《小叶女贞对免疫功能损伤小鼠T淋巴细胞免疫功能的调节作用》由会员分享，可在线阅读，更多相关《小叶女贞对免疫功能损伤小鼠T淋巴细胞免疫功能的调节作用（8页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、1小叶女贞对免疫功能损伤小鼠 T 淋巴细胞免疫功能的调节作用作者：韩兆东 阮月芹 宋月雁 侯佃臻 孙丰润 孔祥华 【摘要 】 研究小叶女贞对免疫功能损伤小鼠 T 淋巴细胞免疫功能的调节作用。方法 以免疫功能损伤小鼠为研究对象，将实验鼠随机分为 5 组，每组 12 只，分别为生理盐水（NS）对照组、环磷酰胺（Cy）对照组、Cy+ 小叶女贞水煎液（小剂量）组、Cy+小叶女贞水煎液（大剂量）组、Cy+女贞子水煎液组。利用流式细胞仪检测实验鼠外周血 T 淋巴细胞（CD4+、CD8+）的百分率，计算CD4+/ CD8+比值，用全自动酶标仪检测外周血 IL2 的含量。结果 小叶女贞小剂量组和大剂量组 CD
2、4+T 细胞、CD4+/ CD8+、IL2 的含量分别与环磷酰胺组比较均明显增高，有显著性差异（P0.01） ；与生理盐水对照组比较，小剂量组无显著性差异（P 0.05） 、大剂量组明显增高，有显著性差异（P0.01） ；与女贞子对照组比较，小剂量组结果低，有显著性差异（P0.01） 、大剂量组无显著性差异（P0.05） 。结论 小叶女贞能使小鼠受损伤的免疫功能得到改善, 能提高 CD4+T 细胞的数量和 IL2 含量，对免疫功能的调节作用与剂量成正相关。小叶女贞对 T 淋巴细胞免疫功能的调节机制是促进 T 淋巴细胞分化、发育为成熟的 CD4+T 细胞，达到调节机体细胞免疫功能的作用。 2【关
3、键词】 小叶女贞 小鼠 免疫功能损伤 T 淋巴细胞免疫功能 调节作用 【Abstract】 Objective To explore the modulation effect and mechanism of ligustrum quihoui carr(LQC) on the immune function of T lymphocytes in mouse whose immune function was damaged.Methods Mice with impaired immune function were experimental animal ,and divided in
4、to five groups randomly,twelve mice in every group,the decoction of LQC acted as experimental sample ,using the Cyclophosphamide and 0.9% NaCl as the positive comparison sample and negative comparison sample respectively, LQC minor dose,major dose,and fructus ligustri lucidi,adding Cyclophosphamide
5、respectively,The percentage of T lymphocytes（CD4+、CD8+） in the peripheral blood of the experimental mice was detected by flow cytometer , then calculated the ratio of CD4+ to CD8+,the content of IL2 in the peripheral blood is examined by Denley.Results Contrast minor dose group and major dose group
6、with Cyclophosphamide group respectively , the result was that the content of CD4+T cell CD4+/CD8+ IL2 all improved dramatically ,with significant difference (P0.01).When drawing a parallel between 0.9% NaCl and minor dose group 3,there was no significant difference (P0.05).But when compared with th
7、e major dose group,there was significant difference between them(P0.01). Compared with fructus ligustri lucidi , in the minor dose group ,the curative effect was worse ,there was significant difference (P0.01). But in major dose group ,there was no significant difference between them (P0.05). Conclu
8、sion The immune function of the damaged mice were improved by LQC,which also could increase the quantity of CD4+T cell and the content of IL2. The dose of LQC was positively correlated with the modulation effect of LQC on the immune function.The mechanism of regulation of LQC on the immune function
9、of T lymphocytes could be realized by promoting the differentiation of T lymphocytes and developing to be mature CD4+ T cells ,so that it can regulate the cell immune function of body. 【Key words】 ligustrum quihoui carr ( LQC)，mouse，impaired immune function，immune function of T lymphocytes，modulatio
10、n effect 小叶女贞又叫小白蜡，为木犀科女贞属植物小叶女贞（ligustrum quihoui carr，LQC) 的果实1 ，性凉、味苦，和女贞子属于同科同属植物。初步研究2，3 表明，小叶女贞可使4ConA 激发的 T 淋巴细胞增殖反应明显增强,对细胞因子 IL2 有促进作用，能促进 IL1 的分泌，调节骨髓造血功能。但小叶女贞对免疫功能损伤动物的免疫调节作用未见报道。我们以免疫功能损伤小鼠为研究对象，以小叶女贞的水煎液为实验样品，以女贞子的水煎液和生理盐水为阳性对照品和阴性对照品，利用流式细胞仪检测实验小鼠外周血 T 淋巴细胞（CD4+、CD8+）的百分率，计算CD4+/ CD8+
11、比值，用全自动酶标仪检测 IL2 的含量。研究在病理状态下，小叶女贞对小鼠 T 淋巴细胞免疫功能的调节作用及机制，为进一步开发、利用小叶女贞提供理论依据。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1. 1 药品和试剂：小叶女贞和女贞子（由滨州医学院附属医院中药房提供） ，环磷酰胺（购于滨州医学院附属医院西药房） 。Rat荧光单克隆抗体 CD3PC5，CD4PE ，CD8FITC ；同型对照IgG2aPE、IgG2aFITC 购于美国 CALTAG Laboratories 公司。全血溶血试剂购自美国 Coulter 公司。IL2 试剂盒购于深圳晶美生物工程有限公司。 1.1.2 动物：健康 BALB
12、/C 小鼠 60 只，体重 1822 g，雌雄不限，购于北京医科大学实验动物中心。 1.1.3 仪器： FC500 大型流式细胞仪、QPREP 溶血制备仪均为美国贝克曼库尔特公司生产，Denley 全自动酶标仪。 1.2 方法 51.2.1 样品制备：取小叶女贞或女贞子 400 g，加蒸馏水 2 500 ml 浸泡 2 h,水煎，煮沸 30 min,过滤，药渣加水 1 000 ml，二次水煎，取滤液（压渣） ，合并水煎液，浓缩成 400 ml，即为样品水煎液。 1.2.2 动物分组：将小鼠随机分为 5 组，每组 12 只。组为生理盐水（NS）对照组，NS 0.2 ml/d, 皮下注射，共 10
13、 d，第 8 日起用 NS 灌胃， 0.2 ml/（d只） ，共 7 d。组环磷酰胺（Cy）对照组，Cy 0.8 ml/d，皮下注射20 mg/（kgd） ，共 10 d，第 8 日起用 NS 灌胃同 组。 组为 Cy+小叶女贞水煎液组（小剂量） ，注射 Cy 同组，第 8 日起胃饲小叶女贞水煎液 0.2 ml/（d 只） ，共 7 d。组为 Cy+小叶女贞水煎液（大剂量）组，注射 Cy 同组，第 8 日起胃饲小叶女贞水煎液 0.4 ml/（ d只） ，共 7 d。组为Cy+女贞子水煎液组，注射 Cy 同组，第 8 日起胃饲女贞子水煎液 0.2 ml/（d只） ，共 7 d。 1.2.3 标本
14、采集及处理：所有受试小鼠均摘取眼球取外周血，分别置于含 EDTAK2 防凝管和小塑料管中，室温保存，在 12 h 内检测分析。 1.2.4 流式细胞仪分析：首先用 Flowcheck 进行光路和流路校准，使所有荧光信号 CV2%。在标有同型对照的试管中分别加入 CD3PC5 单克隆抗体和 IgG2aFITC 和 IgG2aPE 同型对照试剂各 5 l,再加入正常小鼠 K2EDTA 防凝血 100 l（5105 cells）混匀，室温避光 15min 后，在标本制备仪上溶血、固定上6机。以前向散射光（FSC）及侧向散射光（SSC）设门（A）于淋巴细胞群（图 1） ，以 CD3PC5 及 SSC
15、设门（H ）于 CD3+细胞(图2)，调节电压使同型对照细胞位于阴性区（图 3、4） 。在标有CD4、CD8 的试管中分别加入 CD3PC5 和 CD4PE 及CD8FITC 单克隆抗体各 5 l，分别加入各实验小鼠 K2EDTA 防凝血 100 l（5105 cells）混匀，室温避光 15 min 后，在标本制备仪上溶血、固定上机，调节颜色补偿，分析各组每一实验小鼠CD4+、CD8+细胞的百分率。计算 CD4+/CD8+比值。 1.2.5 IL2 的测定：严格按试剂盒说明书进行操作，全自动酶标仪定量测定小鼠外周血 IL2 含量。 2 结果 2.1 实验各组 CD4+、CD8+、CD4+/C
16、D8+ 、IL2 测定结果见表 1。 表 1 小叶女贞对免疫功能损伤小鼠 T 淋巴细胞和 IL2 的作用 注：*示分别与环磷酰胺组、高剂量组、女贞子组比较，P 0.01；与盐水对照组比较，P0.05。 #示分别与环磷酰胺组、低剂量组、盐水对照组比较，P0.01；与女贞子组比较，P0.05。 各组指标检测结果经统计学处理，CD4+T 细胞数、CD4+/ CD8+比值、IL2 的五组均数方差分析分别为F=23.6、F=19.8、F=40.6，P 均0.01，有统计学意义。 2.2 流式细胞仪检测实验鼠 CD4+、CD8+结果 小叶女贞小剂量组（图 5） ，小叶女贞大剂量组（图 6） 。 7图 5 图 6 3 讨论 本实验以免疫功能损伤小鼠为研究对象，以小叶女贞的水煎液为实验样品，以女贞子的水煎液和生理盐水为阳性对照品和阴性对照品，研究了小叶女贞对免疫功能损
