《“双固一通”电针法对衰老模型大鼠的治疗作用及T细胞免疫机制研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《“双固一通”电针法对衰老模型大鼠的治疗作用及T细胞免疫机制研究（74页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、湖北中医药大学学位论文原创性声明I 本人声明：所呈交的学位论文是在导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，本论文不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得湖北中医药大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在论文中作了明确的说明本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担学位论文作者签名：赤尸青 2 0 l Z # 箩月2 6 日关于学位论文使用授权的声明本人完全了解湖北中医药大学有关保留，使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部份内容，可以
2、采用复印、缩印或其他手段保留学位论文；学校可以根据国家或湖北省有关部门的规定送交学位论文同意中国优秀博硕士论文金文数据库出版章程的内容同意授权中国科学技术信患研究所将本人学位论文收录到中国学位论文全文数据库( 保密论文在解密后遵守此规定)论文作者签名：赤P 酋导师签名：2 研】年岁月6 日目录中文摘要IA B S T R C T 】V缩略词表前言1一、实验研究3实验一“双固一通竹电针法对衰老模型大鼠的治疗作用3I 、材料和方法32 、结果73 、讨论13实验二“双固一通“ 电针法对衰老模型大鼠T 细胞免疫机制的研究1 51 、材料和方法152 、结果183 、讨论2 4二、讨论2 51 、祖国
3、医学对衰老的认识2 51 1 病因病机2 51 2 立题依据2 82 、西医学对衰老的认识与免疫衰老学说3 12 1 西医学对衰老的认识3 12 2 免疫衰老学说3 22 3 自由基理论3 33 、衰老模型的建立与评价3 43 1 臭氧吸入法3 43 2 胸腺摘除法3 43 3 自然衰老法和S A M P 系小鼠快速衰老模型等方法3 53 4D 一半乳糖诱导法3 54 、胸腺组织学改变3 54 1 凋亡细胞3 64 2 线粒体改变3 64 3 胸腺与免疫3 75 、T 细胞亚群的变化及意义3 86 、流式细胞仪在检测外周血T 淋巴细胞亚群作用的评价3 9三、结语4 1参考文献4 2附录一文献综
4、述4 9附录二附图5 6致谢6 0中文摘要目的本实验以中医“治未病“ 的思想理论为指导，以皮下注射D 一半乳糖建立的衰老模型大鼠为实验对象，在前期研究的基础上，进一步观察与探讨“双固一通”电针法对衰老模型大鼠的治疗作用及T 细胞免疫机制，为临床研究提供依据，并促进其在防治衰老领域中的应用。方法清洁级s D 健康大鼠雌性4 0 只，5 月龄，体重( 18 0 士20 ) g ，根据简单随机排序法分为每组各1 0 只，即青年对照组、衰老模型组、电针强壮穴组、电针对照组，采用D 一半乳糖( D - g a l ) 致亚急性衰老法造成大鼠亚急性衰老模型。电针强壮穴组取“关元“ 、“后三里“ 、“百会一
5、；电针对照组取“中极力、“阴陵泉“ 、“印堂升两组电针组均选用H A N S L H 20 2 H 型电针仪，连续波，频率2 H z ，强度为l m A ，通电1 5 m i n 。采用M o r i s 水迷宫实验比较学习记忆行为能力的变化；采用黄嘌呤氧化酶法检测血清中S O D 活性，用硝酸盐还原酶法测定血清中M D A 含量；手术摘取胸腺与脾脏计算胸腺与脾脏指数变化；透射电镜法观察衰老模型大鼠胸腺细胞超微结构的改变，来观察“双固一通升电针法对D - 半乳糖诱导的衰老模型大鼠延缓衰老的疗效。采用流式细胞仪检测T 细胞亚群C D 4 + ；C D 4 + C D 4 5 R O + ；C D
6、 8 + ；C D 8 + C D 4 5 R O + ；C D 4 5 R A + ；C D 4 5 R O + ；C D 4 5 R A + C D 4 5 R O + 阳性T 细胞表达的变化，探讨“双固一通力电针治疗延缓衰老的机制。结果1 M o ris 水迷宫检测，与正常对照组相比，衰老模型组大鼠找到平台的时间延长( P 0 0 5 ) ；与“双固一通竹电针组相比，电针对照组C D 8 + T 细胞( P 0 0 5 ) ；C o m p a r e dw i t ht h eE Ag r o u p ，t h ep o siti v ee x p r e s si o nr a t
7、ei nE A cg r o u pw a sh i g h e r ，C D 8 + Te e l1S ( P D 一半乳糖( 上海国药F 20 10 0 8 1 ) O 9 氯化钠( 上海国药集团化学试剂有限公司) S O D ，M D A 试剂盒( 南京建成生物工程研究所)1 1 3 主要仪器 0 3 5 m mX2 5m m 华佗牌毫针( 苏州医疗器械厂) H A N SL H2 0 2H 型电针仪( 北京华威) B S l l O 天平( 北京赛多利斯仪器系统有限公司) 水迷宫实验仪器( 泰盟科技有限公司) L K B V 型超薄切片机( 瑞典B R O M M A 公司) 日立H
8、一6 0 0 型透射电镜( 日本日立公司)湖北中医药大学2 0 1 2 届硕士学位论文1 2 方法1 2 1 动物分组及处理清洁级s D 健康大鼠4 0 只，体重( 180 20 ) 克，对所有大鼠编号，查随机数字表，分为A ，B ，C ，D 四组，每组10 只，分别对应正常对照组、衰老模型组、电“双固一通”电针组、电针对照组，各组处理如下：正常对照组( N c 组) ：正常饲养( 以下各组略) ，不进行造模和电针治疗。衰老模型组( M o d e l 组) ：仅造模，不予电针治疗。“双固一通“ 电针组( E A 组) ：造模并电针治疗( 取“关元升、“后三里力、“百会“ ) 。电针对照组(
9、E A c 组) ：造模并电针治疗( 取“中极力、“阴陵泉力、“印堂骨) 。N c 组与M o d e l 组同期进行颈背部皮下注射0 9 氯化钠注射液( 0 5 m 1 3 0 0 9 ) ，每日一次。N c 、M o d e l 同E A 和E A c 组以相同的方法、相同时间段内抓取固定各组大鼠治疗结束后，禁食2 4 h ，取材，进行相应指标检测。1 2 2 衰老模型大鼠的制作方法参照D 一半乳糖制作衰老模型大鼠文献方法拍1 采用D 一半乳糖( D - g a l )致亚急性衰老法造成大鼠亚急性衰老模型。首先，将D 一半乳糖5 0 0 0 m g 溶于50 0 m L 生理盐水，配制成l
10、O m g m L 浓度的注射液，按注射剂量1 2 5 m g k g d ( 即每克体重注射O 0 1 2 5 m LD 一半乳糖溶液) ，于每日上午给大鼠进行颈背部皮下注射，正常对照组注射等体积生理盐水，各组大鼠每周称重1 次，根据末次称重的体重克数调整给药剂量，连续造模8 周。D -半乳糖慢性中毒所致衰老模型鼠免疫功能明显减退，氧自由基M D A 、S O D的改变及生化学指标血糖、血脂改变趋势与自然衰老的动物模型一致n 1 并且其衰老的程度与2 4 月龄相似。I 2 3 电针治疗方法1 2 3 1 “双固一通力电针组治疗方法参照华兴邦动物针灸穴位图谱嘲选择“关元骨、“后三里骨、。百。双
11、固一通一电针法对衰老模型大鼠的治疗作用及T 细胞免疫机制研究会力( “足三里竹隔日交替针刺) ，“中极”、“阴陵泉“ 、“印堂一( “阴陵泉”隔日交替针刺) 。具体操作：穴区剪毛备皮，7 5 N 用酒精常规消毒，穿自制鼠衣并放于固定架固定。“关元”采用华佗牌0 3 5 r a mX2 5 m m 不锈钢毫针向上斜刺3 5m m ；“后三里力采用华佗牌o 3 5 r a m 2 5 m m 不锈钢毫针直刺3 5m m ；双侧“后三里“ 隔日交替与“关元”接一对电极，关元接正极，后三里接负极，接通H A N SL H 20 2 H 型电针仪，选用连续波，频率2 H z ，强度为l m A ，通电1
12、5 m i n ；“百会力采用华佗牌0 3 5 r a mX2 5h i m 不锈钢毫针平刺5 m m ，不接电针。每日1 次，每周6 次，共治疗4 周。1 2 3 2 电针对照组治疗方法参照华兴邦动物针灸穴位图谱。造模成功后，取“中极力、“阴陵泉”、“印堂“ ，“中极力采用华佗牌0 3 5 m mX2 5 m m 不锈钢毫针向上斜刺3 5n u n ；“阴陵泉竹采用华佗牌0 3 5 r a mX2 5 m m 不锈钢毫针直刺3 5m m ；双侧“阴陵泉力隔日交替与“中极力接一对电极，中极接正极，阴陵泉接负极，接通H A N SL H 2 0 2 H 型电针仪，选用连续波，频率2 H z ，强
13、度为l m A ，通电15 m i n ；“印堂“ 采用华佗牌0 3 5 r a mX2 5m m 不锈钢毫针平刺5 m m ，不接电针。1 2 4 标本的采集与制备1 2 4 1 于末次治疗的第二天，用毛细玻璃管从大鼠一侧的眼角动静脉丛眼球采血2m L ，常温静置3 0 m i n 后用离心机以30 0 0r m i n 离心1 0m i n ，吸取血清转入已标记的E P P 管- 2 0 1 3 低温保存，血清全部收集完毕后一并检测血清中S O D 及M D A 含量。1 2 4 2 将各组大鼠称重，取血后处死，立即无菌取出脾脏、胸腺，剥离周围结缔组织，于分析天平上称重，代入公式：脾脏指数( 胸腺指数) = 脾脏重量( 胸腺重量) 体质量( m g g ) ，算出脾脏指数与胸腺指数。1 2 4 3 将取出的胸腺置入已准备好的2 5 戊二醛中前固定；之后用0 1 M 磷酸缓冲液漂洗三次，锇酸( O ，o 1 ) 后固定，再用0 1 M 磷酸缓冲液漂洗三次，梯度酒精脱水( 5 0 ，7 0 ，8 0 ，9 5 ，1 0 0
