，而且也发现G r B 、P F P 在人体乳腺癌和肺癌等上皮源性癌细胞中的表达。我们先前研究发现，G r B 在胃良恶性组织中也有表达，并认为胃癌组织中表达的G r B 可能发挥其细胞毒作用抑制周围的局部免疫反应，但G r B + 的
4、胃癌细胞是否具有细胞毒淋巴细胞( C L s )的生物学特征尚不清楚。胃黏膜是由多种不同结构和功能的细胞所构成的一种十分复杂的上皮组织，由此发生的恶性肿瘤一胃癌是如何发生的? 起源于哪一种细胞? 起始部位何在? 发生发展过程如何? 这些问题的解决有赖于进行胃癌组织发生的研究。近年有研究显示，胃癌细胞还可能起源于骨髓源性细胞( B M D C ) ，提出了胃癌细胞非上皮起源的新学说。在我们先前研究基础上，本研究旨在探讨G r B 和P F P 在胃癌中的表达情况及意义与局部免疫状态的关系。全文分两部分：在第一部分，主要探讨P 聩在良恶性胃上皮细胞是否亦有表达? 其表达是否与Q 旦- ，一_ ，7
5、 、，- 4 - 4 ，、，- ，、，- ，、- ，、，。- _ - ，、- 一有共表达关系? 旨在揭示G r B + 胃癌细胞是否具有细胞毒淋巴细胞样的生物学表型特征。从而可能为胃癌细胞的非上皮起源学说提供了强力佐证，为进一步研究G r B + 胃癌生物学功能奠定基础。在第二部分，主要探讨在胃癌患者其胃切缘癌旁癌组织中浸润的P F P + T I L 细胞密度的变化，从而揭示胃癌局部免疫状态的变化及其意义。方法：选取术前未进行放疗、化疗、免疫治疗及其它治疗，经外科行胃癌根治性或姑息性切除术后患者标本3 5 例，收集其相应完整的临床及病理学资料。采用免疫组织化学P V 法同步检测胃癌患者的切缘
6、组织癌旁组织癌组织相应转移淋巴结组织中G r B 与P F P 蛋白的表达情况以及肿瘤周围浸润P F P + T I L 细胞数量及分布情况并结合临床病理进行分析。结果：第一部分：1 、G r B 蛋白在胃切缘组织、癌旁组织、癌组织中均有表达，阳性率分别是4 0 0 0 ( 1 4 3 5 ) ，4 2 8 6 ( 1 5 3 5 ) ，4 8 5 7 ( 1 7 3 5 ) ，相互之间差异无显著意义( P O 0 5 ) ；同步检测P F P ，发现在所有患者的胃切缘、癌旁、癌组织中P F P 均为阴性表达，仅见胃不同部位组织间质中P F P + T I L 细胞有散在表达可作阳性内对照；同
7、时发现G r B + 与G r B 。胃癌组织对应胃切缘组织、癌旁组织G r B 表达率均有显著性差异；2 、G r B 在胃癌组织中的表达水平与患者的年龄、组织分化程度、浸润深度及T N M 分期病理因素无显著差异，( 尸 O 0 5 ) ；而与患者的性别、淋巴结转移两组间的差异显著，( 尸 O 0 5 ) 。第二部分：1 、在胃切缘组织、癌旁组织、癌组织中均可看到不同程度浸润于组织间质中的P F P + T I L 细胞。切缘与癌旁比较( 尸如0 1 ) ；癌组织与癌旁比较( P O 0 5 ) 。2 、胃癌组织周围浸润的P F P + T I L 细胞密度在浸润深度、淋巴结转移、T N
8、M 分期有显著性差异，( 尸 O 0 5 ) ，S y n c h r o n o u sd e t e c t i o no ft h eP P Fi ng a s t r i cm a r g i n ，a d j a c e n tc a r c i n o m aa n dm e t a s t a t i cl y m p ht i s s u e P F P +T I Lc e l la r es c a t t e r e di n s t r o m ao fd i f f e r e n tp a r t so ft h es t o m a c ht i s s u e ，
9、C a nb eu s e da sa ni n t e r n a lp o s i t i v ec o n t r 0 1 G r B + a n dG r B g a s t r i cC a n C e rc o r r e s p o n d i n gt op e r i p h e r a lt i s s u e s ，t h ee x p r e s s i o no fa d j a c e n tt i s s u e sG r Bs i g n i f i c a n td i f f e r e n c e 2 ，G r Be x p r e s s i o ni
10、ng a s t r i cC a n C e rW a sn os i g n i f i c a n td i f f e r e n c ei na g el e v e l ，h i s t o l o g i c a lg r a d e ，d e p t ho fi n v a s i o n7i np r i m a r yf o c iw a s2 6 1 ( 6 2 3 ) ，n os i g n i f i c a n td i f f e r e n c eb e t w e e nt h et w o ，p0 0 5 ) P a r tI I ，l ，P F P + T
11、 I Lc e l l sc a nb es e e ni nv a r y i n gd e g r e e so fi n t e r s t i t i a li n f i l t r a t i o ni nd i f f e r e n tg a s t r i ct i s s u e M a r 百nc o m p a r e dw i t ht h ea d j a c e n t ( P 5 c m 的切缘组织，4 多聚甲醛固定，石蜡包埋。病理科提取相应的胃癌转移淋巴结组织。( 4 ) 胃癌组织经病理H E 染色明确其肿瘤病理类型，相应的癌旁、切缘组织经病理检查排除肿瘤累及
12、。1 2 临床及病理学资料符合以上4 条纳入标准的病例共计3 5 例，均有完整的临床及病理资料。其中男性2 3 例，女性1 2 例，年龄3 5 7 8 岁，平均年龄5 0 2 岁。肿瘤组织学类型按W H O 分级，其中高、中分化腺癌1 2 例，低分化腺癌及未分化癌2 3 例；有淋巴转移2 3 例，无淋巴转移1 2 例；浸润未超过浆膜层( T 1 T 2 ) 9 例，超过浆膜层( T 3 T 4 ) 2 6 例：根据国际抗癌联盟( r o c c ) 关于胃癌T N M 分期方法进行l 临床分期：I 期和I I 期共1 6例，期和期共1 9 例。2 主要的实验仪器自动密封式脱水：英国珊顿病理仪器
13、公司埋机：常州中威电子仪器2 3L e i c A 剐2 2 4 5 切片机：德国L e i c a 公司2 4 病理组织漂烘仪：常州市中威电子仪器厂2 5烘片机：德国L E I C AI 蝴2 2 4 52 6 高压锅：苏泊尔高压锅2 7电子分析天平F X 3 2 0 “ 日本A & D 公司2 8电热鼓风干燥箱W 6 1 3 6 型：天津市泰斯特仪器有限公司2 9 隔水式电热恒温培养箱G H 6 0 0 型：西安明克斯检测设备有限公2 1 0 微量加样器：1 0 I t l 、1 0 0 I t l 、1 0 0 0 1 a l ：芬兰百得公司2 1 1 超速离心机：德国艾本得公司2 12
14、 普通光学显微镜O L Y M P U SC H 2 0 B I M F 2 0 0 ：日本o l y m p u s 公司2 1 3 普通医用冰箱B C D 2 1 1 型：青岛海尔公司3 主要试剂3 1 鼠抗人P F P 单克隆抗体购于北京中杉金桥生物技术有限公司兔抗人G r B 多克隆抗体购于美国A B z o o m 公司鼠二步法检测试剂盒( P V - 6 0 0 1 ) ：北京中杉金桥生物技术有限公司兔二步法检测试剂盒( P V 6 0 0 2 ) ：北京中杉金桥生物技术有限公司多聚甲醛：成都金山化学试剂有限公司乙醇：成都金山化学试剂有限公司二甲苯：上海化学试剂公司盐酸：上海化学试
15、剂公司苏木素：上海化学试剂公司中性树胶：福州迈新公司多聚赖氨酸：美国s i g m a 公司D A B 显色剂：北京中杉金桥生物技术有限公司3 2 所需试剂配制1 P B S ( O 0 1 M ) 缓冲液的配制：8 克N a C l 、0 2 克K C l 、O 2 4 克K H 2 P 0 4 、3 6 克N a 2 H P 0 4 1 2 H 2 0 J l l1 0 0 0 m l 双蒸水溶解，调节P H 值至7 4 。2 枸橼酸盐抗原修复液( O 0 1 M ) 的配制：O 4 克柠檬酸、3 4 5 克柠檬酸三钠2 H 2 0 2 J N1 0 0 0 m l 双蒸水溶解，调节P H
16、 值至6 0 。3 D A B显色液的配制( 临时用时新鲜配制) ：l m l 双蒸水中逐一滴加A 液、B液、C 液5 0 9 l ，避光配制。4 实验方法4 1 玻片的处理( 1 ) 将玻片浸泡在洗洁精溶液中过夜，流水冲洗干净。( 2 ) 蒸馏水清洗玻片后，放在片架上，置4 5 “ C 烤箱内烤干。( 3 ) 将玻片浸泡在硫酸清洁液中过夜，流水冲洗干净。( 4 ) 蒸馏水清洗玻片后，放在片架上，置4 5 。C 烤箱内烤干。( 5 ) 将玻片浸泡在9 5 的乙醇中过夜。( 6 ) 将玻片从9 5 的乙醇中捞出，放在片架上，置4 5 “ C 烤箱内烤干。( 7 ) 将多聚L 赖氨酸防脱片剂( 玻片粘附剂) 涂在玻片上，晾干备用。4 2 石蜡标本的制作及切片( 1 ) 取胃切缘组织、癌旁组织、癌组织各1 份；( 2 ) 置4 多聚甲醛( p H 7 4 ) 中固定8
