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1、Y8 9 8 0 3湖北中医学院硕士学位论文“三联疗法”对膝骨关节炎家兔骨内压 及_ 氧化氮水平影响的实验研究研究生姓名：指导教师姓名、职称：学科、专业名称：研究方向：黄平熊昌源教授主任医师中医骨伤科学骨关节病的中医药防治二0 0 六年五月十日湖北中医学院硕士学位论文中文摘要目的骨关节炎是临床上最常见的一种慢性、进展性关节疾病。其病理特点为关 节变性、破坏、软骨下骨化，关节边缘和软骨下骨反应性增生，骨赘形成。主要症 状是受累关节的疼痛，活动时加重，休息后缓解，后期关节肿胀僵硬，活动受限。 本病归属于中医“痹症”范畴。其发病率在我国呈上升趋势。患者所出现的疼痛、 致残，严重影响日常生活，不但给家
2、庭同时也给社会带来了沉重的经济负担，因 此寻求有效的治疗方法成为当务之急。本实验通过造骨内高压的方式建立兔膝骨 关节炎模型，采用中药熏洗，通过电极刺激功能锻炼，手法弹拨三联法进行治疗。 以疗效肯定的扶他林乳胶剂治疗作为对照，检测胫骨上端骨内压及膝关节软骨、 滑膜、关节液一氧化氮水平的变化。初步明确该法对膝关节炎的作用机理，为临 床推广运用提供理论及实验依据。方法采用随机的方法将5 6 只4 一l0 月龄健康日本大耳白兔分为7 个组，正常组 ( ) 、模型组( B ) 、三联法组( c ) 、熏洗组( D ) 、功能锻炼组( E ) 、手法 弹拨组( F ) 、扶他林组( G ) ，每组8 只。
3、以致骨内高压的方式造模，于兔腹股 沟中点以下10 m m 处结扎并切断右侧股静脉建立兔膝骨关节炎模型，遣模1o 周 后备组采用相应的方法进行治疗，4 周后将骨髓活检穿刺针穿刺达胫骨上端髓腔 内，以三通管与传感器相连检测骨内压，后将动物处死，取膝关节软骨、滑膜、关 节液，检测一氧化氮( N O ) 含量。结果1 中药熏洗、功能锻炼、手法弹拨及三种方法联合应用均能较明显改善膝骨性关节炎家兔的膝关节的功能活动，扶他林乳胶剂治疗也有类似效果。2 模型组骨内压水平明显高于正常组，熏洗组、功能锻炼组、手法弹拨组骨内压水平较模型组减低，其三者之问无明显差异( P 0 0 5 ) ，扶他林组及三联法 组与模型
4、组相比有显著性差异( P O 0 5 ) ，扶他林组及三联法组与 模型组相比有显著性差异( P O 0 5 ) c o m p e r eL ot h em c ) d e lg r u p ，t h eL h r e eu n i t e dr e m e d yt r e a t i n gg r o u pa n dt h eV o t a l i nt r e a L i n gg r o u po b v i o u s l yr e d u c e d ( P 0 0 5 ) c o m p e r et ot h em o d e lg r o u p ，t h et h r e
5、 eu 兀i t e dr e m e d yt r e a t i n gg r o u pa n dt h eV o t a li nt r e a t i n gg r o u po b v i o u s 】yJ e d u c e d ( P 55 岁年龄组有骨关节炎x 线表现者高迭8 0 。 女性多见，女：男= 2 ：l 。其中膝关节最易受侵犯，占4 1 。骨关节炎的发病率随年龄的增加而增长，当今社会进入老龄化，该瘸的发病率呈逐年上升趋势。因此， 在人均寿命延长，生活质量要求大大提高的今天，研究该病的发病机制和有效的 治疗方法及开发有效的治疗药物具有较大的实用价值和较高的社会效益。
6、 现代医学认为，骨关节炎发病核心，从膝关节软骨退行性改变开始逐步累及 软骨下骨质、滑膜、关节囊等关节重要结构，其修复及代偿过程是一个炎症过程。 本病以局限性、进行性关节软骨破坏及关节边缘的骨赘形成为其主要病理形态学 的改变。发病因素与外伤、炎症、衰老、代谢和免疫等多种因素有关。其中免疫 因素越来越受到关注，细胞因子与o A 发病关系密切，如I L l 、N o 、T N F 等介导基 质破坏，抑制软骨细胞增殖。另外，骨内高压的产生也是促使O A 发病及发展的重 要因素。并将膝关节炎分为原发性和继发性两大类。原发性骨关节炎的成因目前 主要为：关节正常的退变过程、微小外伤累积、遗传因素，蛋白多糖减
7、少及肥胖 等。继发性骨关节炎成因主要是：外伤、关节先天异常、感染、关节稳定性变差、 代谢及非特异性关节病。本课题中所用熏洗中药羌活、独活、白芷等中药具有抗 炎抗渗出，抑制炎性介质的作用，可以显著降低一氧化氮( N o ) 含量。 祖国医学认为，膝关节骨关节炎的病因病机为“本虚标实”，其发生同肝肾亏虚、感受风寒湿邪和劳损有关。实际上将病因分成外因、内因和劳损。内经痹 论中有“风寒湿三气杂至，合而为痹”，素问一长刺节论指出：“病在骨，骨 重不可举，骨髓酸痛，寒气至，名日骨痹”；( ( 类症制裁痹症说：“诸痹，良由营卫先虚，腠理不密，风寒湿乘虚内袭，正气为邪气所阻，不能宣行，因而留滞，气 血凝涩，久
8、而成痹。”均强调了发病的外因实际上是与气候和环境等因素有关。灵枢五交篇说“粗理而肉不坚者，善病痹”内经痿证中有“肾气热则腰 背不举，骨枯而髓减，发为骨痿”之说，指出了内因成病机制。张氏医通日：“膝为筋之府”、“膝痛无有不因肝肾虚者”。肝肾同源，肾主骨，肝主筋，肝肾虚损则发 病。故临床所见膝关节骨关节炎多为中老年人。这与西医学原发性关节正常退变 过程之观点相近。古代医籍中“运行劳倦”可理解为长期劳损或外伤，亦为膝关 节骨关节炎诱发因素之一。可见，中医辨证理论“风寒湿邪、肝肾虚损和劳损外 伤”学说与现代医学对本病的认识基本一致。本课题通过模拟人类疾病的发病过 程建立兔膝骨关节炎模型，立足于中医的整
9、体观，采用中药熏洗、功能锻炼、手 法弹拨三联疗法，以补肝益肾、活血化瘀、软坚敌结、祛风除湿、通利关节为法 则治疗本病，达到改善症状延缓疾病发展的目的。近年来现代医学在骨关节炎病因病理、发病机制及治疗方面的研究取得了很 大的进展，治疗方法日益增多，特别是基因技术和组织工程学的迅速发展，使得第7 页湖北中医学院硕士学位论文本病的治疗前景更加广阔，但仍然存在着费用较昂贵，副作用较大等问题。祖国 医学在缓解症状、廷缓病程进展方面有着独特的疗效。本课题围绕现代医学已证 实与本病形成密切相关的因素，通过提取兔膝关节软骨、滑膜、关节液，检测其 中一氧化氮( N O ) 含量及胫骨上端骨内压水平的变化，证实了
10、三联疗法可以延缓本 病的发展，对于膝骨关节炎关节软骨有良好的保护作用。第8 页湖北中医学院硕士学位论文实验材料和方法一材料1 实验动物4 1O 月龄健康日本大耳白兔5 6 只，体重2 3 5 k g ，雌雄不限，由华中科 技大学同济医学院实验动物中心提供。各组大白兔进行实验前在实验室饲养一周。2 实验药物熏洗中药组成( 川芎15 9 、羌活1 2 9 、独活1 2 9 、桂枝1 0 9 、桑枝3 0 9 、伸筋 草1o g 、透骨草l O g 、川椒1 0 9 、艾叶10 9 、五加皮1 2 9 、海桐皮12 9 、白芷10 9 、 防风1o g ) ；扶他林乳胶剂( 双氯芬酸二乙胺乳胶剂)
11、每克含主要成分双氯芬酸 二乙胺1 0 毫克，批号：国药准字H 1 9 9 9 0 2 9 1 ；以上二药由武汉市定康大药房提供。3 实验试剂及仪器一氧化氮试剂金，南京建成生物工程研究所提供，批号2 0 0 5 0 5 l0 。 G 6 8 0 5 1 型针灸治疗仪，由中国青岛鑫升实业有限公司提供。 B L 一4 2 0 E 。生物机能实验系统，成都泰盟科技有限公司研制。 自制中药熏洗床：自行设计，将一2 mxO 8 mx1 m 的实验桌改制，床的两侧 均有固定钉，每次可将8 只实验兔俯卧固定于床面，并将每只兔右下肢处的桌面 挖空，以便伸入床下熏洗，床四周用双层塑料薄膜围好，床下放一最大功率1
12、5 0 0 w 的可调温电热锅。 自行改良三通道带芯穿刺针二方法1 动物饲养各组兔均在相同条件下，自由饮水，摄食。饲料为华中科技大学同济医学院 实验动物中心提供的兔条形颗粒饲料，成分为青料、豆饼、麸皮、骨粉、食盐。2 动物分组按组间均衡一致的原则，将5 6 只兔随机分为7 组，正常组( A ) 、模型组( B ) 、 三联法组( c ) 、熏洗组( D ) 、功能锻炼组( E ) 、手法弹拨组( F ) 、扶他林组 ( G ) ，每组8 只3 动物造模1 ) 造模原理：手术结扎右下肢股静脉，造成血流动力学异常，导致骨内压 升高，形成兔膝骨关节退行性交。 2 ) 造模方法：正常饲养1 周未发现各
13、组兔有异常情况后，通过造骨内高压 的方式建立兔膝骨关节炎模型。称取各只兔体重，作记录后配3 戊巴比妥钠溶第9 页湖北中医学院硕士学位论文液，按体重3 0 m g k g 作耳缘静脉推注麻醉，生效后将兔仰卧固定于兔手术台上， 双侧髋关节稍屈曲，外展外旋，双膝关节屈凿3 0 。触及右腹般沟处股动脉搏动 后，于其内侧作l c m 纵切口，逐层分离直至股血管神经束，于其闻分离出股静脉， 紧靠腹股沟韧带处作双重结扎，并于结扎线间切断股静脉，伤口内滴入庆大霉素 后缝合，以活力碘消毒松开兔四肢待其苏醒，按组放入于笼中自由活动。术后青 霉素预防感染一周。4 治疗方法造模1 0 周后全部实验兔于右膝关节周围脱毛
14、。 A 组、B 组照常饲养，不作任何处理；D 、E 、F 三组按分组每天予以不同治疗， 中药熏洗组每次取伤科熏洗汤2 付，治疗前先浸泡半小时，然后放入电热锅加热 至煮沸冒汽，同时将8 只实验兔并排俯卧固定于床面放入右下肢熏洗，每次半小 时。功能锻炼组取自制胶带式电极其尾端与G 6 8 0 5 电针治疗仪相连，将正负极分 别与兔右小腿三头肌上下相连，接通电源，使兔膝关节被动屈伸活动，每次1 5 分钟。手法弹拨分别周按揉、弹拨为主活动兔右侧胭绳肌、腓肠肌及股四头肌， 并用屈伸法被动屈伸兔右膝关节，活动范围9 0 ”一1 2 0 0 之间，每次共l5 分钟；c 组 则三种方法联合使用，治疗时间为6
15、0 分钟；G 组伤膝外敷扶他林乳胶剂，按人 兔膝关节表面积的大小折算用药量( 约o 5 9 c m 2 ) 。5 取材及劁备治疗4 周后，以3 戊巴比妥钠溶液，将兔按体重3 0 m g k g 作耳缘静脉麻醉， 生效后将兔仰卧固定于兔台上，右侧膝关节周围剃毛，以活力碘消毒皮肤，后首先 测骨内压，测定完毕将动物处死迅速施行膝关节穿刺，膝关节腔穿刺点为髌骨外 下缘，进入关节腔后尽量将液体抽出测定含量注入试管中，后按l ：9 注入生理盐 水稀释，置入试管中；然后解剖膝关节，切开膝关节囊，以锐利刀片取膝内侧滑 膜，胫骨平台中央2 毫米矢状软骨，称取组织重量，按重量体积比为1 ：4 加生理 盐水制成2
16、0 的组织匀浆，分装入试管，一7 0 冰箱保存待测。三检测指标1 骨内压的测定仪器采用B L 一4 2 0 E 生物机能实验系统，通过密封管道与自行改良三通道带 芯穿刺针相连接。预先接好管道系统，内充满2 肝素生理盐水，将实验兔仰卧 位固定于兔台上，双下肢外展15 。，膝关节屈曲3 0 。位，使B L 一4 2 0 E 1 生物机 能实验系统与所测肢体保持同一平面。测压区备皮，消毒，胫骨髓腔进针点为 胫骨平台下外侧约0 5 c m ，穿刺成功后，将针芯退至三通道开口稍后( 不全部退 出、阻防针管与外界相通、导致骨内压下降、影响检测数据的准确) 关闭穿刺 阀口，打开连接感应器管的闽口，再通过紧靠感应器的三通开关，注入肝素盐水 使之充满骨穿针腔，将针尾与B L 一4 2 0 E 生物机能实验系统一端相连接，调节三 通管旋纽，使骨腔与B L 一4 2 0 E + 生物机能实验系统相通，压力平稳后开始测量骨 内压，每5 分钟记录一次骨内压数值，每只实验兔测试时问为半小时，将记录 压
