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1、目的目的规范紫外光谱鉴别、分析手段，保证被测物质鉴别、测定、分析的准确性。范范围围适用于药品的定性、定量分析。责责任任质量部 QC 人员。程序程序1 依据依据中国药典 2010 年版二部附录A23 页和中国药品检验标准操作规范 2010 年版 54 页。2仪仪器的校正和器的校正和检检定定 2.1 波波长长 由于环境因素对机械部分的影响，仪器的波长经常会略有变动，因此除应定期对所用的仪器进行全面校正检定外，还应于测定前校正测定波长。常用汞灯中的较强谱线237.83nm、253.65nm、275.28nm、296.73nm、313.16nm、334.15nm、365.02nm、404.66nm、4
2、35.83nm、546.07nm 与 576.96nm，或用仪器中氘灯的 486.02nm 与 656.10nm 谱线进行校正，钬玻璃在波长279.4nm、287.5nm、333.7nm、360.9nm、418.5nm、460.0nm、484.5nm、536.2nm 与637.5nm 处有尖锐吸收峰，也可作波长校正用，但因来源不同或随着时间的推移会有微小的差别，使用时应注意。2.2 吸收度的准确度 可用重铬酸钾的硫酸溶液检定。取在 120干燥至恒重的基准重铬酸钾约 60mg，精密称定，用 0.005mol/L 硫酸溶液溶解并稀释至 1000ml，在规定的波长处测定并计算其吸收系数，并与规定的吸
3、收系数比较,应符合表中的规定。2.3 杂杂散光的散光的检查检查 可按下表的试剂和浓度，配制成水溶液，置 1cm 石英吸收池中，在规定的波长处测定透光率，应符合表中的规定。试剂浓度 %(g/ml)测定用波长 nm透光率 %碘化钠 亚硝酸钠1.00 5.00220 3400.8 0.83 对对溶溶剂剂的要求的要求 含有杂原子的有机溶剂，通常均具有很强的末端吸收。因此，当作溶剂使用时，它们的使用范围均不能小于截止使用波长。例如甲醇、乙醇的截止使用波长为 205 nm。另外，当溶液不纯时，也可能增加干扰吸收。因此，在测定供试品前，应先检查所用的溶剂在供试品所用的波长附近是否符合要求，即将溶剂置 1cm
4、 石英吸收池中，以空气为空白（即空白光路中不置任何物质）测定其吸光度。溶剂和吸收池的吸光度，在 220240nm 范围内不得超过 0.40，在 241250nm 范围内不得超过 0.20，在251300nm 范围内不得超过 0.10，在 300nm 以上时不得超过 0.05。 测测定法定法 测定时，除另有规定外，应以配制供试品溶液的同批溶剂为空白对照，采用1cm 的石英吸收池，在规定的吸收峰波长nm 以内测试几个点的吸光度，或由仪器在规定波长附近自动扫描测定，以核对供试品的吸收峰波长位置是否正确，除另有规定外，吸收峰波长应在该品种项下规定的波长nm 以内，并以吸收度最大的波长作为测定波长。一般
5、供试品溶液的吸光度读数，以在 0.3-0.7 之间为宜。仪器的狭缝波带宽度宜小于供试品吸收带的半高宽度的十分之一，否则测得的吸光度会偏低；狭缝宽度的选择，应以减小狭缝宽度时供试品的吸光度不再增大为准。由于吸收池和溶剂本身可能有空白吸收，因此测定供试品的吸光度后应减去空白读数，或由仪器自动扣除空白读数后再计算含量。当溶液的 pH 值对测定结果有影响时，应将供试品溶液和对照品溶液的 pH 值调成一致。4.1 鉴别鉴别和和检查检查 分别按各品种项下规定的方法进行。4.2 含量含量测测定定 一般有以下几种方法。4.2.1 对对照品比照品比较较法法 按各品种项下的方法，分别配制供试品溶液和对照品溶液，对
6、照品溶液中所含被测成分的量应为供试品溶液中被测成分规定量的 100%10%，所用溶剂也应完全一致，在规定的波长处测定供试品溶液和对照品溶液的吸光度后，按下式计算供试品中被测溶液的浓度：CX = （AX/AR）CR式中 CX为供试品溶液的浓度；AX为供试品溶液的吸光度；CR为对照品溶液的浓度；AR为对照品溶液的吸光度。4.2.2 吸收系数法吸收系数法 按各品种项下方法配制供试品溶液，在规定的波长处测定其吸光度,再以该品种在规定条件下的吸收系数计算含量。用本法测定时，吸收系数通常应大于100，并注意仪器的校正和检定。4.2.3 计计算分光光度法算分光光度法 计算分光光度法有多种，使用时均应按各品种
7、项下规定的方法进行。当吸光度处在吸收曲线的陡然上升或下降的部位测定时，波长的微小变化可能对测定结果造成显著影响，故对照品和供试品测试条件应尽可能一致。计算分光光度法一般不宜用作含量测定。4.2.4 比色法比色法 供试品本身在紫外-可见区没有强吸收，或在紫外区虽有吸收但为了避免干扰或提高灵敏度，可加入适当的显色剂显色后测定，这种方法为比色法。用比色法测定时，由于显色时影响显色深浅的因素较多，应取供试品与对照品或标准品同时操作。除另有规定外，比色法所用的空白系指同体积的溶剂代替对照品或供试品溶液，然后依次加入等量的相应试剂，并用同样方法处理。在规定的波长处测定对照品和供试品溶液的吸光度后，按上述 4.2.1 法计算供试品浓度。当吸光度和浓度关系不呈良好线性时，应取数份梯度量的对照品溶液，用溶剂补充至同一体积，显色后测定各份溶液的吸光度，然后以吸光度与相应的浓度绘制标准曲线，再根据供试品的吸光度在标准曲线上查得其相应的浓度，并求出其含量。
