《重组胰蛋白酶最适ph和ph稳定性》由会员分享，可在线阅读，更多相关《重组胰蛋白酶最适ph和ph稳定性（2页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、上海雅心生物技术有限公司 电话：021-54336592上海雅心生物技术有限公司 电话：021-54336592 地址： 上海市徐汇区银都路 466 号 1 号楼 106 室 网址： http:/ 邮箱： Z重组胰蛋白酶最适重组胰蛋白酶最适 PH 和和 PH 稳定性稳定性样品：重组胰蛋白酶，比活 4500USP u/mg pro.，上海雅心生物技术有限公司，纯度如图 1 所示。BAEE，Sigma.图 1. 重组胰蛋白酶的纯度的 SDS-PAGE 鉴定1.最适最适 pH 的研究的研究准备 pH 为 312 的底物 BAEE（0.25mM） ，分别测定 rPT 纯酶液的活性，最后结果表示为测定数
2、值占最高酶活的百分比。缓冲液成分依次为 25mMNaAc-HAc (pH 36)，25mM Tris-HCl (pH 78)，25mM Gly-NaOH(pH 912)，所有缓冲液均为 25下配制。底物在 25温浴 10 分钟后，开始测活。2. pH 稳定性的研究稳定性的研究取活性为 10mg/ml 纯酶液，分别在 pH 312 缓冲液中稀释 10 倍，在 25下温浴 2h，取样品测定酶活，以水浴前酶液初始活性作为 100%，计算残余活性。缓冲液依次为 25mM NaAc-HAc (pH 36)，25mM Tris-HCl (pH 78)，25mMGly-NaOH (pH 912)，所有缓冲液
3、均为 25下配制。上海雅心生物技术有限公司 电话：021-54336592上海雅心生物技术有限公司 电话：021-54336592 地址： 上海市徐汇区银都路 466 号 1 号楼 106 室 网址： http:/ 邮箱： Z图图2. a, RPT最适最适pH曲线；曲线； b, RPT的的pH稳定性稳定性分别在pH 3.012.0不同的pH条件下，测定rPT活性。结果见上图2a，最适pH范围是711， 而pH为9.0时测得rPT活性为最大值， 这与天然提取的猪胰酶不同 （天然胰酶最适pH为7.6-9.0） ，几乎接近极值，确定该值为测活最适条件，但是底物在碱性条件易降解，所以底物尽量要现用现配
4、。分析不同pH环境对RPT 活性的影响， 如图 2b所示， rPT在pH 3.0 NaAc-HAc缓冲液里最为稳定。随着 pH 的升高，RPT 酶活的损失程度也随之提高。在测定rPT 最适 pH 值时发现，pH5 底物条件下，RPT 蛋白几乎无活性，如图 2a 所示。而图 1b 所示， 在 pH5 的缓冲液中， 2 小时后依然保持较高的活性。 说明在 pH5，RPT 稳定，自降解的速率大大降低，酶分子处于相对稳定的状态。此时把酶液转入到 pH 7.6 的测活体系中，此时酶分子的构象瞬间发生变化，重新暴露出活性位点， 于是又恢复了活性。 此外， RPT 对碱性环境有一定时间的耐受性， 在 pH10 环境中，活性损失非常快。
