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1、国家火炬计划产业化项目国家火炬计划产业化项目 可行性研究报告可行性研究报告基于新工艺技术的猕猴桃素提取产业化项目基于新工艺技术的猕猴桃素提取产业化项目安徽安徽*药业有限公司药业有限公司二二 00 九年十月九年十月一、概述一、概述安徽*药业有限公司创立于 2000 年，产品主要以中药饮片提取为主，企业在 2006 年进行技术转型增大科技附加值，集中药材种植、中药饮片、中药提取、植提产品开发、中药食品研制生产销售于一体的现代化中药企业，企业多次受到省、市领导和有关部门的表彰。2006年 5 月 28 日，董事长*被国务院授予第七届“创业之星”荣誉称号，受到国家领导人的亲切接见。公司生产基地位于亳州
2、市谯城区五马工业园，新厂总投资 3000 万，占地面积 50 亩，工程总建筑面积 20000 平方米，建设高标准的 GMP厂房 13000 平方米，已于 2007 年 2 月竣工并投入生产运营。公司坚持“打响华佗牌，做好药文章”观念，为促进科技成果产业化，计划年产中药饮片 3000 吨，年提取中药材(30%)2000 吨，芍药甙 1000 吨。该项目的实施，将加速亳州中药产业化建设，提高亳州中药产业化层次，促进全省中药现代化建设步伐，使公司的中药产业由原来简单的进行料初加工，发展为现代化的制药企业，加速科技成果产业化的进程，延伸了中药产业链条。本项目从中华猕猴桃根中提取分离有效部位“猕猴桃素“
3、，对其进行了初步的抑制肺癌的实验，取得了很好的疗效。结果显示“猕猴桃素“在体外对人肺腺癌 A549 细胞有明显的抑制作用，并呈现出时间和剂量依赖性，随着药物浓度的加大，抑制作用逐渐增强，同样浓度的药物作用时间越长，抑制效果越明显。在药物浓度为 15ugm1 时即呈现出了抑制作用，药物浓度为 250ugm1 时抑制作用最明显。猕猴桃素对 C57BL6 小鼠 Lewis 肺癌抗肿瘤作用的研究，实验组小鼠移植瘤生长缓慢，治疗结束时低、高剂量组抑瘤率分别为 27.78和60.0。表明猕猴桃素可以抑制 Lewis 肺癌在鼠体内的生长，可以减轻小鼠的瘤重，在体内同样有明显的抗肺癌作用，且高剂量组治疗效果明
4、显优于低剂量组，与体外试验一致。为此我们将猕猴桃素有效部位的制备工艺及新药开发的剂型申报中国专利，授权号：ZL200610027326.9。本项目产品根据市场需求情况定价为 400 万元/吨。项目建成达产后，可年产 15 吨，按照 400 万元/吨的价格进行测算，其价格具有较强的竞争优势，是国内同等质量价格水平的 60，进口同类产品价格的 30。因此，与进口产品相比，其竞争优势更为明显。经计算，正常年销售收入为 6000 万元。二、技术可行性分析二、技术可行性分析（一）（一）项项目的技目的技术术路路线线1.主要技主要技术术及工及工艺艺的合理性和成熟性分析的合理性和成熟性分析1.1 猕猴桃素提取
5、工艺技术参数的进一步优化猕猴桃素提取工艺技术参数的进一步优化采用优化设计方案（正交设计实验）对提取工艺技术参数优化，确定最佳的提取工艺。在预试验基础上，选择提取用水量、煎煮时间、煎煮次数三个因素，每个因素选择三个水平，进行正交试验表试验。以猕猴桃素含量为评价指标，筛选最佳工艺。1.2 猕猴桃素大孔树脂色谱法富集工艺优化猕猴桃素大孔树脂色谱法富集工艺优化1.2.1 树脂的预处理将树脂湿法装柱，用 95%乙醇洗至流出液与水 1:1 混合时不呈白色混浊为止，再用蒸馏水反复清洗至无醇味，用蒸馏水浸泡待用。1.2.2 上样液的制备称取猕猴桃素粉末，加蒸馏水溶解，冷藏 24h 后高速离心，取上清液作为上样
6、液。1.2.3 树脂型号的筛选（1）静态吸附将处理好的树脂（D101，D301，AB-8，NKA-9 等）过滤，抽干，各取 2g，置 100ml 具塞锥形瓶中，精密吸取上样液 30mL，盖紧瓶塞，每 10min 振摇 1 次，持续 3h，静置 24h，过滤，取滤液测定总猕猴桃素的含量，按下式计算比吸附量：比吸附量（上样液浓度吸附后溶液浓度）溶液体积/干树脂质量。（2）静态解吸将静态吸附的树脂过滤抽干，加 30ml70%乙醇解吸，盖紧瓶塞，每 10min 振摇 1 次，持续 3h，静置 24h，过滤，取滤液测定总猕猴桃素的含量，按下式计算解吸率：解吸率解吸液中含量/（上样液中含量-吸附后溶液中含
7、量）100%。最终选用猕猴桃素纯化用树脂。1.2.4 动态吸附、洗脱参数的考察（1）泄露曲线的考察取处理好的树脂 20g，湿法装柱(2cm30cm)，过量的上样液以1BV/h 的流速吸附，收集流出液，每 10mL 为一个流份，测定猕猴桃素含量，绘制泄漏曲线，计算树脂吸附容量。树脂吸附量=泄漏点上样体积（mL）样品浓度（mg/mL）（2）洗脱曲线的考察精密吸取上样液上树脂柱吸附，用水、30%、50%、70%、90%乙醇各 4BV 梯度洗脱，每 1BV 为一个流份，共收集 20 份,各流份 TLC鉴别并测定猕猴桃素含量。以样品编号(X)和猕猴桃素浓度(Y)为坐标绘制洗脱曲线，确定洗脱剂浓度。（3）
8、上样液浓度的考察精密吸取上样液，分别用蒸馏水稀释 0、2、4、6、8 倍上树脂柱吸附，洗脱后测定猕猴桃素含量。计算转移率，转移率(%)=洗脱液中猕猴桃素量(mg)/上样液总皂苷量(mg)100%，确定上样液浓度。（4）上样吸附速率的考察精密吸取上样液分别以 1BV/h、2BV/h、3BV/h、4BV/h、5BV/h的流速进行吸附，收集流出液，测定流出液中猕猴桃素含量。计算吸附率，吸附率(%)=树脂吸附总皂苷量(mg)/上样液猕猴桃素量(mg)100%，确定上样吸附速率。（5）洗脱剂用量的考察精密吸取上样液上树脂柱吸附，用洗脱剂洗脱，按树脂床体积收集洗脱液。测定猕猴桃素含量，确定洗脱剂用量。（6
9、）洗脱速率的考察精密吸取上样液上树脂柱吸附，分别用洗脱剂1BV/h、2BV/h、3BV/h、4BV/h、5BV/h 的速率洗脱。测定洗脱液中猕猴桃素含量，确定洗脱速率。1.2.5 验证试验1.2.6 脂使用次数的考察在同一根树脂柱上重复操作若干次，计算吸附量。当吸附量下降30%以上时，树脂需要再生。1.2.7 树脂的再生1.3 猕猴桃素聚酰胺色谱法纯化工艺研究猕猴桃素聚酰胺色谱法纯化工艺研究采用聚酰胺色谱法对猕猴桃素纯化工艺研究，分离若干活性单体化合物（至少一个单体化合物） ，对其进行分子结构鉴定，并进行理化性质研究，作为质量标准的指标性成份。1.4 猕猴桃素含量测定方法的建立猕猴桃素含量测定
10、方法的建立建立猕猴桃素 HPLC 含量测定方法，用于工艺技术参数的优化、质量标准的制定和药物动力学评价。本项实验包括：1.4.1 对照品溶液的制备1.4.2 样品溶液的制备1.4.3 测定波长的确定1.4.4 线性范围考察及标准曲线的绘制1.4.5 方法学验证：精密度、稳定性、重复性、加样回收率试验1.4.6 样品的含量测定。1.5 制剂学和药物动力学研究制剂学和药物动力学研究1.5.1 以猕猴桃素为活性成分，进行口服制剂（初步选定分散片剂）制剂学研究（1）猕猴桃素分散片溶出度测定方法的建立A.HPLC 的方法学研究色谱条件和系统适应性试验、标准曲线的制备、回收率试验、精密度试验。B.溶出度测
11、定方法溶出介质的考察、不同转速的影响、溶出度的测定。（2）猕猴桃素分散片崩解时间测定试验根据中华人民共和国 2005 年版附录关于“分散片”项下说明崩解时间不超过 3min。取分散片，置于崩解仪吊篮的玻璃管中，分散溶媒为 20 士 0.5。当分散颗粒全部通过玻璃管底部筛网为止，记录崩解时间。（3）猕猴桃素分散片的处方筛选A.制剂处方单因素筛选考察可能影响分散片质量的各种因素，包括填充剂的种类，崩解剂的种类，溶胀辅料的种类等，分别进行了单因素的考察。B.填充剂的选择采用乳糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、糊精等水溶性填充剂以及淀粉、微晶纤维素、硫酸钙、磷酸氢钙等水不溶性填充剂，进行抗张强度的比较：压片机
12、将主药分别与过 100 目筛的乳糖、硫酸钙、磷酸氢钙、山梨醇和甘露醇 1：1 混合后，采用湿法制粒压片，片重 300mg，压缩压力 5kg，游标卡尺测量直径和厚度，用片剂四用测定仪测量径向破坏力，根据公式 T=2F/DL，计算抗张强度 T(MPa)，F 为径向破坏力(Kgf)，D为片子直径(m)，L 为片剂高度(m)结果见表。根据抗张强度大小评价辅料压缩成形性。C.崩解剂的选择溶胀度实验30将各常用崩解剂干燥至恒重，分别取放置于具塞刻度试管中，轻敲使高度不变，测定粉末的高度 h1。加水 5ml 振摇间隔 10min 重复振摇一次，静置 48h，测定膨胀后粉末高度 h2，计算粉末的溶胀体积比（s
13、wellingvolumeratio）h2/h1。吸水量实验培养皿（直径 6.5cm）中铺一层脱脂棉，然后用足量的水将其润湿，并在整个实验过程中始终保持其润湿状态，脱脂棉上放一金属丝编织成的小筐，小筐内放置一滤纸，待纸被充分润湿后称重。片剂放入小筐中央，小筐放在脱脂棉上，经 1、3、5、10、12min 后取出小筐称重，即可得片剂在一定时间间隔后的吸水量。其中 3 分钟内的吸水能可能对分散片的处方设计更具实用价值。崩解剂之间的配伍单一崩解剂效果不好时，用两种以上的崩解剂配伍，效果会优于单一的崩解剂。本研究选择上述实验中表现出较好崩解性能的崩解剂联用，考察崩解时间。D.制剂处方的优化（正交试验）
14、以崩解时间和 10min 片剂的溶出度为考察指标，调节处方中崩解剂比例以及用量、填充剂和溶胀辅料的比例，采用正交设计实验确定最后处方。E.润滑剂的选择将整粒后的颗粒分别加入不同量的润滑剂，测定的休止角和压片所得的片剂的崩解时限。（4）最佳处方A.制备工艺的优化湿法制粒压片和全粉末直接压片的选择这两种压片工艺是片剂制备工艺中常用的两种方法。本实验对这两种压片方法进行了初步的比较，分别制备右旋布洛芬分散片，比较其溶出度。压力的影响分别在不同压力条件下压片，测定制得片剂的崩解时间并观察片剂的性状，以考察压片力对片剂溶出的影响。崩解剂加入方法的考察崩解剂加入方法的不同其崩解时间会有所不同，而且外观也有
15、变化。外加崩解剂使分散片崩解为粗颗粒，内加则使颗粒崩解均匀，形成均一混悬液。考察内加、外加、内外加法对片剂崩解时间和外观的影响。原料粒度对分散片溶出的影响：以原料 100 目和超微细粉(粒经大约 5um)按优化处方压片，取片剂进行溶出度的测定。（5）猕猴桃素分散片的质量控制和初步稳定性的考察A.质量控制猕猴桃素分散片含量测定方法的建立色谱条件和系统适应性试验、标准曲线的制备、精密度试验、回收率试验、含量测定。B.崩解时限和分散均匀度的考察取三批本品，照崩解时限检查法，在(211)的水中依法进行试验,崩解时间均小于 3min,符合分散片崩解时限的规定。取本品 2 片，置150mL 水中振摇，应完
16、全均匀分散并通过 2 号筛。 （中国药典附录）C.溶出度检查：分别对三批样品进行溶出度测定。D.片重差异的测定E.片剂硬度的测定F.片剂含量均匀度的测定：按照中国药典2005 年版二部附录IA 的要求，取 20 片，精密称定总重量，求得平均片重后，再精密称定每片重量，每片与平均比较，超出平均片重重量差异限度不得超过2 片。（6）初步稳定性研究A.影响因素试验：光稳定性试验、热稳定性试验、湿稳定性试验。B.加速实验供试品三批，按市售包装，在稳定 402、相对湿度 755的条件下放置 6 个月，所用设备应能控制稳定 2、相对湿度 5，并能对真实温度与湿度进行监测，在试验期间第 1、2、3、6 个月末分别取样一次，按稳定性重点考察项目检测。C.长期实验供试品三批，市售包装，在温度 252、相对湿度 6010的条件下放置 12 个月。每 3 个月取样一次，分别于 0、3、6、9、12 个月取样，按稳定性重点考察项目进行检测。1.5.2 猕猴桃素分散片的在家兔体内药代动力学研究（1）血样采集健康家兔 8 只，体重
