《大白菜BrWRKY33基因上游调控序列的克隆及其功能研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《大白菜BrWRKY33基因上游调控序列的克隆及其功能研究（6页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、农业生物技术学报，2010年，第18卷，第4期，第670675页 010，8，670究报告 A 白菜荣伟 谢华 姚磊 。马荣才 1首都师范大学生命科学学院，北京100048；2北京农业生物技术研究中心，北京100097 通讯作者，要根据大白菜用Vn)基因组中克隆转录因子基因55 。然后，构建5端缺失突变体，与建植物表达载体。将载体转化拟南芥(，4伦比亚生态型(进行植物组织果表明，上游一I 755315 接种软腐欧文氏菌(不同时期 的植株进行染色，发现该病原菌侵染使转基因植株明病抗性反应中具有一定的作用。 关键词大白菜，游调控序列，转录因子，软腐病 of p 10I：10396967401004
2、007 n 1 755 bp upof V1)of he 55bp to 5 bp an in a in poR 转录调控因子，目前物生物与非生物胁迫应答反应、植物衰亡、种皮、 毛状体及果实发育等一系列的生理过程(et 2003；2007)，含有两个于第1类It(et 2000)，已有研究表明录因子是腐生型真菌抗性所必需的，它能够与(T) T)序列(生特异性作用，调节启 动子中含Wet 2006)；有些也存在W能受上游调控蛋白调控或参与 自身调控(et 2007；002)。 软腐病是多种植物的重要病害，其病原菌主要 03969867401004007 基金项目：本研究由国家高新技术研究发展计(
3、863计划)项目(006转基因生物新品种培育重大专项“抗病虫 关键基因克隆及功能验i(201103和北京市自然科学基金重点项目(151002)共同资助 收稿日期：20090407 接受日期：20090505 大白菜of p括胡萝卜欧文氏菌(菊欧文氏 菌(et 19811。 细菌性软腐病是大白菜的主要病害(远方等， 2004)。本实验室曾利用所构建的大白菜行研究发现，大白菜在受到软腐欧文氏菌侵染时， 转录因子基因松贺， 2006)。在此基础上，本研究根据大白菜大白菜中分离其上游调 控序列，并构建上游序列缺失突变体，转化拟南芥， 分析腐病抗性反应中的作用。 1结果与分析 11大白菜先根据已公开的大
4、白菜基因组序列和本实验 室已获得的用中扩增55 ，然后在网上分析这一序列所包含的重要顺式作 用元件(goet 1999)(表1)。 表1 列 中除了包含丰富的顺式作用元件。它们参与各种应答 反应，一1 755315 顺式元件et 2003)，达元件no et 2000)，与干旱诱导有关的et 2000；et 2003)， W002；et 2005；et 2008)，植物号 12两种不同长度中的表达 利用位于一315 反向引物扩增基因组获得长度为315 缺失突变区域含有花粉特异表达顺 式作用元件 克隆的长度为1 755 029载体连接构建表达载 体。转化拟南芥后，筛选拟南芥转基因阳性植株，繁 殖
5、到T 代，在含卡那霉素50 筛选，无性状分离，每个株系挑选4个植株，小量 提取阳性植 株播于含卡那霉素50 的12 ，生长12 后将 一部分阳性植株移栽土中温室培养，待苗长到45 d 时取其叶片、花、根进行图1所示， 色效果好，可用 作对照，12 基因植株子叶叶片外缘 和根部显示时、真叶、根部均显示色较深。45 基因阳性植株染色较弱，性植株的叶脉、雌蕊的柱头、花萼、根均显示蓝色。 13接种软腐病菌2显示，接种 株叶片 比未接种的染色深，说明接种后，；转 株系接种2、6 种6 h 的叶片现象明显，接种部位比未接种部位显示更深 的蓝色，且抽真空染色后2 h，叶片未接种部位仍为 绿色，接种部位显示蓝
6、色。 2讨论 拟南芥和大白菜同属于十字花科，所以利用转 基因拟南芥研究很大程度上能够反映该基因在大白菜中的功能。 拟南芥转B33高于株(图1)，这可能与一1 755_315含 有大量的W个W在一1 755一315区域：一1 742、一1 734、一1 704、一1 496、 一1 397、一998、一325，且一1 742_1 704是W。对拟南芥A 负调控元件(002)。本实验 明负调控作用。拟南芥转 现出了更强的断起始 密码子上游一3 1 5 的基本元件，如1)。 对拟南芥基因 与植物对腐生真菌病害的抗性相关(et 2006)。本研究表明，拟南芥叶片接种 株接种的叶片比未接种的叶片显示更深 的蓝色说明接种后诱导转基因植株70 农业生物技术学报 u 厶 1 csacting
