《菌落总数检验操作规程》由会员分享，可在线阅读，更多相关《菌落总数检验操作规程（6页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、汉臣氏（沈阳）儿童制品有限公司 文件编码 第 1 页共 6 页菌落总数检验操作规程 颁发 部门质量部新订修订复审页数共 2 页文件编码文件 性质管理标准操作标准 技术标准原编编码 起 草年 月 日审 核年 月 日批 准年 月 日QC年 月 日执行 日期年 月 日 分发 部门质量管理部、QC一、一、目的目的建立菌落总数检验的标准操作程序，使操作过程规范化。二、二、适用范围适用范围适用于菌落总数的检验操作。三、三、职责职责1. 检验人员严格按检验操作规程进行检验。2. QC 主管监督检查执行情况。四、四、程序程序1.范围 本方法适用于食品中菌落总数（Aerobic plate count）的测定
2、2.术语和定义 菌落总数：食品检样经过处理，在一定条件下（如培养基、培养温度和培养时间等）培养后，所得每 g（mL）检样中形成的微生物菌落总数。3. 设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：3.1 恒温培养箱：36 1 ，30 1 。 3.2 冰箱：2 5 。3.3 恒温水浴箱：46 1 。 3.4 天平：感量为 0.1 g。 3.5 均质器。 3.6 振荡器。 3.7 无菌吸管：1 mL（具 0.01 mL 刻度） 、10 mL（具 0.1 mL 刻度）或微量移液器及吸汉臣氏（沈阳）儿童制品有限公司 文件编码 第 2 页共 6 页头。3.8 无菌锥形瓶：容量 25
3、0 mL、500 mL。 3.9 无菌培养皿：直径 90 mm。 3.10 pH 计或 pH 比色管或精密 pH 试纸。 3.11 放大镜或 和菌落计数器。4.培养基和试剂 4.1 平板计数琼脂培养基：见附录 A 中 A.1。 4.2 磷酸盐缓冲液：见附录 A 中 A.24.3 无菌生理盐水：见附录 A 中 A.3。5.检验程序 菌落总数的检验程序见图 1。 图 1 菌落总数的检验程序10 倍系列稀释选择 2 个3 个适宜稀释度的样品匀液，各取 1 mL 分别加入无菌培养皿内检 样 25g(mL)样品+225 mL 稀释液，均质每皿中加入 15 mL20 mL 平板计数琼脂培养基，混匀培 养计
4、数各平板菌落 数计算菌落总数报 告 汉臣氏（沈阳）儿童制品有限公司 文件编码 第 3 页共 6 页6.操作步骤 6.1 样品的稀释 6.1.1 固体和半固体样品：称取 25 g 样品置盛有 225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000 r/min10000 r/min 均质 1 min2 min，或放入盛有 225 mL 稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打 1 min2 min，制成 1:10 的样品匀液。6.1.2 液体样品：以无菌吸管吸取 25 mL 样品置盛有 225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成 1:1
5、0 的样品匀液6.1.3 用 1 mL 无菌吸管或微量移液器吸取 1:10 样品匀液 1 mL，沿管壁缓慢注于盛有 9 mL 稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面） ，振摇试管或换用 1 支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成 1:100 的样品匀液。6.1.4 按 6.1.3 操作程序，制备 10 倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用 1 次1 mL 无菌吸管或吸头。 6.1.5 根据对样品污染状况的估计，选择 2 个3 个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液） ，在进行 10 倍递增稀释时，吸取 1 mL 样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。同时，分别吸取
6、1 mL 空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。 6.1.6 及时将 15 mL20 mL 冷却至 46 的平板计数琼脂培养基（可放置于 46 1 恒温水浴箱中保温）倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。6.2 培养 6.2.1 待琼脂凝固后，将平板翻转，36 1 培养 48 h2 h。水产品 301 培养 72 h3 h。6.2.2 如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基（约 4 mL） ，凝固后翻转平板，按 6.2.1 条件进行培养。6.3 菌落计数可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成
7、单位（colony-forming units，CFU）表示。 6.3.1 选取菌落数在 30 CFU300 CFU 之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于 30 CFU 的平板记录具体菌落数，大于 300 CFU 的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。 6.3.2 其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，汉臣氏（沈阳）儿童制品有限公司 文件编码 第 4 页共 6 页即可计算半个平板后乘以 2，代表一个平板菌落数。 6.3.3 当平板上出现菌落间无明显界线
8、的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数7.结果与报告 7.1 菌落总数的计算方法 7.1.1 若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每 g（mL）样品中菌落总数结果。7.1.2 若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按以下公式计算：N=C (n1+0.1n2)d式中： N样品中菌落数； C平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和； n1第一稀释度（低稀释倍数）平板个数 n2 第二稀释度（高稀释倍数）平板个数 d稀释因子（第一稀释度）.7.1.3 若所有稀释度的平板上菌落数均大于 300 CFU，则对稀释度最高
9、的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。7.1.4 若所有稀释度的平板菌落数均小于 30 CFU，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。7.1.5 若所有稀释度（包括液体样品原液）平板均无菌落生长，则以小于 乘以最低稀释倍数计算。 7.1.6 若所有稀释度的平板菌落数均不在 30 CFU300 CFU 之间，其中一部分小于 30 CFU 或大于 300 CFU 时，则以最接近 30 CFU 或 300 CFU 的平均菌落数乘以稀释倍数计7.2 菌落总数的报告 7.2.1 菌落数小于 100 CFU 时，按“ 四舍五入”原则修约，以整数报告。7.2
10、.2 菌落数大于或等于 100 CFU 时，第 3 位数字采用“ 四舍五入”原则修约后，取前 2 位数字，后面用 0 代替位数；也可用 10 的指数形式来表示，按“ 四舍五入”原则修约后，采用两位有效数字。7.2.3 若所有平板上为蔓延菌落而无法计数，则报告菌落蔓延。 7.2.4 若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。 7.2.5 称重取样以 CFU/g 为单位报告，体积取样以 CFU/mL 为单位报告。8.编制依据：GB 47892-2010 食品微生物学检验 菌落总数的测定汉臣氏（沈阳）儿童制品有限公司 文件编码 第 5 页共 6 页附录 A（规范性附录）培养基和试剂A.1 平板计数
11、琼脂（ plate count agar，PCA）培养基A.1.1 成分 胰蛋白胨 5.0 g 酵母浸膏 2.5 g 葡萄糖 1.0 g 琼脂 15.0 g 蒸馏水 1000 mL pH 7.00.2A.1.2 制法将上述成分加于蒸馏水中，煮沸溶解，调节 pH。分装试管或锥形瓶，121高压灭菌 15 min。A.2 磷酸盐缓冲液 A.2.1 成分 磷酸二氢钾（KH2PO4） 34.0 g 蒸馏水 500 mL pH 7.2A.2.2 制法 贮存液：称取 34.0 g 的磷酸二氢钾溶于 500 mL 蒸馏水中，用大约 175 mL 的 1 mol/L 氢氧化钠溶液调节 pH，用蒸馏水稀释至 1 000 mL 后贮存于冰箱。 稀释液：取贮存液 1.25 mL，用蒸馏水稀释至 1 000 mL，分装于适宜容器中，121 高压灭菌 15 min。 A.3 无菌生理盐水A.3.1 成分氯化钠 8.5 g 蒸馏水 1 000 mL A.3.2称取 8.5氯化钠溶于 1 000 mL 蒸馏水中，121 高压灭菌 15 min。.汉臣氏（沈阳）儿童制品有限公司 文件编码 第 6 页共 6 页
