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1、暨南大学博士学位论文VEGF mRNA反义核酸对白血病细胞药物敏感性的影响姓名：费嘉申请学位级别：博士专业：内科血液学指导教师：张洹2003.4.1独创性声明本入声鹅耩呈交豹学经论文是本人在嚣照搬母下避器熟磺究王捧及取褥戆研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不戗含为获得或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均跫在论文中俸了臻硫豹说臻势表示辩意。学位论文作者签名：噻7 嘉签警日期：跏u ) 年q 月辉日，学位论文版权使用授权书本学位论文俸者兜全7 解裔关绦鬻、使甭学位论文豹蕊定，有权像
2、整并内嚣家专关郏门或规构送交论文的复印传和磁盘，克诲论文被裘翅翻媸阅a 本人授权可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行檎索，可以采用影印、缩印或扫描簿复制手段保存、汇编学位论文。( 保密的学僚论文在解密后遥雳本授权书)学位论文作者签名：囔7 衷 签字隰年沁月习日学毽论文铭老毕业螽去是：工传单位：邮编：导师镣名：移弘签字网期：鬈嘭馨乎月鼍髓电通讯地址；学位论文：V E G FmR N A 反义核酸对自血辅细胞药物敏感性的影晌英文缩略词S - O D Np h o s p h o r o t h i o a t eo l i g o d c o x y n u c l e o t i d
3、 e s 硫代寡貌氧核耱核瞽酸A S - O D Na n t i s e n s ep h o s p h o r o t h i o a t e 反义穗代寡怼氡核糖核营黢o l i g o d c o x y n u c l c o t i d e sSs c r a m b l e dp h o s p h o r o t h i o a t e随机硫代寡脱氧核糖核苷酸O l i g o d e o x y n u c l e o t i d e sA M La c u t em y e l o i dl e u k e m i a急毪潞系自盘瘸C M Lc h r o r f i cm
4、 y e l o g e n o u sl e u k e m i a慢性糙缨憨系自斑病F C Mf l o wc y t o m e t r y流式细胞术P C Rp o l y m e r a s ec h a i nr e a c t i o n聚合酶链式反应R T - P C Rr c v e r g et r a n s c r i p t i o np o l y m e r a s e逆转漾聚裔酶链式反威c h a i nr e a c t i o nP B Sp h o s p h a t eb u f f e rs o l u t i o n磷酸魅缓i 申波S D Ss o
5、d i u md o d e c y ls u l f a t e十二烷基硫酸钠B S Ab o v i n es o r 蛐a l b u m i n牛血清白鬣自P F Ap a r a f o r m a l d e h y d e多聚举醛T r i s - H C lT r i s ( h y d r o x y m e t h y l ) a m i n o m e t h a n e三羟串基氨萋甲烷楚羧h y d r o c h l o r i d eE D T Ae t h y l e n ed i a m i e t e t r a a c e t i ca c i d乙二胺四乙
6、酸D E P Cd i e t h y lp y r o e a r b o n a t e焦碳酸二己脂 D M S OD i m e t h y ls u l f o x i d e二擎鏊受溅P Ip r o p i d i u mi o d i d e碘化鬻踺E Be t h i d i u mb r o m i d e溴化己锭 M T TT h i a z o l y lb l u e噻睦簸 Hh o m o h a r r i n g t o n i n 褰三尖杉醣碱 D N Rd a u n o m b i c i n柔红霉素 A s 2 0 3a r e s n i ct r i
7、o x i d e兰氧化二砷 s p s Ss t a t i s t i c a lp a c k a g eo f s o c i a ls c i e n c e s柱会辩学凌诗软绺包兰堡堕塞! 摆婴竺墨坐墼墨堕壁塑鱼垒痘塑些藐塑墼燮丝盟堂堕堕V E G Fm R F t A 反义核酸 对白血病细胞药物敏感性的影响博士研究生费嘉导烽张漫研究曼糖要磊的；疆袋V E G F 反义棱羧对H L 6 0 、K 5 6 2 _ l 爨爨以及弧代匀瞧病缨嶷存涟、生长和药物敏艨性的影响：筛选出血错内皮生长因子( V E G F ) 的晦效反义核跤；揭示自分泌V E G F 在自血病中的作用方法# 用R
8、 N A s t r u c t u r e ( v e r s i o n3 7 ) 软件，选择总自由能( o v e r a l lA G 3 7 ) 相对低的茇义菝黢，获计7 条，彀度1 8 - 2 0 挟营酸，全蘸霞臻锦；蔽义菝羧燕选是在禽l 辨骆拳盘渣豹R P M I l 6 4 0 培养滚中，按2 5 弘粥。虹终浓度加药，锥翅子H L 6 0 、K 5 6 2 细胞，反义核酸作用机理以及对白臌病细胞药物敏感性研究是禚无血清或低浓度妞清状态下进行，采用l i p o f e c t i n ( G I B C O ，l m g m 1 ) 试弁f j 转袋反义核酸，脂质俸与反义核羧的
9、蔗量眈饼( | Ig Ug ) 凳2 ：1 ，反义核酸孀无斑清D M E M 滋簿，设囊空鑫瓣照纛蘧撬对照，转染鏊瓤抉食l 溉骆警巍涛豹D M E M培舞基培券6 4 h ，采用胎盼蓝掇染法观察存活细胞数，用M T T 法分别求出V E G F反义核酸和化疗药物的半数抑制浓度( I C 5 0 ) ，用E L I S A 法检测塔养液中V E G F蛋融水平，用R T - P C R 分析反义核酸对自呶痫细胞V E G Fm R N A 袭达的影响，用G i e m s a 繁色藕流式缎施佼梭测巍盘瘸维稔猫亡献况。一心缝暴：戆选出6 条反义孩酸对H L 6 0 、K 5 6 2 缨憝臻长、V
10、E G F 蛋匀釉V E G Fm 热A 袋达有明显抑制作用。妁空自对照组( A O ) 相比，A 7 组细胞生长抑制率达4 1 7 4 、培券液啼V E G F 蛋囱表远抑制攀达4 7 8 1 ，与髓机对照缀( S C R )褶院，最优序捌A S 7 组细胞生畿撺翩率达3 1 9 ，培养液中V E G F 蛋爵表达捧裁率这5 1 4 ，反义核酸游凌与O v e r a l l 锈7 蜜坊耀关( H L 6 0 ：r = - 0 8 4 2 ，P 1 7 ) ，岛低水平V E G F 患者( V E G F 慰蓍孛，羝水平表达V E G F 者擞存时间短，作者认为这可能与不同V E G F 同
11、源构体在不同类囊舔自斑瘸缬胞中表达摇度及其作用机镱不同有关。H a y a s h i b a r a 等猁瓷黠成天T 漭黯矮稳篷盘精( A T L ) 磷究审发现，在堍攒A T L 塞誊婚鏖浆V E G F 舞藤理发鞍蔻攫萋，V E G F 瘩乎黻枣黉漆器缕终器受累黪程度( 常见皮肤损害) 加蹩两丹撼。H a y 删b a r a 簿f 4 2 矬一步研究鹅示，A T L 煳胞分泌的V E G F 以自分泌途径作用于细胞表面F l t 。l 受体而发挥生物效成，给予乡 滚链V E G F 袋V E G F 抗体，对A T L 细胞舔盼瀚殖无影响，西诧认为V E G F 甜A T L 缀稳笼程
12、势爱效应，织藏天静滚V E G F 麓辔强愆乞缨藏系静戆纯豫，这说甥V E G F 渡过爨分泌途经上调A T L 缨旋系的趋纯性，套褪予A T L 缨褒嫒A 各耪1 4学位论文：V E G FmR N A 厦义核酸对白血病细胞药物敏感性的影响前言器富。F e r r a j o l iA 等【4 3 1 研究了V E G F 受体2 ( K D R ) 与C L L 预后的关系，研究者首先用W e s t e r n b l o t 检测耐K D R 存在予外周血C L L 细耱中，然后厢敖兔法( R I A )定鬟分撰2 1 6 髑C L L 患者磐餍纛缨憨K D R 蛋鑫承平，并耀3 l
13、铡匿豢拿体乡 周盘单令核缨瞧K D R 水平传对照，结累发现对照缎K D R 水乎的中像值是1 0 ，褥C L L 细胞K D R 水平是1 5 7 ，高于1 5 7 患者均有高水平淋巴绒胞计数、严重贫肌、高水平B2 - M 和进展期疾病，高水平K D R 艨者存活期为3 5 4 个月，底水平K D R患者存活麓为6 0 1 个胃。两者菇有显著差辩( P ( o 0 1 ) ，说礴V E G F 的受体K D R氇怒C L L 瓣一壤颈嚣撂标。7 。4V E G F 与淋巴瘤的预后S a l v e n 等f 4 4 1 用E L I S A 法对8 2 例非霍奇鑫淋巴瘤( N H L ) 治
14、疗前的血浆V E G F 水平进行了研究，所有患者均追踪观察5 年以上或鸯至死亡，结果发现V E G F 中位值为2 2 8 p g m l ，V E G F 水平高于中位谴的与下 西素裰美：W H O 分藕联螽较差者( p e r f o r m 撼a e e 嫩) ，鬣际馥嚣臻数( i n t e r n a t i o n a lp r o g n o s t i ci n d e xl 鞭) 较毫者，盘瀵乳酸聪氢黪农乎较嵩糟，以及组织学为大细胞者。V E G F 低乎中位数的患者5 年生存率为7 1 ，而高于中位数者5 年嫩存率为4 9 ，因此认为预后差的N H L 与其治疗前斑浆中高
15、水平V E G F密留稽关。S a l v e n 等湖又对2 0 0 例N H L 患者进彳亍研究发现，斑清V E G F 和b F G F承乎瀑辩拜离蠢生存麓短，多交譬模黧箍承，V E G F 襄b F G F 对I P I 秀撂标豹生存期均有独立影螭，m 漕V E G F 并 I Ib F G F 水平均在上理分位数( t h eb a g h e s tq u a r t i l e s )的患者死亡危险是其他患者的三倍，作者认为血清V E G F 和b F G F 水平同时升高是N H L 患者非常有价值的预后燹量。B e r t o l i n i 等阁通过对3 6 铡N H L
16、巍浆V E G F 磷究表凌，程取褥平长这2 1 个男完全缓簇豹癜铡孛，其V E O F 零平綦线曼薯低予疾病避震期豹癍铡，V E G F 水平基线低的患者无病生存攀显著提高。N i i t s uN 等f 4 7 l 研究发现，N H L 患者血清V E G F 和I L 6 水平显著增高，这擅高水平V E G F 和t L 一6 穗者无病生存率眈低水平患者显著降低，血清V E G F 和I L 6瘩平润嚣壤商懿患者跑擎独顼灌离豹患者预岳蓑。多变量分析表镌盘溥V E G F和I L - 6 水乎对N H L 患者总存活黠闯恧言都怒独立灼颓鹾因素，但敷演V E G F 靼I L - 6 水平同时增高更有预后价值。兰竺芝塞! ! ! 璺! 竺趔垒堡墨垫墼堂皇垒馥塑望塑塑墼壁丝盟璧照! 堕K u r a m t oK 簿t 4 8 J 揪yV E G F 棚关基因M C L I 与N H L 预后的关系，他们用R T - P C R 方法检测M C L I m R
