《沉默Clusterin表达对人脑胶质瘤U87细胞放射敏感性的影响》由会员分享，可在线阅读，更多相关《沉默Clusterin表达对人脑胶质瘤U87细胞放射敏感性的影响（65页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、分类号：R 7 3 9 4 l密级：重庆医科大学硕士学位论文论文题目作者姓名沉默C l u s t e r i n 表达对人脑胶质瘤U 8 7 细胞放射 敏感性的影响张蕴蕴指导教师姓名( 职称、单位名称)陈晓品教授吴永忠教授重庆医科大学附属第一医院肿瘤科重庆市肿瘤研究所申请学位级别硕士学科、专业名称肿瘤学论文答辩年月2 0 1 3 年5 月重庆医科大学研究生学位论文独创性声明本人申明所呈交的论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得重庆医科大学或其他教育机构的学位或证书而使用
2、过的材料，与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。 学位论文作者签名：磊乙鳓日期：矽眵，争，厂学位论文版权使用授权书本人完全了解重庆医科大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属重庆医科大学。本人保证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为重庆医科大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容( 保密内容除外) ，并编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他手段保存论文。保密论文在
3、解密后适用本授权书。论文作者签名：指导教师签名：日期：切f 弓汐【7搿谚z目录英汉缩略语名词对照l中文摘要3英文摘要7论文正文：沉默C l u s t e r i n 表达对人脑胶质瘤U 8 7 细胞放射敏感性的影响1 l前言1 1参考文献1 3第一部分：C l u s t e r i n 基因沉默对人脑胶质瘩U 8 7 细胞增殖、凋亡与侵袭性的影晌1 Sl 实验材料与方法1 52 结果2 53 讨论。3 04 小结。3 3参考文献。3 4第二部分沉默c l u s t e r i n 基因表达对胶质癌U 8 7 细胞放射敏感性的影响3 61 实验材料与方法3 62 结果。3 93 讨论。4l
4、4 ，J 、结。4 3参考文献4 4附图4 6全文总结4 9文献综述5 0致 射6 l攻读硕士学位期间第一作者发表论文6 2英文缩写A b “A r B p C L U ，。s C L U +1 1 C L U曼潮熙F C A 5F B SH S F tK D ，L 嫩2 K M N L S 0 D 。p O 吖p C RP 【P A G ER N A i 。r p mS D Ss H S P sS h R N A孤F英汉缩略语名词对照英文全称，A m i b o d v 。A p o p t o t i er a t e B a s ep a i r C l u s t e r i n 、融
5、瞄冀聪照飘o f a 燃燕礁、U d e a r 媛觋o f 尊旦要宝趣p 宴臻濑：蛔蛔趟宝l 曩勘 o 豫h 戤曼F l m ：S j 3 慨鼹氍a n a h s i ss j S I e l nF e t a lb o v i n es e r u l nH e a ts h o c kt a c t o r融k 尊如赐9 酝g l 孕蜒跳2 0 0 0M a t r i xm e t a l l o p r o t d n a s eN u c l e a rl o c a l i z a t i o ns i g l l 1 一O p t i c a ld e n s i t y t
6、P 哄3 童糕躲P o l 3 m e r a s ec h i nr e a c t i o np 蔓s p i 妫臻i o d i d e tP 鹭b 曼s D 妊测酝g dd e c t r o p h o r e s i sR N Ai n t e r f e r e n c eR o t a t i o np e rm i n u t eS o d i u m 勘o A s s o 。, Js a l i n eS m a l lh e a ts h o c kp r o t e h i sS h o , zh a i r p i nR N Ah n o rn e c r o s i
7、 sf a c t o r中文名称，抗体。凋亡率碱基对聚集素分秘型聚集素核型聚集素三磷酸脱氧核糖核酸流式细胞仪胎牛血清，热休克因子干道尔顿=脂质体2 0 0 0基质金属蛋白酶，核定位信号序列光密度值聚凝胺聚合酶链反应碘化丙睫丙烯酰胺凝胶电泳R N A 干扰转每分钟十二烷基硫酸钠小热休克蛋白短发夫R N A舯瘤坏死因子重庆医科大学硕士研究生学位论文n X 虫。U T R 弘f I 雷1 5s s u ei n h i b i t o ro fm e t a l l o p r o t e i n a s eU n t r a n s l a t e df 5 t n lb l o tr m g
8、i o n s非编码区w e s t 眦蛋白免疫印迹重庆医科大学硕士研究生学位论文沉默C l u s t e r i n 表达对人脑胶质瘤U 8 7 细胞放射敏感性的影响摘要第一部分：C l u s t e r i n 基因沉默对人脑胶质瘤0 8 7 细胞增殖、凋亡与侵袭性的影响目的：研究通过慢病毒介导的R N A 干扰技术沉默簇集蛋白( c l u s t e r i n ，C L U ) 的基因表达后，人脑胶质瘤U 8 7 细胞的增殖、侵袭及凋亡等生物学行为将会受到怎样的影响。方法：设计和合成靶向C L U 的s h R N A 序列，并构建到慢病毒的载体p l e n tif o x 3
9、 7 ，包被能成功表达各种s h R N A 载体的慢病毒。将慢病毒感染人脑胶质瘤U 8 7 细胞，R e a lt i m e - P C R 检测C L U 、M M P - 2 和T I M P - 2基因m R N A 水平，W e s t e r nB l o t 技术检测C L U 蛋白表达水平；运用M T T法、流式细胞仪A n n e x i nV P I 及T r a n s w e ll 体外侵袭实验法评价检测C L U 沉默后，对人脑胶质瘤U 8 7 细胞在增殖、凋亡及侵袭能力等方面所造成的影响。结果：特异性针对C L U 基因全长m R N A 的短发夹R N A (
10、s h R N A ) 在经过慢病毒包装后成功感染U 8 7 细胞，并在m R N A 和蛋白水平上对C L U 基因表达产生了特异性的抑制作用；通过M T T 结果证实实验组细胞在s C L U表达受到干扰后，其增殖明显受抑，与各对照组比较，差异具有统计学意义( P 0 0 5 ) ；同时实验组T I M P 一2 的m R N A 水平较各对照组明显升高，差异有统计学意义( P 0 0 5 ) 。此结果说明在靶向沉默C L U 表达后，胶质瘤U 8 7 细胞的删P 一2 表达显著下调，而对其有抑制作用的T I M P 一2 表达水平则明显增高。这两项指标与细胞的侵袭能力有关，提示随着C L
11、 U 基因的沉默，胶质瘤细胞的侵袭相关因子水平发生变化，从而导致其侵袭能力改变。2 8重庆医科大学硕士研究生学位论文08I_ 实验组#阴性对照I 阴性对照 I - 空白对照图I 一5R e a l t i m eP C R 检测U 8 7 细胞M M P 一2 及T I M P 一2 的m R N A 水平# P 0 0 5v 6 空白对照组( n = 9 ，i 6 )2 4U T T 法检测s C L U 基因沉默对0 8 7 细胞增殖的影响以感染后4 d 为开始时间，分别于2 4 、4 8 和7 2 h 检测各处理组细胞的吸光度( O D ) 值。如实验结果( 表1 - 1 ) 显示：在相
12、同时间内实验组细胞值较各对照组明显降低，差异显著( P ( 0 0 5 ) ；而这种差异在阴性对照组与空白对照组间则没有体现( P 0 0 5 ) 。按照公式增殖抑制率= ( 空白对照组O D 值一相应处理组0 D 值)空白对照组0 D 值1 0 0 ( 即空白对照组增殖抑制率为零) ，计算各组增殖抑制率。结果提示( 见图1 - 6 ) 实验组增殖抑制率较各对照组明显升高( P ( 0 0 5 ) ；而各阴性对照组的增殖抑制率与空白组间比较无明显差异( P 0 0 5 ) 。实验组U 8 7 细胞的增殖抑制率随着时间推移有上升趋势，其增殖能力与各对照组在相同时间点比较，明显受到抑制，差异有统计
13、学意义( P ( 0 0 5 ) 。以上结果说明慢病毒包装的C L Us h R N A l 在干扰s C L U 表达后对胶质瘤U 8 7 细胞的增殖能力有明显抑制作用。表1 Is C L U 基因沉默后各组吸光度( O D ) 值( 1 7 = 9 i S ) 慢病毒感染成功后时间( 、时)实验分组0 D 值2 44 87 2实验组0 4 2 5 0 0 5 4 *0 4 6 7 0 0 3 6 *0 5 3 0 0 0 3 1 爿c 阴性对照组10 6 8 9 0 0 8 1 木木0 8 4 7 0 0 2 9 木：I c1 0 6 1 0 1 3 2 术术2 9各组问莹6420000表达水平翌里重庆医科大学硕士研究生学位论文I 阴性对照组1 10 7 0 2 0 0 6 8 半半O 8 5 l 0 0 3 5 幸木1 1 3 9 0 1 4 3 木术I 空白对照组0 7 2 l 0 0 7 30 8 9 2 0 0 3 71 2 0 4 0 1 6 0 根0 0 5V S 空白组：l ：丰P 0 0 5V S 空白组2 4 流式细胞仪检测s C L U 基因沉默后胶质瘤U 8 7 细胞的凋亡率根据凋亡实验结果( 见表1 - 2 ，图1 - 7 ) ，实验组细胞凋亡率明显高于阴性对照组及空白对照组，为( t 7 9 3 1 8 7 5 ) ，与各对照组
