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1、食品中大肠菌群食品中大肠菌群 MPN 法结果不确定度的评定法结果不确定度的评定卢春凤卢春凤 邢荣花邢荣花 史方史方 河南出入境检验检疫局技术中心安阳分中心河南出入境检验检疫局技术中心安阳分中心 455000摘要：摘要： 通过分析影响食品中大肠菌群多管发酵法结果的不确定度来源，建立一种简单的大肠菌群多管发酵法不确定度评定方法。结果表明，影响食品中大肠菌群多管发酵法结果不确定度的主要因素为取样量的不确定度、稀释倍数的不确定度、加样体积的不确定度、月桂基硫酸盐胰蛋白胨(LST)肉汤和煌绿乳糖胆盐(BGLB)肉汤管产气比例产生的不确定度，其中后两者产生的不确定度所占分量比较大。关键词：食品；大肠菌群；
2、MPN 法；不确定度1 检验方法检验方法依据GB 4789.3-2010 食品卫生微生物学检验大肠菌群计数中第一法大肠菌群 MPN法进行检验，流程如下：25g 样品+225ml 无菌生理盐水+1ml 稀释过的大肠埃希氏菌液 10 倍系列稀释 LST 肉汤 36oC 培养 48h BGLB 肉汤 36oC 培养 48h 计数产气数，查 MPN 表报告结果。2 各分量的不确定度各分量的不确定度2.1 样品制备称量过程中引入的不确定度（样品制备称量过程中引入的不确定度（A 类）类）无菌条件下用精度为 0.1g 的电子天平称取样品 25.0g，用 250ml 的量筒量取 225ml 无菌生理盐水加入，
3、根据电子天平检定证书给出的最大允差为 0.1，量筒按 JJG196-2006 常用玻璃量器的容量允差为 5ml，由于按级使用的数字式仪表、测量仪器最大允差误差导致的不确定度属于矩形（均匀）分布，则天平和玻璃容器的标准不确定度分别为：（m 样）=0.0577g31 . 0 g（v 样）=1.1547ml30 . 2 ml相应地它们的相对不确定度分别为：U(m 样)= =0.0023样样）（ mm 25gg0577. 0U(v 样)= =0.0051样样）（ vv 225mlg1547. 1则该步产生的相对标准不确定度：U(取样)= =0.005622 m样样VUU220051. 00023. 0
4、2.2 样品稀释过程中引入的不确定度（样品稀释过程中引入的不确定度（A 类）类）样品 10 倍系列梯度稀释采用 1ml 和 10ml 量出式分度吸量管进行。JJG196-2006 常用玻璃量器规定，20oC 时 1ml 和 10ml（B 级）的容量允差分别为0.015 和0.1，取矩形分布，则它们的标准不确定度分别为：（1ml）=0.00866ml3015. 0ml（10ml）=0.05774ml31 . 0 ml相应地它们的相对标准不确定度分别为：U(1ml)= =0.00866mlml 1v1）（ 1ml0.00866mlU(10ml)= =0.005774mlml 10v10）（ 10m
5、l0.05774ml则该步产生的相对不确定度 U(稀释)，可根据普送关于微生物培养产生的不确定度定量测定理论中的公式计算：U(稀释)= 22 )ml10(2)1(2 919)(）（UUml= 10081005774. 000866. 022）（=0.009368样品的 5 稀释方法相同，则 U2(总稀释)=kU2(稀释)，k 为 10 倍系列梯度稀释次数，如第一次取 1ml 样液到 9ml 稀释液中相当于 10 倍，则 k 为 1，以此类推。本次试验为 105倍的MPN 结果，则 k 为 5，则 U(总稀释)= =0.2164)(25稀释U009368. 05 本次试验在 20oC 标准温度的
6、环境中进行，因此，忽略溶液温度与校准时温度不同引起的不确定度。若溶液温度不为标准温度时，则必须考虑温度对量器体积的影响。2.3 样品加样体积的相对标准不确定度（样品加样体积的相对标准不确定度（A 类）类）分别用 1ml 分度吸量管取 1ml 接种于 LST 培养基中（每梯度 3 支） ，其产生的：U(吸取)=U(1ml)=0.008662.4 LST 和和 BGLG 肉汤管产气相对标准不确定度（肉汤管产气相对标准不确定度（A 类）类）同一样品重复测量 10 次，取其平均值作为测量结果。10 次重复测量的结果列入表 O-1 中。表 O-1 给出不确定度评定的全部计算过程。具体计算过程如下：列出测
7、量结果（表 O-1 第 2 列） ；ix取对数，得到对数的平均值为：=4.48572 ；ixlgixlgxlg求残差-；ixlgxlg求残差的平方，得到残差平方和为2=0.017190705)lg(lg101xx ii 合成标准不确定度测量结果为 10 次重复测量的平均值，故平均值的标准不确定度为：()= ()=0.0138206Uxlgsxlg) 110(10017190705. 0表表 O-1 单一样品重复测量的计算过程单一样品重复测量的计算过程序号10-110-210-310-410-5测量结果ixixlg-ixlgxlg（-）2ixlgxlg1231231231231231+-2400
8、04.3802-0.105520.011134472+-460004.66270.176980.031321923+-240004.3802-0.105520.011134474+-240004.3802-0.105520.011134475+-240004.3802-0.105520.011134476+-240004.3802-0.105520.011134477+-240004.3802-0.105520.011134478+-460004.66270.176980.031321929+-240004.3802-0.105520.0111344710+-460004.66270.1769
9、80.03132192平均值306004.485720.0171907052.5 花生酱中大肠菌群的花生酱中大肠菌群的 MPN 值的合成不确定度和扩展不确定度值的合成不确定度和扩展不确定度由上述各相对不确定度合成大肠菌群 MPN 值相对标准不确定度：U(总 MPN)= )lg(2)(2)(2)(2xUUUU加样总稀释取样=22220138206. 000866. 002164. 00056. 0=0.027672.6 扩展不确定度扩展不确定度由于置信概率 p=95%，自由度 v=10-1=9，由 t 分布表可得 k=2.26。于是U95=2.260.02767=0.0625342k)(MPNU
10、总2.7 取得反对数，由取得反对数，由坐标回到坐标回到坐标坐标 xlgx由于与之间的非线性关系，不能直接求扩展不确定度 U 的反对数。因此首先确定xlgx的取值范围为：=4.485720.0625342，或写成xlgxlg4.42318584.5482542xlg取反对数后可得2.61043.5104 x3结果报告结果报告本次实验中对培养基，盐水，试管，吸管，均质袋做了相应的空白验证，以及对无菌室空气做了沉降验证试验，结果皆为零。影响大肠菌群 MPN 值测定结果不确定度的因素很多，本次试验中除了上述不确定度之外，还有样品保存条件、培养基质量、培养条件（温湿度） 、培养时间等方面引起的不确定度。
11、本次试验主要分析样品取样、样品稀释、样品加样体积、肉汤管产气比例对测量不确定度的影响。故本次试验食品中大肠菌群的不确定度报告结果MPN 值即在 2.8104和 3.3104之间。参考文献：参考文献：1微生物分析测量不确定度评定微生物分析测量不确定度评定2 2测量不确定度培训知识测量不确定度培训知识 （中国电子产品可靠性与环境试验研究所）（中国电子产品可靠性与环境试验研究所）3 3食品的菌落数检测结果不确定度之评定食品的菌落数检测结果不确定度之评定 （胡巅（胡巅 丁武丁武 李素芳李素芳 中国卫生检验杂志）中国卫生检验杂志）4 4食品中大肠菌群平板计数结果不确定度的评定食品中大肠菌群平板计数结果不确定度的评定 （凌云（凌云 王李宝王李宝 沈辉沈辉 万夕和万夕和 安全与检测安全与检测 2010 年第年第 5 期）期）5 5GB 4789.3-2010 食品安全国家标准食品安全国家标准 食品微生物学检验食品微生物学检验 大肠菌群计数大肠菌群计数6 6JJF 196-2006 中华人民共和国国家计量检定规程中华人民共和国国家计量检定规程 常用玻璃量器常用玻璃量器
