《鱼腥蓝细菌PCC7120中细菌酪氨酸激酶和小分子量酪氨酸磷酸酶的功能研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《鱼腥蓝细菌PCC7120中细菌酪氨酸激酶和小分子量酪氨酸磷酸酶的功能研究（90页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、分类号华中农业大学博士学位论文密级鱼腥蓝细菌P C C7 1 2 0 中细菌酪氨酸激酶和小分子量酪氨酸磷酸酶的功能研究S T U D Yo NF U N C T I O N o FB A C T E R I A LT Y R o S I N EK I N A S E SA N DL O W M o L E C U L A R W E I G H TP R o T E I NT Y R o S I N EP H O S P H A T A S E SI NA N A B A 压! ? 、阴S P P C C7 1 2 0研究生学导 J、，：谭慧：0 6 0 2 5 0 0 0 2指导教师：陈雯莉
2、教授指导小组：陈雯莉教授张承才教授，7 _ o 王莉副教授专业：微生物学获得学位名称：理学博士研究方向：蓝细菌分子生物学获得学位时间：二O 一三年六月华中农业大学生命科学与技术学院二O 一三年六月华中农业大学学位论文独创性声明及使用授权书学位论文如需保密年月日 是否保密歪解密时间独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得华中农业大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，指导教师对此进行了审定。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中做
3、了明确的说明，并表示了谢意。研究生躲谭笔帆& 驴J 【净1 , 9 ，多日学位论文使用授权书本人完全了解“华中农业大学关于保存、使用学位论文的规定“ ，即学生必须按照学校要求提交学位论文的印刷本和电子版本；学校有权保存提交论文的印刷版和电子版，并提供目录检索和阅览服务，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。本人同意华中农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。注：保密学位论文在解密后适用于本授权书。糊姗躲许攀黜名：书确签名目期：扣f 年二月易日签名日期：铷f ；年占月f 弓日 注：请将本表直接装订在学位论文的扉页和目录之闻鱼腥蓝细菌P C C7 1
4、2 0 中细菌酪氨酸激酶和小分子量酪氨酸磷酸酶的功能研究目录摘要iA b s t r a c t i i缩略语表i i i1 。前言1日U 舌11 1 蓝细菌简介11 2 鱼腥蓝细菌P C C7 1 2 0 异形胞发育进程简述21 2 1 鱼腥蓝细菌P C C7 1 2 0 异形胞形态及生理特点21 2 2 异形胞发育进程31 3 细菌的酪氨酸磷酸化l O1 3 1 细菌型酪氨酸激酶( B Y - k i n a s e s ) 一1 11 3 2 酪氨酸磷酸酶151 3 3B Y - k i n a s e s 和L M W - P T P 的生理功能1 91 4 研究目的与意义2 l2 材
5、料与方法2 22 1 菌株和质粒2 22 2 培养基配方以及培养条件2 42 3 主要分子生物学试剂2 52 4 缓冲液和反应试剂2 52 4 1E c o l i 感受态细胞制备试剂2 52 4 2 蛋白质纯化试剂2 52 4 3 磷酸化反应试剂2 52 4 4W e s t e r nB l o t 试剂2 62 4 5 蛋白胶银染溶液2 62 5 实验方法2 62 5 1 质粒D N A 的制备及相关操作2 62 5 2 质粒构建2 62 5 3 质粒D N A 的转化2 7华中农业大学2 0 1 3 届博士研究生学位论文2 5 4H i s t a g 融合蛋白质的诱导和纯化。2 82
6、 5 5B r a d f o r d 法蛋白质定量2 92 5 6 蛋白激酶的自磷酸化和底物磷酸化反应3 02 5 7 磷酸酶去磷酸化反应3 02 5 8 磷酸酶活性测定3 02 5 9P U L L D O W N 实验3 02 5 1 0 变性聚丙烯酰胺凝胶( S D S P A G E ) 电泳。312 5 1 1 蛋白胶的银染3 22 5 1 2W e s t e r nB l o t 3 22 5 1 3 鱼腥蓝细菌P C C7 1 2 0 总D N A 的抽提3 32 5 1 4 鱼腥蓝细菌P C C7 1 2 0 的三亲本杂交3 32 5 15 接合转移子的验证3 42 5 1
7、 6 鱼腥蓝细菌P C C7 1 2 0 的缺氮诱导3 42 5 1 7 鱼腥蓝细菌P C C7 1 2 0R N A 的提取和纯化3 52 5 1 8 反转录R N A 及实时荧光定量反转录P C R ( R e a l - t i m eR TP C 鼬3 52 5 2 0 固氮酶活性的测定3 52 5 2 1 鱼腥蓝细菌P C C7 1 2 0 胞外多糖的提取和测定3 62 5 2 2 硫酸苯酚法测定多糖含量3 73 结果与分析3 83 1B Y - k i n a s e s 和L M W - P T P 的生物信息学分析与鉴定3 83 1 1B Y - k i n a s e s 的
8、生物信息学分析3 83 1 2L M W - P T P s 的生物信息学分析与鉴定4 13 2B Y - k i n a s e s 和L M W - P T P 的体外酶活鉴定4 33 2 1B Y - k i n a s e s 自磷酸化活性检测4 33 2 2L M W - P T P s 体外磷酸酶活性检测4 43 3A l r 5 0 6 8 参与了鱼腥蓝细菌P C C7 1 2 0 异形胞外壁特异性多糖层的形成4 73 3 1A i r 5 0 6 8 超表达菌株O x 5 0 6 8 的构建4 73 3 2 超表达菌株O x 5 0 6 8 的表型观察4 83 3 3A i r
9、 5 0 6 8 点突变超表达菌株的构建4 93 3 4A l r 5 0 6 8 点突变超表达菌株O x R l 5 K 的表型5 01 1鱼腥蓝细两P C C7 1 2 0 中细菌酪氨酸激酶和小分子量酪氨酸磷酸酶的功能研究3 3 5O x R l 5 K 的超微结构5 13 3 6O x 5 0 6 8 和O x R l 5 K 的固氮酶活性513 3 7O x 5 0 6 8 和O x R l 5 K 菌株中多糖合成相关基因h e p A 和h e p C 的转录5 33 3 8a l r S 0 6 8 基因缺氮诱导后的转录水平5 43 4 鱼腥蓝细菌P C C7 1 2 0 中B Y
10、 - k i n a s e s 的基因功能研究5 53 4 1B Y - k i n a s e s 的缺失突变体和超表达菌株的构建与筛选5 53 4 2B Y - k i n a s e s 的缺失突变体和超表达菌株缺氮后的表型5 63 4 3B Y - k i n a s e s 的缺失突变体和超表达菌株总糖含量的测定5 73 5 在鱼腥蓝细菌P C C7 1 2 0 中寻找A l r 5 0 6 8 互作蛋白5 83 5 1A l r 5 0 6 8 双点突变蛋白的获得5 93 5 2 突变蛋白A l r 5 0 6 8 C D 与作用底物共纯化6 04 讨 仑6 24 1A l r
11、5 0 6 8 是一个典型的L M W - P T P ，在鱼腥蓝细菌P C C7 1 2 0 基因组中具有不可替代的地位6 24 2B Y - k i n a s e s 家族的基因功能6 34 3A l r S 0 6 8 在异形胞特异性多糖形成过程中的作用6 4参考文献6 6附录一本实验中所用引物。7 7附录二p 3 5 蛋白条带质谱结果7 9致谢81I I I鱼腥蓝细菌P C C7 1 2 0 中细菌酪氨酸激酶和小分子量酪氨酸磷酸酶的功能研究摘要鱼腥蓝细菌P C C7 1 2 0 ( A n a b a e n as p P C C7 1 2 0 ) 是一种丝状蓝细菌，具有生物固氮功能。当环境中缺乏化合态氮源的时候，菌丝上每隔l O 2 0 个营养细胞就会有一个发育成为异形胞，固定空气中的氮气。异形胞的固氮产物会输送给周围的营养细胞，营养细胞则为异形胞提供其生命活动所需要的碳源，整条菌丝由此维持在缺氮环境下
