新版药典培养基介绍

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1、新版药典微生物检测培养基介绍新版药典微生物检测培养基介绍2015版中国药典微生物相关内容2015版中国药典微生物相关内容26个检查法：通则 1101 无菌检查法通则 1105 非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法通则 1106 非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查通则 1107 非无菌药品微生物限度标准通则 1121 抑菌效力检查法-适用范围通则 1421 灭菌法 （未修订）6个指导原则：通则9201 药品微生物检验替代方法验证指导原则（未修订）通则9202 非无菌药品微生物限度指导原则（修订）通则9203 药品微生物实验室质量管理指导原则（修订）通则9204 微生物鉴定指导原则（新增） 通

2、则9205 药品洁净实验室微生物监测和控制指导原则（新增） 通则9206 无菌检查用隔离系统验证指导原则（新增）新版药典微生物检测的特点新版药典微生物检测的特点采用更优良的培养基进行相应检验。采用更优良的培养基进行相应检验。方法适用性试验模拟样品污染微生物后进行方法试验性验证。计数方法的多样性。结果判定以变化范围进行规定，符合微生物计数规律。更新试验环境的要求。方法适用性试验增加供试品对照组微生物限度标准新版药典微生物检验方法的更新，基于2010年版中国药典。更新后与ICH协调 案方法即现行的USP、EP、JP接轨，同时兼顾了中国的国情。3新版药典微生物限度微生物计数法培养基新版药典微生物限度

3、微生物计数法培养基42010版中国药典2015版中国药典2010版中国药典2015版中国药典营养琼脂 营养肉汤 玫瑰红钠琼脂培养基胰酪大豆胨肉汤 胰酪大豆胨琼脂培养基 沙氏葡萄糖琼脂 沙氏葡萄糖肉汤 马铃薯葡萄糖琼脂 玫瑰红钠琼脂培养基新版药典微生物限度控制菌检查法培养基新版药典微生物限度控制菌检查法培养基5控制菌2010版中国药典2015版中国药典控制菌2010版中国药典2015版中国药典耐胆盐格兰阴性菌肠道菌增菌肉汤培养基 紫红胆盐葡萄糖琼脂大肠埃杆菌胆盐乳糖培养基 MUG培养基 曙红亚甲蓝琼脂或麦康凯琼脂麦康凯肉汤 麦康凯琼脂沙门菌营养肉汤 四硫磺酸钠绿培养基 胆盐硫乳琼脂或沙门、志贺氏

4、属琼脂 曙红亚甲蓝琼脂或麦康凯琼脂RV沙门菌增菌肉汤 木糖赖氨酸脱氧胆酸琼脂 三糖铁琼脂培养基铜绿假单胞菌胆盐乳糖培养基 溴化十六烷基三甲铵琼脂 绿脓菌素测定培养基溴化十六烷基三甲铵琼脂金黄色葡萄球菌亚碲酸盐肉汤培养基 卵黄氯化钠琼脂培养基或甘露醇盐琼脂甘露醇氯化钠琼脂梭菌梭菌增菌培养基 哥伦比亚琼脂梭菌增菌培养基 哥伦比亚琼脂白色念珠菌沙氏葡萄糖肉汤 沙氏葡萄糖琼脂 念珠菌显色培养基 吐温80玉米琼脂培养基沙氏葡萄糖肉汤 沙氏葡萄糖琼脂 念珠菌显色培养基新版药典无菌检查培养基新版药典无菌检查培养基62010版中国药典2015版中国药典2010版中国药典2015版中国药典硫乙醇酸盐流体培养基

5、改良马丁培养基 选择性培养基 营养肉汤培养基 营养琼脂培养基 改良马丁琼脂培养基硫乙醇酸盐流体培养基 胰酪大豆胨肉汤 选择性培养基 0.5%葡萄糖肉汤培养基 胰酪大豆胨琼脂培养基 沙氏葡萄糖液体培养基 沙氏葡萄糖琼脂培养基新版药典制药用水微生物限度培养基新版药典制药用水微生物限度培养基7制药用水2010版中国药典2015版中国药典制药用水2010版中国药典2015版中国药典纯化水营养琼脂 玫瑰红纳琼脂R2A培养基注射用水营养琼脂 玫瑰红纳琼脂R2A培养基培养基的质量控制培养基的质量控制8国际通用的培养基质控标准国际通用的培养基质控标准9ISO/TS 11133食品和动物饲料的微生物学培养基生产

6、和制备指南第1部分：实验室培养基制备质量保证通则（2000/2009）。第2部分：培养基性能检验的实用指南 （2003）。ISO 11133:2014 Microbiology of food, animal feed and water - Preparation, production, storage and performance testing of culture media国内现行的培养基指控标准国内现行的培养基指控标准10SN/T1538 培养基制备指南SN/T1538.1-2005：实验室培养基制备质量保证通则。SN/T 1538.2-2007：培养基性能测试实用指南。GB

7、4789.28-2013 食品微生物学检验 培养基和试剂的质量要求WS/T 232-2002 商业性微生物培养基质量检验规程培养基配制及注意事项培养基配制及注意事项11培养基配制的基本程序培养基配制的基本程序12检查与称量测定及矫正PH溶化(水化)无菌检验、性能检验分装灭菌密封性、日期、 说明、配方蒸馏水、加热 惰性容器、 500mLpH0.2 1 M NaOH or 1 M HCl 商品化的培养基不需调节pH121, 15 min.干粉培养基的保存干粉培养基的保存13遵循先进先出的原则保存开封的记录超过保质期的培养基需丢弃开盖后密封，低于25保存储存时避免吸水，氧化，污染称量与溶解称量与溶解

8、14称量培养基时，应戴上口罩，防止在称量过程中扬起的粉末对操作人员的健康造成影响。严格按照说明书称量，避免在湿度过高的环境下操作，防止培养基受潮；加水溶解后，应适当加热并搅拌，加快培养基的溶解。培养基配制用水培养基配制用水15采用蒸馏水或相同质量的水，以排除测试条件下抑制或影响微生物生长的物质；如果蒸馏水是用氯消毒的水制备的，蒸馏前应先对氯进行中和离子过滤器生产的去离子水，微生物含量过高，这种水在过滤除菌后仍可能含有细菌的生长抑制物质.pH 5.5-7.5，否则可能造成培养基颜色异常、产生沉淀或凝胶强度下降。储存于惰性容器（如：玻璃、聚乙烯材质容器）中，容器应清洗干净，防止抑制剂残留。培养基的

9、分装培养基的分装16储存于惰性容器（如：玻璃、聚乙烯材质容器）中；将培养的培养基分装至容器中，培养基的体积不超过所用容器的3/5；培养基灭菌时，总体积应小于1000ml；培养基pH值的测定培养基pH值的测定17灭菌前后测定培养基的pH值；pH 0.2；1 mol/L的 NaOH 或 Hcl来调整pH值；商品化的培养基一般不需要调整pH值，但需测定pH是否在规定范围内；培养基灭菌培养基灭菌18高压灭菌煮沸灭菌过滤除菌（采用0.2m的滤膜）注：用高压灭菌的方式对培养基进行灭菌时，应对培养基的灭菌过程进行监控。物理监控和生物监控在制备含有有毒物质的添加成分（尤其是抗生素）时应小心操作（必要时在通风橱

10、中操作），避免因粉末的扩散而造成实验人员的过敏或其他不良反应；抗生素工作溶液分装后冷冻贮存，但解冻后的贮存溶液不能再次冷冻，因为会对抗生素的活性产生影响；使用的添加剂应在有效期内抗生素工作溶液应现配先用热不稳定添加物质，应冷却至472 再添加培养基添加成分的制备和添加培养基添加成分的制备和添加19冷却至472 倒入平皿制备好平板应放入 4 - 12C (适宜温度 12C)冰箱中的密封袋中避光保藏，最多放置一周；对预置好的用于冷藏的培养基为了防止冷凝水的产生，应等冷却后再储藏。但无需做干燥处理。对于采用表面接种形式培养的固体培养基，在使用前应对表面进行干燥，将平皿放置在有对流的无菌净化台中，直到

11、培养基表面的水滴消失为止。但应避免过度干燥。平板制备平板制备20经过高压灭菌的培养基应尽量减少重加热时间，避免过度加热。培养基融化后放入472的恒温水浴锅中保温，直至使用，放置时间一般不应超过4h。未用完的培养基不能重新凝固留待下次使用。敏感的培养基尤其应该注意，融化后时间应尽量缩短；培养基应该在避光、干燥的环境中保存，必要时建议在4 - 12C (适宜温度 12C)避光保存，在没有说明的前提下，建议平板保存不超过1周;平板 出现脱水, 裂缝, 脱色 或微生物污染现象时，应丢弃;灭菌后培养基的保存灭菌后培养基的保存21需氧培养时，每叠建议放置六块平板，平板间要留有空隙以保证空气流通，使培养物的

12、温度尽快与培养箱温度达到一致。液体培养基温度达到一致取决于很多因素，如体积、内容物量、容器类型、培养箱类型等，如有特殊要求应先将液体培养基预热至所需温度再接种。厌氧培养时，需要使用厌氧发生器和厌氧指示剂。培养培养22培养基污染控制从每批制备好的培养基中选取部分样品进行污染测试。培养基促生长实验使用质控菌株检测培养基的生长能力，抑制能力和特异性。测试菌株 菌落计数 具有典型反应的阳性的菌株； 微弱生长的阳性菌株（对培养基中选择剂敏感性强的菌株） 非特异性菌株。（如：产生不同发酵反应和荧光反应的菌株） 阴性菌株。培养基的质量控制培养基的质量控制23培养基适用性检查测试指标培养基适用性检查测试指标2

13、4控制菌检查 培养基 特性 试验菌株 控制菌检查 培养基 特性 试验菌株 耐胆盐革兰阴性菌 肠道菌增菌肉汤紫红胆盐葡萄糖琼脂促生长能力 抑制能力 促生长能力+指示特性大肠埃希菌/铜绿假单胞菌 金黄色葡萄菌 大肠埃希菌/铜绿假单胞菌大肠埃希菌麦康凯肉汤麦康凯琼脂促生长能力 抑制能力 促生长能力+指示特性大肠埃希菌 金黄色葡萄菌 大肠埃希菌沙门菌RV沙门菌增菌肉汤木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂 三糖铁琼脂培养基促生长能力 抑制能力 促生长能力+指示特性 指示能力乙型副伤寒沙门菌 金黄色葡萄球菌 乙型副伤寒沙门菌 乙型副伤寒沙门菌铜绿假单胞菌溴化十六烷基三甲铵琼脂促生长能力 抑制能力铜绿假单胞菌 大肠埃希

14、菌金黄色葡萄球菌甘露醇氯化钠琼脂促生长能力+指示特性 抑制能力金黄色葡萄球菌 大肠埃希菌梭菌梭菌增菌培养基 哥伦比亚琼脂促生长能力 促生长能力生孢梭菌 生孢梭菌白色念珠菌沙氏葡萄糖肉汤 沙氏葡萄糖琼脂 念珠菌显色培养基促生长能力 促生长能力+指示特性 促生长能力+指示能力 抑制能力白色念珠菌 白色念珠菌 白色念珠菌 大肠埃希菌商品化的培养基需要求厂家提供相应的检测报告（COA）。可以不做污染测试和促生长实验，但必须做方法适用性试验。培养基的质量控制培养基的质量控制25默克密理博培养基产品默克密理博培养基产品26培养基系列培养基系列27颗粒化干粉培养基颗粒化干粉培养基300多种应用于制药食品微

15、生物检测培养基，颗粒状保 证安全预制培养基预制培养基90mm,75mm，55mm培养皿100ml,200ml瓶装测菌片辅助工具辅助工具生物指示剂鉴定试剂盒厌氧发生器默克德国培养基工厂默克德国培养基工厂28默克培养基工厂位于德国Darmstadt ，1892建厂，7500员工。可靠的质量保证可靠的质量保证29Raw materialInspected and QA releasedInspected and QA releasedManufacturingQC testsSterilizationQA testsBatch recordProduct released by QAComponen

16、ttraceabilityMfg parametersand in-process tests recordTest resultsrecordSterilizationparameters recordTest resultsrecordQA reviewComponenttraceabilityMfg parametersand in-process tests recordTest resultsrecordSterilizationparameters recordTest resultsrecordQA review粉末状培养基问题粉末状培养基问题30粉末培养基 存在问题粉尘污染结块溶解性不好分层粉尘污染结块溶解性不好分层默克德国培养基工厂默克德国培养基工厂31吐温、卵磷脂、组氨酸 等成分易吸潮成分导致培养基结块。颗粒化培养基的优势颗粒化培养基的优势32溶解快速均一无结块易称量成分均一重复性好5年保质期