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1、母血浆胎儿游离母血浆胎儿游离 检测基检测基 因因作者：杜丽,蒋玮莹,席红利单位：中山大学中山医学院医学遗传学教研室； 广东省妇幼保健院， 广东 广州【摘要】 【目的】 建立一种比较稳定可靠的无创性获取胎儿遗传物质的方法。 【方法】 从孕妇外周血血浆中提取胎儿游离，以染色体上的区域为靶序列进行扩增，扩增产物经测序进行确认，由此来确定我们获得的胎儿。 【结果】 我们利用获取胎儿游离的方法对例孕妇进行检测，例获得了成功，除例未随访到结果之外，其他例的随访结果和我们实验判断结果一致。 【结论】 我们初步建立的这种获得胎儿游离的方法具有可靠性，胎儿游离可以用于性连锁遗传病和单基因疾病的产前诊断。 【关键
2、词】 胎儿游离； 母血浆； 无创性产前诊断； 基因 ， -， -（ ， ， - ， ， ； ， ， ）： 【】 【】 ， 【】 ， ， 【】 - ： ； ； ； 传统的获取胎儿组织的方法，虽然目前仍被广泛应用， ，然而无创伤性获取胎儿遗传物质进行产前诊断一直是临床追求的目标。胎儿游离的发现为产前诊断开辟了新的途径 ，此后，胎儿游离很快在孕早期就开始应用于某些性连锁隐性遗传病、妊娠相关疾病、染色体病、胎儿血型检测等很多疾病的产前诊断中- 。我们初步建立了获取胎儿游离的方法，以染色体上的区域为靶序列进行扩增，扩增产物经测序进行确认，由此来确定我们获得的胎儿。为下一步进行遗传性疾病的无创性产前诊断建
3、立了技术平台。 材料和方法 临床资料孕妇外周血标本均取自年月至年月，在中山大学附属第一医院妇产科做产前和地中海贫血筛查的标本。经知情同意，抽取了其中例孕妇的外周静脉全血各 ，分离出 血浆提取胎儿游离。实验中有关胎儿的性别绝对保密，产后随访胎儿性别。另各取名健康男性和未孕女性外周血 作为基因阳性和阴性对照。 胎儿游离的提取和鉴定利用 参考试剂盒的说明并加以改进提取胎儿游离，以染色体上的区域为靶序列进行扩增，扩增产物经测序进行确认，由此来确定我们获得的胎儿。实验中所用的内对照引物为基因的引物。根据扩增片段的大小选择相应浓度的琼脂糖凝胶进行电泳，溴乙锭染色，紫外灯下观察扩增结果。胎儿游离扩增阳性者测
4、序。 结果 分析及随访结果在我们所研究的位孕妇中，有例成功获得胎儿游离，经随访确认例怀有男胎，例怀有女胎，例未随访到结果，未知胎儿性别。在每一次的实验过程中，阳性及阴性对照都得到准确扩增。操作过程全部由女性完成。结果分析及随访结果见表。 测序结果对于片段扩增阳性的产物进行测序，测序结果见图，得到的测序序列和我们的目标序列相同。 讨论 胎儿游离相对于胎儿细胞进行产前诊断的优点目前产前诊断的方法大多是通过绒毛膜取样、羊膜腔穿刺或者脐静脉穿刺，这些方法对孕妇及胎儿都存在潜在的危险性。人们一直期待一种非创伤性的产前诊断方法在将来可以用于临床。研究者们曾经一度把希望寄托于母体外周血中的胎儿细胞上，希望可
5、以通过富集胎儿细胞进行产前诊断。但是由于母体外周血中胎儿细胞数量太少、胎儿细胞富集率不高、方法复杂、价格昂贵，使分选胎儿细胞进行产前诊断非常困难。胎儿游离以较高的比率存在于母血浆中，不经过繁琐的胎儿细胞富集、分离、纯化及细胞核的提取过程，检测时间比胎儿细胞所需时间短，费用较低，而且所需的采血量也大大减少就可获得足够扩增的模板量。 胎儿游离进行产前诊断有待解决的问题由于我们提取得到的母血浆是胎儿游离和母亲游离的混合物，所以就要用胎儿特异性的标志来判断胎儿游离。人们最早和最常用的就是染色体上的特异序列，但是这种方法只适用于男性胎儿的，进行与性别有关的疾病的产前诊断。建立利用非性别鉴定胎儿的检测方法
6、是我们下一步研究的目标和工作重点。其次，我们还要优化各个环节使这种方法更稳定、可靠。目前我们的检测失败率较高，分析与目前的检测体系效率不高有关，我们在下一步的研究工作中可以采用巢式或者荧光定量进行检测提高检出率。【参考文献】1黄 珈，游泽山，陈宝江，等 羊水细胞的荧光原位杂交用于胎儿染色体非整倍体的产前诊断 中山大学学报：医学科学版， ，（）：- 2尹爱华，张畅斌，梁驹卿，等 应用复合荧光标记- 排除绒毛取材中母体细胞污染 中山大学学报：医学科学版， ，（）：- 3 ， ， ， ， ，（）：- 4 ， ， ， - ，（）：- 5 ， ， （） ， ，：- 6 ， ， ， ， ，（）：- 7 ， ， ， - ， ，（）：- 8 ， ， ， - ： ， ，（）：- 9 ， ， - ， ，（）：- 10 ， ， ， ： - ， ，（）：- 11 ， ， ， （） ， ， - ， ，（）：- 12 ， ， - - ， ，：- 13 ， ，
