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1、气相色谱法测定食品中滴滴涕、六六六的残留量1 原理样品中六六六、滴滴涕经提取、净化后用气相色谱法测定,与标准比较定量。电子捕获检测器对于负电性强的化合物具有较高的灵敏度, 利用这一特点 , 可分别测出微量的六六六和滴滴涕。不同异构体和代谢物可同时分别测定。出峰顺序: -666、 -666、 -666、 -666、p,p-DDE、o,p-DDT、p,p-DDD、p,p-DDT。2 试剂使用的试剂一般系分析纯, 有机溶剂需经重蒸馏。2.1 丙酮。2.2 乙醚。2.3 95%乙醇。2.4 石油醚 : 沸程 3060。2.5 苯。2.6 无水硫酸钠。2.7 草酸钾。2.8 硫酸。2.9 2%硫酸钠溶液
2、。2.10 过氯酸-冰乙酸混合液 :1:1。2.11 六六六、滴滴涕标准溶液:精密称取甲、乙、丙、丁六六六四种异构体和 p,p-滴滴涕、p,p-滴滴滴、p,p滴滴伊、o,p-滴滴涕( 、 、 、 -666、p,p-DDT、p,p-DDD、p,p-DDE、o,p-DDT)各 10mg,溶于苯 ,分别移入 100ml 容量瓶中 ,加苯至刻度 , 混匀,每毫升含农药100 g,作为贮备液存于冰箱中。2.12 六六六、滴滴涕标准使用液:临用时各吸取 2.0ml,分别移入 10ml容量瓶中 , 各加苯至刻度 , 混匀。每毫升相当农药20g, 此浓度适用于薄层色谱法。 用气相色谱法时, 根据仪器灵敏度还需
3、以己烷稀释至适宜浓度,一般为0.01g/ml 。2.13 载体: 硅藻土 , 80100 目, 气相色谱用。2.14 固定液:OV-17 及 QF-1。3 仪器GC-2001(ECD) 4 操作方法4.1提取4.1.1 粮食:称取 20g 粉碎后并通过 20 目筛的样品, 置于 250ml 具塞锥形瓶中,加 100ml 石油醚,于电动振荡器上振荡30min, 滤入 150ml分液漏斗中,以2030ml 石油醚分数次洗涤残渣,洗液并入分液漏斗中, 以石油醚稀释至100ml。4.1.2 蔬菜、水果: 称取 200g 样品,置于捣碎机中捣碎12min(若样品含水分少,可加一定量的水 )。 称取相当于
4、原样 50g的匀浆,加 100ml丙酮,振荡 lmin, 浸泡 1h,过滤。残渣用丙酮洗涤三次,每次 10ml,洗液并入滤液,置于500ml 分液漏斗中,加 80ml 石油醚,振摇 1min,加 200ml2硫酸钠溶液,振摇1min,静置分层 ,弃去下层。将上层石油醚液经盛有约15g 无水硫酸钠的漏斗 ,滤入另一分液漏斗中,再以少量石油醚分数次洗涤漏斗及其内容物,洗液并入滤液中, 并以石油醚稀释至 100ml。4.1.3 动物油:称取 5g炼过的样品,溶于250ml 石油醚,移入 500ml分液漏斗中。4.1.4 植物油:称取 10g样品,以 250ml 石油醚溶解,移入500ml 分液漏斗中
5、。4.1.5 乳与乳制品 : 称取 100g 鲜乳(乳制品取样量按鲜乳折算),移入500ml 分液漏斗中。加 100ml 乙醇、1g草酸钾,猛摇 1min, 加 100ml 乙醚,摇匀。加 100ml石油醚,猛摇 2min。静置 10min,弃去下层。将有机溶剂层经盛20g 无水硫酸钠的漏斗,小心缓慢地滤入250ml 锥形瓶中 ,再用少量石油醚分数次洗涤漏斗及其内容物,洗液并入滤液中。以脂肪提取器或浓缩器蒸除有机溶剂,残渣为黄色透明油状物。再以石油醚溶解,移入150ml 分液漏斗中,以石油醚稀释至 100ml。4.1.6 蛋与蛋制品 : 取鲜蛋 10 个,去壳,全部混匀。称取 10g(蛋制品取
6、样量按鲜蛋折算 )置于 250ml 具塞锥形瓶中,加100ml 丙酮,在电动振荡器上振荡 30min,过滤。用丙酮洗残渣数次 ,洗液并入滤液中用脂肪提取器或浓缩器将丙酮蒸除,在浓缩过程中,溶液变粘稠 ,常出现泡沫,应小心注意不使其溢出。 将残渣用 50ml 石油醚移入分液漏斗中。振荡,静置分层。将下层残渣放入另一分液漏斗中,加 20ml 石油醚 ,振摇,静置分层 , 弃去残渣 ,合并石油醚,经盛约15g 无水硫酸钠的漏斗滤入分液漏斗中, 再用少量石油醚分数次洗涤漏斗及其内容物,洗液并入滤液中,以石油醚稀释至100ml。4.1.7 各种肉类及其他动物组织4.1.7.1 甲法: 称取纹碎混匀的20
7、g样品,置于乳钵中, 加约 80g 无水硫酸钠研磨, 无水硫酸钠用量以样品研磨后呈干粉状为宜。将研磨后的样品和硫酸钠一并移入250ml 具塞锥形瓶中, 加 100ml 石油醚,于电动振荡器上振摇30min。抽滤,残渣用约 100ml 石油醚分数次洗涤 , 洗液并入滤液中。 将全部滤液用脂肪提取器或浓缩器蒸除石油醚,残渣为油状物。 以石油醚溶解残渣, 移入 150ml 分液漏斗中, 以石油醚稀释至 100ml。4.1.7.2 乙法: 称取绞碎混匀的20g 样品,置于烧杯中,加入40ml1:1过氯酸 -冰乙酸混合液 ,上面覆盖表面皿,于 80的水浴上消化45h。将上述消化液移入500ml 分液漏斗
8、中, 以 40ml 水洗烧杯 ,洗液并入分液漏斗。以30、20、20、20ml 石油醚(或环己烷 )分四次从消化液中提取农药。合并石油醚 (或环己烷 )并使之通过高约45cm 的无水硫酸钠小柱,滤入 100ml 容量瓶中 , 以少量石油醚 (或环己烷 )洗小柱 , 洗液并入容量瓶中 , 然后稀释至刻度,混匀。4.2净化4.2.1于 100ml 样品石油醚提取液 (动、植物油样品除外 )中加 10ml硫酸(提取液与硫酸体积比为10:1)。振摇数下后,将分液漏斗倒置,打开活塞放气,然后振摇半分钟,静置分层。弃去下层溶液,上层溶液由分液漏斗上口倒至另一250ml 分液漏斗中,用少许石油醚洗原分液漏斗
9、后,并入250ml 分液漏斗中,加100ml2硫酸钠溶液,振摇后静置分层。弃去下层水溶液,用滤纸吸除分液漏斗颈内外的水。然后将石油醚经盛有约15g 无水硫酸钠的漏斗过滤, 并以石油醚洗涤盛有无水硫酸钠的漏斗数次。 洗液并入滤液中, 以石油醚稀释至一定体积,供气相色谱法用。 或将全部溶液浓缩至1ml,进行薄层色谱测定。经上述净化步骤处理过的样液,如在测定时出现干扰, 可再以硫酸处理。4.2.2于 250ml 动、植物油样品石油醚提取液中,加25ml 硫酸。振摇数下后,将分液漏斗倒置 ,打开活塞放气 ,然后振摇半分钟 ,静置分层 ,弃去下层溶液。再加25ml 硫酸,振摇 30s,静置分层,弃去下层
10、溶液。上层溶液由分液漏斗上口倒于另一500ml 分液漏斗中,用少许石油醚洗原分液漏斗,洗液并入分液漏斗中。加250ml2硫酸钠溶液,摇匀,静置分层。以下按4.2.1 “弃去下层水溶液 ” 起依法操作。4.3色谱条件4.3.1氚源电子捕获检测器4.3.1.1气化室温度: 190。4.3.1.2色谱柱温度 : 160。4.3.1.3 检测器温度 : 165。4.3.1.4 载气(氮气)流速: 60ml/ min。4.3.1.5 极化电压 : 30V。4.3.2Ni63 电子捕获检测器4.3.2.1气化室温度: 215。4.3.2.2色谱柱温度: 195。4.3.2.3检测器温度: 225。4.3.
11、2.4载气(氮气)流速: 90ml/min。4.3.3色谱柱:内径 34mm,长 1.22m 的玻璃柱,内装涂以 1.5OV17 和 2QF1 的混合固定液的 80100 目硅藻土。4.3.4 测量与计算电子捕获检测器的线性范围狭窄,为了便于定量, 选择样品进样量使之适合各组分的线性范围。根据样品中六六六、滴滴涕存在形式,相应地制备各组分的标准曲线,从而计算样品中的含量。六六六、滴滴涕及其异构体或代谢物含量按式(1)计算。A11000 X1 = .(1)m1 V2/V1 1000 式中:X1样品中六六六、滴滴涕及其异构体或代谢物的单一含量,mg/kg; A1被测定用样液中六六六或滴滴涕及其异构体或代谢物的单一含量, ng; V1样品净化液体积, ml;V2样液进样体积, l;m1样品质量, g。