血液分析仪应用

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1、血液分析仪应用血液分析仪应用第四章 血液分析仪及其临床应用?第一节 概 述20 世纪 50 年代初，电子血细胞计数仪开始应用于临床，随着电子技术、流式细胞术、激光技术、单克隆抗体、计算机等高科技在血细胞分析仪上的应用，血液分析仪的研制水平不断提高，检测原理不断完善，测量参数不断增多，现代血液分析仪（HA）具有下列特点： 1.自动化程度越来越高。 2.通过条形码识别、自动运输装置、自动混匀、自动进样、自动检测、自动报告、自动清洗、自动涂片，形成了模块式自动化血液分析流水线。 3.提供参数越来越多： 能提供 1840 多个参数，如有核红细胞数、淋巴细胞亚群数等。 4.精度越来越高： 采用定容计量、

2、定时监控、三次平均法计数、延时计数等使精密度大大提高。 5.速度越来越快：每小时可分析 50150 份样本。 6.强大的质控功能：有自动记录质控结果、可供选择的质控规则、自动绘制质控图、失控报警、患者结果浮动均值和患者结果 Delta 核查和报警等功能。 7.智能化程度越来越高：提供简明直观的直方图或散点图、提示异常结果报警信号、备有专家诊断系统和远程会诊等功能。第二节 检测原理本节要点： （1）电阻抗法血液分析仪检测原理 （2）光散射法血液分析仪检测原理 （一）电阻抗法血液分析仪检测原理 1.电阻抗法血细胞计数原理（库尔特原理） 将等渗电解质溶液稀释的细胞悬液置入不导电的容器中，将小孔管（也

3、称传感器）插进细胞悬液中。小孔管内充满电解质溶液，并有一个内电极，小孔管的外侧细胞悬液中有一个外电极。当接通电源后，位于小孔管两侧电极产生稳定电流，稀释细胞悬液从小孔管外侧通过小孔管壁上宝石小孔（直径中性粒细胞单核细胞，淋巴细胞和嗜碱性粒细胞无过氧化物酶活性，此为血液分析仪白细胞分类的基础。当激光束照射到细胞时，产生不同强度的散射光，以吸光率（酶反应强度）为 X 轴，光散射（细胞大小）为 Y 轴，每个细胞根据这两个信号的不同，定位在散点图上。各类白细胞在散点图上的位置 2）嗜碱性粒细胞分叶核检测通道 血液与酸性表面活性剂反应，不仅红细胞溶解，而且除嗜碱性粒细胞外，其他所有白细胞膜均被破坏.胞质

4、溢出，仅剩裸核。当激光束照射到细胞时，产生不同强度的散射光，形成二维细胞图，其中，嗜碱性粒细胞呈高狭角散射，定位于细胞图上部，裸核细胞则位于细胞图下部。嗜碱性粒细胞和分叶核粒细胞在散点图上位置 （2）容量、电导、光散射（VCS）法 1）利用电阻抗法原理测量细胞体积（V） 。 2）利用电导（C）技术测量细胞内部结构。原理是利用高频电磁探针测量细胞内部结构，根据细胞核和细胞质比例、细胞内颗粒大小和密度来识别体积相同、但性质不同的两类细胞群体，如小淋巴细胞和嗜碱性粒细胞。 3）利用光散射（S）技术测量细胞形态和核结构。原理是利用激光照射进入计数区的每个细胞，根据散射光角度（1070）的不同，提供每个

5、细胞形态、核结构信息来鉴别中性粒细胞、嗜碱性粒细胞和嗜酸性粒细胞。五分类血球分析仪原理示意图 V（volume）体积测量采用电阻抗原理；C（conductivity）电导性是根据细胞壁能产生高频电流的性能，采用高频电磁探针测量细胞内部结构；S（scatter）光散射是来自激光的单色光束对细胞进行扫描，提供细胞结构和形态的变化。 根据 VCS 原理，显示3 种细胞散点图：DF1（体积和散射光） 、DF2（体积和电导） 、DF3（体积和电导，但只显示嗜碱性粒细胞群） 。DF1 图通过体积和散射光显示不同白细胞位置 DF2 图通过体积和电导显示单核细胞、粒细胞和淋巴细胞位置 DF3 通过体积和电导显

6、示嗜碱性粒细胞群、单核细胞和淋巴细胞位置 （3）电阻抗与射频法 1）嗜酸性粒细胞检测系统：血液与嗜酸性粒细胞特异性溶血剂混合，使除嗜酸性粒细胞外的所有细胞溶解或萎缩，采用电阻抗法计数嗜酸性粒细胞。 2）嗜碱性粒细胞检测系统:血液与嗜碱性粒细胞特异性溶血剂混合，使除嗜碱性粒细胞外的所有细胞溶解或萎缩，采用电阻抗法计数嗜碱性粒细胞。 3）白细胞分类检测系统：采用电阻抗和射频（能透入细胞内，测量核大小、颗粒多少）法，以直流电（DC）为横坐标，以射频（RF）为纵坐标，根据这两个信号将细胞定位于二维细胞散射图上，因淋巴细胞、单核细胞、粒细胞的大小、胞质量、胞质内颗粒大小和密度、细胞核形态和密度各不相同，

7、从而进行分类。 4）幼稚细胞检测系统：根据幼稚细胞膜上脂质较成熟细胞少的特性进行检测。在细胞悬液中加入硫化氨基酸，幼稚细胞的结合量多于较成熟的细胞，而且，幼稚细胞对溶血剂有抵抗作用，当加入溶血剂后，成熟细胞被溶解，幼稚细胞不被破坏，从而提供幼稚细胞信息（IMI） 。显示幼稚细胞的位置 （4）多角度偏振光散射（MAPSS）法 当激光束照射到单个细胞时，从 4 个角度测定散射光密度：0：前角光散射（13） ，可测定细胞大小；10：狭角光散射（711） ，可测定细胞内部结构特征；90：垂直光散射（70110） ，可测定细胞核分叶情况；-90：消偏振光散射（70110） ，可将嗜酸性粒细胞和其他细胞区

8、分出来。 多角度偏振光散射（MAPSS）法检测原理 2.光散射法红细胞检测原理 以低角度前向光散射和高角度光散射同时测量 1 个红细胞。低角度（23）光散射能测量单个红细胞体积，高角度（515）光散射能测量单个红细胞血红蛋白浓度，得出 MCV、MCH、MCHC 值，并显示红细胞散射图、单个红细胞体积和血红蛋白含量直方图。 3.光散射法血小板检测原理 单个球形化血小板通过激光束照射后，高角度（515）光散射能测量细胞折射指数（RI） ，低角度（23）光散射能测量细胞大小。在二维散射图上得出血小板数量和相关参数。 4.网织红细胞计数原理 （1）利用新亚甲蓝使网织红细胞 RNA 着色，加入使红细胞内

9、 Hb 溢出的试剂，使其成为“影细胞” ，然后采用 VCS 原理，得出网织红细胞数和相关参数。 （2）利用碱性槐黄 O 等荧光染料与网织红细胞内的 RNA 结合，以波长 488nm 氩氖激光束为激光源照射网织红细胞，得到前向散射光强度（细胞体积大小）和荧光强度（胞质内 RNA 多少） ，形成二维显示散点图，得出网织红细胞数和相关参数。显示网织红细胞（不同荧光强度） （左）显示红细胞、网织红细胞和血小板（右） 习题 14 在电阻抗型血液分析仪中，下列那项与脉冲高低成正比 A.细胞的移动速度 B.细胞的数量 C.细胞的大小 D.细胞的密度 E.细胞是否有核答疑编号 500725040101正确答案

10、C第三节 检测参数 本节要点： （1）检测参数 （2）检测结果及表达形式 （一）检测参数 常见血液分析仪检测报告的术语和英文缩写词见表 l-4-2。 表 1-4-2 常见血液分析仪检测报告技术语和英文缩写词中文名称 英文缩写 中文名称 英文缩写血红蛋白 Hb 中性粒细胞计数 NEUT血细胞比容HCT/PCV中性粒细胞百分率NEUT%红细胞计数RBC淋巴细胞计数LYMPH红细胞平均体积 MCV淋巴细胞百分率 LYMPH%红细胞平均血红蛋白量 MCH单核细胞计数MONO（二）检测结果及表达形式 常用三分群血液分析仪参考值见表 1-4-3。 第四节 血细胞直方图本节考点： （1）白细胞直方图 （2）

11、红细胞直方图 （3）血小板直方图左图是细胞形成的不同大小的脉冲波，右图是根据脉冲波整理出的细胞直方图 （一）白细胞直方图 血液分析仪在计数细胞数量的同时，还提供细胞体积分布图形，横坐标为细胞体积大小，纵坐标为不同体积细胞的相对频率，称为细胞直方图。白细胞直方图代表意义 正常白细胞直方图，在 35450fl范围内将白细胞分为 3 群，左侧峰又高又陡为淋巴细胞峰，最右侧峰又低又宽为中性粒细胞峰，左右两峰间的谷区较平坦为单个核细胞峰。异常直方图意义见表 1-4-4。 表 15 白细胞体积三分类细胞类型 体积范围 包含的细胞成分小细胞群 5-90fl淋巴细胞单个核细胞群90-160fl 单核细胞、嗜酸

12、性粒细胞，嗜碱性粒细胞、核左移、 各阶段幼稚或原始细胞大细胞群 160fl 以上中性粒细胞急性淋巴细胞白血病时的白细胞直方图特点 急性淋巴细胞白血病时的白细胞直方图特点 急性非淋巴细胞白血病时的白细胞直方图特点 慢性淋巴细胞白血病时的白细胞直方图特点 所以，当发现某患者白细胞直方图改变为一个单一峰的曲线，务必要对血涂片进行检查，以排除急性白血病。千万不要漏诊。 单核细胞增多或嗜酸细胞增多症时的白细胞直方图特点 异常淋巴细胞增多症时的白细胞直方图特点 慢性粒细胞白血病时的白细胞直方图特点 （二）红细胞直方图红细胞直方图曲线的峰顶对应的是红细胞的 MCV，而曲线基底的宽度基本上反映红细胞的 RDW

13、。 正常红细胞直方图，在36360fl 范围内分布两个细胞群体，从 50125fl 区域有一个两侧对称、较狭窄的曲线，为正常大小的红细胞，从 125200fl 区域有另一个低而宽的曲线，为大红细胞、网织红细胞。 ，当红细胞体积大小发生变化时，峰左移或右移，或出现双峰。 （三）血小板直方图 正常血小板直方图，在 230fl 范围内分布，呈左偏态分布，集中分布于 215fl 内。当有大血小板或小红细胞、聚集血小板时，直方图显示异常。 血小板直方图 受干扰的异常血小板直方图（a）大量红细胞碎片， （b）多数血小板聚集， （c）小红细胞增多。第五节 方法学评价 本节考点： （1）仪器性能的评价 （2）

14、干扰血液分析仪检测的因素 （一）仪器性能评价1989 年，ICSH 公布了用于评价血液分析仪性能、优点和局限性的含白细胞分类、网织红细胞计数和细胞标志检测的血液分析仪评价指南 。仪器性能评价内容见表 1-4-5。 1.样本要求 血液样本要求在采集后 4 小时内进行处理，并需要各种类型的样本，以反映血液中各种成分质和量的变化（表 1-4-6） 。 2.性能评价 （1）稀释效应：包括受倍比稀释影响的参数：用同源乏血小板血浆稀释压积细胞，得到各种浓度，如l00%，90%，80%20%，10%，评价稀释度与参数之间的线性关系。理想情况下，线性范围越宽越好、回归线应通过原点。不受稀释效应影响的参数：如红

15、细胞平均指数，不受稀释度影响，理论上应为一条水平回归线。 （2）精密度：包括批内、批间精密度和总精密度。批内和批间精密度：是对同一批样本（批内或重复精密度）或二至多批样本（批间精密度）的重复测定，用 CV 值表示。理论上，精密度研究样本应覆盖整个病理范围，包括高、中、低值，进行重复测定，采用双因素方差分析进行批内、批间精密度评价。批间精密度受仪器校准和仪器漂移的影响。总精密度：总重复性由批内、批间精密度和携带污染结果得出。实验时从一个较大范围中随机抽取样本，并在几小时内测定，采用单因素方差分析进行评价。若总精密度评价在较长时间内完成，样本贮存和稳定性也是重要影响因素。 （3）携带污染：在运行临

16、床样本前，必须对高值和低值样本的携带污染进行评价，保证交叉测量时仪器结果的稳定性。方法是连续测试高值样本 3 次（il、i2、i3） ，随后立即连续测试低值样本 3 次（jl、j2、j3） ，按下列公式计算： （4）相关性：是仪器测定结果与常规方法相比的满意程度。采用大量的、未经选择的、覆盖所有预期范围的样本，用图形表达方式显示被评估仪器（Y 轴）和常规方法（X 轴）测定结果的差异，采用配对 t 检验进行统计分析。 （5）准确度：是“估计值与真值之间的一致性” 。真值由决定性方法或参考方法获得。血细胞计数的参考方法见表 l-4-7。 （6）样本老化：是采集静脉血样本，观察随时间增加测定结果的变化量。采集 l0 份样本，5 份为正常，5 份为异常，样本分别贮存在室温和 4，并在 0 小时、3