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1、 1 http:/ Email: . Tel: (021) 69839301 Fax: (021) 69839302 Cat No.EM017 小鼠小鼠 Insulin ELISA 试剂盒试剂盒 尊敬的客户，感谢你选用本公司的产品。本产品适用于体外定量检测小鼠血清、血浆、组织或细胞培养上 清液中天然和重组的Insulin浓度。检测其他特殊样本请咨询本公司技术支持。使用前请仔细阅读说明书并检查试 剂盒组分胰岛素是由胰岛 细胞受内源性或外源性物质如葡萄糖、乳糖、核糖、精氨酸、。 仅供科研使用，不适用于临床诊断仅供科研使用，不适用于临床诊断。 如有疑问，请联系依科赛生物制品有限公司。 简介：简介：
2、胰高血糖素等的刺激而分泌 的一种蛋白质激素。由 A、B 链组成，共含 51 个氨基酸残基。能增强细胞对葡萄糖的摄取利用，对蛋白质及脂 质代谢有促进合成的作用。胰岛素是机体内唯一降低血糖的激素，也是唯一同时促进糖原、脂肪、蛋白质合成的 激素。 检测原理检测原理: 本实验采用双抗体夹心ELISA法。抗小鼠Insulin单抗包被于酶标板上，同时加入标本、标准品和生物素化的 抗小鼠Insulin抗体，标本、标准品中的Insulin会与加入于孔中的生物素化的抗小鼠Insulin抗体及包被于酶标板上 的单抗结合，形成免疫复合物，游离的成分被洗去；加入辣根过氧化物酶标记的亲合素，亲合素与生物素特异性 结合，
3、游离的成分被洗去。加入显色底物（显色剂） ，若反应孔中有Insulin，辣根过氧化物酶会使无色的显色剂 变蓝，加终止液变黄。在450nm处测OD值，Insulin浓度与OD450值之间呈正相关，可通过绘制标准曲线求出标 本中Insulin浓度。 检测原理示意图：检测原理示意图： 2 http:/ Email: . Tel: (021) 69839301 Fax: (021) 69839302 试剂盒组成试剂盒组成: 名称 96 Tests 48 Tests 保存条件 1抗体包被板条 (Miceowell Plate) 812 86 4 2标准品系列 (Standard) 6 支（200ul/支
4、） 6 支（100ul/支） 4 3浓缩生物素化抗体 100 (Biotin-Conjugate) 1 支 (120ul/支) 1 支 (60ul/支) 4 4浓缩酶结合物 100 (Streptavidin-HRP) 1 支 (120ul/支) 1 支 (60ul/支) 4(避光) 5试剂稀释液 (Assay Diluent) 1 瓶（25ml/瓶） 1 瓶（25ml/瓶） 4 6浓缩洗涤液 20 (Wash Buffer Concentrate) 1 瓶（30ml/瓶） 1 瓶（30ml/瓶） 4 7显色剂 (Substrate Solution) 1 瓶（12ml/瓶 ） 1 瓶（6ml
5、/瓶 ） 4(避光) 8终止液 (Stop Solution) 1 瓶（12ml/瓶） 1 瓶（12ml/瓶） 4 9封板胶纸 2 张 2 张 10说明书 1 份 1 份 试验所需自试验所需自备试验器材备试验器材: 1. 酶标仪(450nm检测波长滤光片，570nm或630nm校正波长滤光片) 2. 高精度加液器及一次性吸头：0.5-10ul, 2-20ul,20-200ul,200-1000ul 3. 微孔板振荡器, 双蒸水或去离子水，坐标纸。 标本收集标本收集: 1. 收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。 2. 血浆抗凝剂推荐使用EDTA。避免使用溶血，高血脂标本。 3. 标本
6、应清澈透明，悬浮物应离心去除。 4. 标本收集后若不及时检测，需按一次使用量分装，冻存于-20或-70电冰箱内，避免反复冻融。 5. 可根据标本的实际情况，做适当倍数稀释(建议做预实验，以确定稀释倍数) 。 注：注： 血清或血浆样本血清或血浆样本一般不需要稀释一般不需要稀释，若样本含量若样本含量6.0ug/L时，时，建议建议用试剂稀释液将血清或血浆样本用试剂稀释液将血清或血浆样本做做1:10 （V/V，即，即5ul样本样本+45ul试剂稀释液）试剂稀释液）稀释后检测。计算样本含量时应乘以稀释倍数稀释后检测。计算样本含量时应乘以稀释倍数（10）。 注意事项注意事项: 1. 试剂盒使用前请保存在2
7、-8。除复溶后的标准品，其他成分不可冻结。 2. 标准品，浓缩酶标记抗体体积小，运输中颠簸和可能的倒置，会使液体沾到管壁或瓶盖。因此使用前请用手甩 几下或1000rpm离心1分钟，以使附着管壁或瓶盖的液体沉积到管底。 3. 从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶，属于正常现象，微加热至40使结晶完全溶解后再配制洗涤液。 4. 不同批号的试剂盒组份不能混用（洗涤液和反应终止液除外）。 5. 充分轻微混匀对反应结果尤为重要，最好使用微量振荡器(使用最低频率)，如无微量振荡器，可在反应前手工 轻轻晃动酶标板，使加入孔中的反应液混匀。 6. 酶免试验中标准品和样本检测时建议作复孔。 检测前准备工作检测前准
8、备工作: 1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，以平衡至室温。 2. 将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:20)。未用完的放回4。 3. 试剂盒的标准品由6个不同浓度的溶液组成，它们的浓度分别是：6.0、3、1.5、0.75、0.38、0.19和 0 ug/L。 3 http:/ Email: . Tel: (021) 69839301 Fax: (021) 69839302 4. 生物素化抗体工作液：按当次试验所需用量，用试剂稀释液稀释浓缩生物素化抗体(1:100)配置成生物素化抗 体工作液。使用前30分钟准备。仅供当日使用。 5. 酶结合物工作液：按当次试验所需要用量，用试剂稀释液稀释浓缩酶结
9、合物(1:100)配置成酶结合物工作液。 使用前30分钟准备。仅供当日使用。 洗涤方法洗涤方法: 1自动洗板机：要求注入的洗涤液为350ul，注入与吸出间隔2030秒。洗板5次。 2手工洗板：每孔加洗涤液350ul，静置10秒后甩尽孔内液体，在厚迭吸水纸上拍干。洗板5次。 操作步骤操作步骤: 1从已平衡至室温的密封袋中取出试验所需板条，未用的板条和干燥剂请放回铝箔袋内封存于4。 2留空白孔（若使用双波长读板，空白孔可以不设）。 3提前准备好样本、标准品和生物素化抗体工作液。 4先将不同浓度标准品分别加入相应孔中，20ul/孔孔；在每个样本孔中加入20ul样本；随后在样本和标准品孔中 加入100
10、ul生物素化抗体工作液，用封板胶纸封住反应孔。 5室温（2025）孵育60分钟。最好使用微量振荡器(100200rpm)。 6提前30分钟制备酶结合物工作液。室温避光放置。 7洗板5次。 8除空白孔外，加入酶结合物工作液(100ul/孔)。用封板胶纸封住反应孔。 9室温（2025），孵育60分钟。最好使用微量振荡器(100200rpm)。 10洗板5次。 11加入显色底物（包括空白孔）100ul/孔，室温（2025），避光孵育15分钟。 12加入终止液（包括空白孔）100ul/孔，混匀后即刻测量OD450值(10分钟内)。 结果结果判断判断: 1每个标准品和标本的OD值应减去零孔的OD值。（若
11、不减零孔值，标准曲线的零孔应相交于Y轴） 2手工绘制标准曲线。以标准品浓度作横坐标，OD值作纵坐标，以平滑线连接各标准品的坐标点。通过标本 的OD值可在标准曲线上查出其浓度。 3. 若标本OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。 Standard OD 6 2.752 3 1.828 1.5 1.015 0.75 0.458 0.38 0.215 0.19 0.12 0 0.068 注意：本图仅供参考，应以同次试验标准品所绘标准曲线计算标本含量。 4 http:/ Email: . Tel: (021) 69839301 Fax: (021) 69839302 灵敏度，特异性和重复性灵敏度，特异性和重复性: 1灵敏度：最小可测小鼠 Insulin达0.1ug/L。 2特异性：不与IL-1,2,3,4,5,6,8,10,12,IFN,TNF,VEGF,TGF及ICAM等反应；与人、大鼠、猪、羊及牛 Insulin的交叉反应分别是195%、146%、628%、256%和110%。 3重复性：板内、板间变异系数均10%。 ZCBCBZAB
