《血小板源性生长因子BPDGFB信号通路在胃癌转移中的作用机制的实验研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《血小板源性生长因子BPDGFB信号通路在胃癌转移中的作用机制的实验研究（98页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、分类号：星Z 堑：至盟墨二墨ZU D C ：密级：重庆医科大学博士学位论文血小板源性生长因子_ B ( P D G F - B ) 信号通路在胃癌转移论文题目中的作用机制的实：验研究作者姓名郭轶指导教师姓名( 职称、单位名称)王子卫教授重庆医科大学附一院胃肠外科申请学位级别博士学科、专业名称外科学论文答辩年月2 0 1 3 年5 月2 0 1 3 年4 月 重庆医科大学一研究生学位论文独创性声明本人申明所呈交的论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得重庆医科大学或其他教育机
2、构的学位或证书而使用过的材料，与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。学位论文作者签名：身子多L日期：) o l 年了学位论文版权使用授权书本人完全了解重庆医科大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属重庆医科大学。本人保证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为重庆医科大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容( 保密内容除外) ，并编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他
3、手段保存论文。保密论文在解密后适用本授权书。论文作者签名：函块指导教师签名：彦 O 0 5 ) 。结论：P D G F - B 和P D G F R p 在胃癌组织中高表达并与胃癌的进展及转移关系密切；检测P D G F B 和P D G F R 1 3 的表达可以作为判断胃癌转移和预后的指标之一。1重庆医科大学博士研究生学位论文关键词：血小板衍生生长因子B ，血小板衍生生长因子受体1 3 ，胃癌，肿瘤转移第二部分：P D G F - B 慢病毒载体的构建、包装和P D G F - - 8 过表达胃癌细胞株的构建目的：构建P D G F - B 的慢病毒载体p L e n o - D C E
4、P D G F - B 并转染成功构建P D G F B 稳定过表达的胃癌细胞。方法：构建P D G F B 慢病毒载体p L e n o D C E P D G F - B ，感染2 9 3 T细胞，收集上清液测定病毒滴度。用慢病毒转染S G C 7 9 0 1 和B G C 8 2 3胃癌细胞株，用免疫荧光观察和w e s t e r n b l o t 方法鉴定P D G F B 稳定过表达胃癌细胞构建结果。结果：通过P C R 及酶切鉴定成功构建p L e n o D C E P D G F B 载体，包装并得到高滴度的病毒颗粒。用慢病毒转染后S G C 7 9 0 1 和B G C
5、8 2 3胃癌细胞免疫荧光观察呈绿色荧光，转染后S G C 7 9 0 1 和B G C 8 2 3 胃癌细胞中P D G F - B 蛋白表达明显高于常规S G C 7 9 0 1 和B G C 8 2 3 胃癌细胞( P o 0 5 ) 。结论：P D G F - B 过表达可以明显增强胃癌细胞的生长和侵袭能力，可能与胃癌进展和转移相关。其机制可能与P D G F B 自分泌作用激活P 1 3 K A K T 通路相关。重庆医科大学博士研究生学位论文关键词：P D G F B ，生长，侵袭，P 1 3 K A K T 通路第四部分P D G F B 信号通路与上皮间质化和胃癌转移的相关性及
6、其机制目的：探讨P D G F B 信号通路与上皮间质化和胃癌转移的相关性及其作用机制。方法：采用W e s t e r n b l o t 方法检测P D G F - B 过表达前后S G C 7 9 0 1和B G C 8 2 3 胃癌细胞中A K T - 1 、E R K 1 、E e a d h e r i n 和N e a d h e r i n 的蛋白表达情况，并进行比较分析。采用细胞共培养技术模拟激活P D G F B信号通路，用W e s t e m b l o t 和R T - P C R 方法检测共培养情况下常规S G C 7 9 0 1 和B G C 8 2 3 胃癌细胞
7、，共培养情况下P D G F B 过表达S G C 7 9 0 1和B G C 8 2 3 胃癌细胞中A K T - 1 、E R K 1 、E e a d h e r i n 和N e a d h e r i n 蛋白及m R N A 表达情况，并进行比较分析。结果：P D G F B 过表达前后S G C 7 9 0 1 和B G C 8 2 3 胃癌细胞中E R K 1 、E e a d h e r i n 和N e a d h e r i n 蛋白表达没有明显差异p O 0 5 ) ；P D G F B 过表达S G C 7 9 0 1 和B G C 8 2 3 胃癌细胞中A K T
8、- 1 蛋白表达明显高于常规S G C 7 9 0 1 和B G C 8 2 3 胃癌细胞( P O 0 5 ) 。P D G F B 过表达S G C 7 9 0 1 和B G C 8 2 3 胃癌细胞共培养前后A K T - 1 蛋白表达没有明显差异( P O 0 5 ) ，P D G F B 过表达S G C 7 9 0 1 和B G C 8 2 3 胃癌细胞共培养前后E R K 1 、E c a d h e r i n 和N - c a d h e r i n 蛋白表达有明显差异伊 0 0 5 )C o n c l u s i o n s ：O u rd a t ai n d i c
9、a t et h a te x p r e s s i o n so fP D G F - Ba n dP D G F R - 1 3w e r em u c hh i g h e ri ng a s t r i cc a r c i n o m at i s s u ea n dw e r ec o r r e l a t e dw i t hc a n c e rp r o g r e s s i o na n dl y m p h o g e n o u sm e t a s t a s i so fg a s t r i cc a r c i n o m a ；s u g g e s
10、tt h a td e t e c t i o no fP D G F Ba n dP D G F R - 1 3w e r ei m p o r t a n tm a r k e r sf o rj u d g m e n to ft u m o rm e t a s t a s i sa n dp r o g n o s i so fg a s t r i cc a r c i n o m aK e y w o r d s ：p l a t e l e t - d e r i v e dg r o w t hf a c t o rB ( P D G F - B ) ，p l a t e l
11、 e t d e r i v e dg r o w t hf a c t o rr e c e p t o r - 1 3 ( P D G F R 一1 3 ) ，g a s t r i cc a r c i n o m a ，t u m o rm e t a s t a s i sn 螂I IC o N S T R U C T I o NO FL E N T 认LV E C T O RP L E N o D C E P D G F BA N DS T A B L EP D G F BO V E R E X P R E S S I O NG A S T R I CC A R C I N O I
12、 AC E L LU N EO b j e c t i v e ：T oc o n s t r u c tal e n t i v i r a lv e c t o rt h a ts t a b l ye x p r e s sp l a t e l e t d e r i v e dg r o w t hf a c t o rB ( P D G F - B 1a n dt oc o n s t r u c ts t a b l eP D G F - Bo v e r e x p r e s s i o ng a s t r i cc a r c i n o m ac e l ll i n
13、eb yl e n t i v i r a lv e c t o rt r a n s f e c t i o n9重庆医科大学博士研究生学位论文M e t h o d s ：T h el e n t i v i r a lv e c t o rp L e n o - D C E P D G F - Bw a sc o n s t r u c t e da n dt r a n s f e c t e di n t o2 9 3 Tc e l l s T h es u p e m a t a n tc o n t a i n i n gt h el e n t i v i r u sp a r
14、 t i c l e sw a sh a r v e s t e dt od e t e r m i n et h ev i r u st i t e ra n dh i g ht i t e rl e n t i v i r u sp a r t i c l e sw a sg a t h e r e d T h e nP D G F - Bl e n t i v i r a lv e c t o rw a st r a n s f e c t e di n t oS G C 7 9 0 1a n dB G C 8 2 3g a s t r i cc a r c i n o m ac e l
15、 l sf o rc o n s t r u c t i o no fs t a b l eP D G F - Bo v e r e x p r e s s i o ng a s t r i cc a r c i n o m ac e l ll i n e s W e s t e m - b l o ta n di m m u n o f l u o r e s c e n c ew e r eu s e df o re v a l u a t i o no ft h ec o n s t r u c t i o no fs t a b l eP D G F - Bo v e r e x p
16、r e s s i o ng a s t r i cc a r c i n o m ac e l ll i n e sR e s u l t s ：T h el e n t i v i r a lv e c t o rW a sc o r r e c t l yc o n s t r u c t e da n dv e r i f i e db ys e q u e n c i n g H i g ht i t e rP D G F Bl e n t i v i r a lv e c t o rW a sa c q u i r e ds u c c e s s f u l l yA f t e rt r a n s f e c t i o n ，t w og a s t r i cc a r c i n o m ac e l ll i n eS G C 7 9 01a n dB G C 8 2 3w e r eg r e e nc o l
