《姜黄素联合羟基喜树碱诱导膀胱癌BIU87细胞凋亡的体外实验研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《姜黄素联合羟基喜树碱诱导膀胱癌BIU87细胞凋亡的体外实验研究（44页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、U D C密级重庆医科大学硕士学位论文论文题目作者姓名姜黄素联合羟基喜树碱诱导膀胱癌BIU - 8 7 细胞凋 亡的体外实验研究何江指导教师姓名( 职称、单位名称)王德林重庆医科大学附属第一医院泌尿外科申请学位级别亟士学科、专业名称外科学( 泌尿外科)论文答辩年月2 0 1 3 年5 月重庆医科大学研究生学位论文独创性声明 本人申明所呈交的论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得重庆医科大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已
2、在论文中作了明确的说明并表示谢意。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。 学雠文作者鲐亿嗽加f 多，寻学位论文版权使用授权书本人完全了解重庆医科大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属重庆医科大学。本人保证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为重庆医科大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容( 保密内容除外) ，并编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他手段保存论文。保密论文在解密后适用本授权书。论文作者签名：气百指导教师签名：夕二髟卜日期：
3、加7 ；! 纵eC 7目录英汉缩略语名词对照一l中文摘要3英文摘要一5论文正文：姜黄素联合羟基喜树碱诱导膀胱癌B I U 8 7 细胞凋亡的体外实验研究7育才言71 材料与方法92 结果1 63 讨论2 2全文总结2 5参考文献2 6文献综述。3 l致谢。4 0硕士期间发表的论文4 l重庆医科大学硕士研究生学位论文英文缩写C C MT o pIC P TH C P TI RE D T AP B SR N Ac D N Am R N AR P M I1 6 4 0D E P CY A PB C AS D S3 - A c t i nP V D FP A G EB S AA c r - B i s
4、A P ST E M E Dd d H 2 0T B S TD A BE C L英汉缩略语名词对照英文全称中文全称C u r c u m i n姜黄素T o p o i s o m e r a s eI拓扑异构酶IC a m p t o t h e c i n喜树碱H y d r o x y c a m p t o t h e c i n羟基喜树碱I n h i b i t o r yr a t e抑制率E t h y l e n c eD i a m i n eT e t r a a c e t i cA c i d乙二胺四乙酸P h o s p h a t eb u f f e r e d
5、s a l i n e磷酸盐缓冲液R i b o n u c l e i ca c i d核糖核酸C o m p l e m e n t a r yD N A互补D N AM e s s e n g e rR N A信使R N AR o s w e l lP a r kM e m o r i a lI n s t i t u t el6 4 0l6 4 0 培养基D i e t h y l p y r o c a r b o n a t e焦磷酸二乙腊Y e s a s s o c i a t e dp r o t e i nY e s 相关蛋白B i c i n c h o n i n i
6、ca c i d二喹啉甲酸S o d i u md o d e c y ls u l f a t e十二烷基硫酸钠B e t a a c t i n肌动蛋白OP o l y v i n y l i d e n ef l u o r i d e聚偏氟乙烯P o t y a c r y l a m i d eg e le l e c t r p h o r s i s聚丙烯酰胺凝胶电泳B o v i n es e r u ma l b u m i n胎牛血清蛋白B i s A c r y l a m i d e甲叉基双丙烯酰胺A m m o n i u mp e r s u l f a t e过硫
7、酸铵T e t r a m e t h y ld i e t h y l a m i n e四甲基二乙胺d o u b l ed i s t i l l e dH 2 0双蒸水T i s b u f f e r e d s a l i n et w e e nT B S T 洗膜缓冲液d i a m i n o b e n z i d i n e二氢基联苯胺E l e c t r o c h e m i l u m i n e s c e n c e电化学发光重庆医科大学硕士研究生学位论文S PH R PD M S oD A P 【A n t i b i o t i n s t r e p t
8、 o m y c i np e r o x i d a s eH o r s er a d i s hp e r o x i d a s eD i m e t h y ls u l f o x i d e4 , 6 - d i a m i d i n o - - 2 - p h e n y l i n d o l eF C MF l o wc y t o m e t r yR F P C Rk Db pC C K 一8P M S FF B SP O MT r i t o n X 10 0链霉素抗生物素过氧化物酶辣根过氧化酶二甲基亚砜4 , 6 二咪基2 苯基吲哚流式细胞仪R e V e r s
9、 e r a n s c r i p t a s e - p 。l y m e r a s ec h a i l l逆转录聚合酶链 r e a c t i o nK i l o d a l t o nB a s e p a i rC e l lc o u n t i n gk i t 一8P h e n y l m e t h y l s u l f o n y l f l u o r i d eF e t a lb o v i n es e r u mP a r a f o r m a l d e h y d eO c t y lP h e n o x yP o l yE t h o x y
10、干道尔顿碱基对细胞增殖毒性检测试剂苯甲基磺酰氟胎牛血清多聚甲醛聚乙二醇辛基苯基醚S P S SS t a t i s t i c a lp a c k a g ef o rt h es o c i a ls c i e n c e社会科学统计软件包2重庆医科大学硕士研究生学位论文姜黄素联合羟基喜树碱诱导膀胱癌B I U 8 7 细胞凋亡的 体外实验研究摘要目的：通过观察姜黄素联合羟基喜树碱对人膀胱癌B I U 一8 7 细胞生长抑制作用和凋亡的影响，初步探讨其作用机制。方法：利用免疫组化检测膀胱癌和癌旁组织中Y A P 表达情况：培养人膀胱癌细胞B I U 8 7 ，用姜黄素和羟基喜树碱单独与
11、联合用药组处理肿瘤细胞，采用C C K 8 、F C M 检测细胞增殖、凋亡情况：然后利用R T - P C R 和w e s t e r nb l o t 法检测H i p p o 信号中Y A P 及T E A D I 基因的m R N A 和蛋白的表达变化。结果：姜黄素和羟基喜树碱均可有效抑制膀胱癌细胞B I U 一8 7 的增殖能力，且与药物剂量及时间有关联性；并且联合用药后肿瘤细胞抑制率明显大于单独用药组( P 3C l T I 的正常膀胱黏膜，膀胱癌标本中乳头状膀胱癌2 7 例，浸润性膀胱癌9 例。其中男女比例2 5 ：l l ，患者平均年龄5 7 - 3 岁，均为初发病例，无放化
12、疗治疗史。所有收集的标本均置于8 0 “ C冰箱保存。收集的每例组织切取适量置于4 多聚甲醛中，送入病理科切片处进行病理鉴定。经鉴定后发现所收取的标本均是膀胱癌组织和癌旁组织。然后进行免疫组化染色，具体步骤如下：I 烤片：将组织置于6 5 烤箱中干烤2 小时，以将残留在载玻片中的石蜡去除。2 在通风厨中进行常规二甲苯( 二甲苯I ：1 0m i n 、二甲苯I I ：2 0r a i n ) 脱蜡，梯度酒精( 无水乙醇I ：5r a i n 、无水乙醇I I ：5m i n 、9 5 乙醇：5r a i n 、8 0 乙醇：5m i n 、7 0 乙醇：5m i n ) 脱水。3 抗原修复：0
13、 1 胰蛋白酶，3 7 * C 孵育3 0r a i n ，滴加后孵育3 0m i n ，P B S 冲洗3 5r a i n 。4 细胞通透，暴露抗原决定族：T r i t o n 1 0 0 稀释为0 3 滴加后3 7 孵育3 0m i n ，P B S 冲洗3 X5r a i n 。重庆医科大学硕士研究生学位论文5 灭活内源性过氧化物酶：3 H 2 0 23 7 孵育3 0m i n ，P B S 冲洗3 5 r a i n 。6 正常羊血清工作液封闭，3 7 。C 卵 育1 0 一1 5r a i n ，倾去勿洗。7 滴加一一抗4 冰箱孵育过夜，P B S 缓冲液代替一抗作阴性对照，P
14、 B S 冲洗3次5 r a i n 次。8 滴加生物素标记的二抗工作液，3 7 。C 条件下放置3 0r a i n ，P B S 冲洗3 5r a i n 。9 滴加辣根过氧化物酶标记的链霉素工作液，3 7 。C 条件下放置3 0r a i n ，P B S 冲洗3 5r a i n 。1 0 D A B 反应染色，取D A B 浓缩液5 0u ! + 9 5 0u lD A B 稀释液，充分混匀。染色时间：分别D A B 染色3 0s 1m i n 左右，并在镜下观察染色情况。发现4 5S 染色最为合适。自来水充分冲洗后，苏木素复染，常规脱水，透明，干燥，封片。l1 倒置显微镜下照相。结
15、果判定：免疫组化的结果以细胞核和或细胞质中有棕黄色出现为阳性染色，评分：细胞中胞质反应大于5 0 ，胞核反应大于1 0 和胞质胞核中均有阳性表达3 种情况为高表达( + + ) ：单纯胞质反应小于5 0 ，胞核反应小于1 0 为蛋白低表达( + )胞核和胞质反应均小于1 0 的为不表达( ) 1 2 3J 。1 4 C C K - 8 法测定药物处理后B I U 一8 7 细胞增殖活性将复苏后人膀胱癌B I U 8 7 细胞在含1 0 胎牛血清的P R M I 1 6 4 0 培养液，3 7 。C 、5 C 0 2 孵育箱中培养，待细胞密度长至8 5 一9 0 时，用0 1 2 5 的胰酶将贴壁生长的细胞消化传代并分为4 组，即对照组、C C M 组、H C P T
