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1、 毕业论文（设计）题 目 学 院 学 院 专 业 学生姓名 学 号 年级 级 指导教师 教务处制表二一三 年 三月 二十 日口腔医学毕业论文范文本团队专业从事口腔医学论文写作与论文发表服务，擅长案例分析、数据统计、图表绘制以及口腔医学相关理论分析等。专科本科论文 300 起，具体价格可咨询客服【论文伍老师 Q Q: 300-409-83】口腔医学论文题目：复发性口腔溃疡口腔微生态的研究【论文主要内容】：研究背景、目的和意义复发性口腔溃疡(Recurrent Oral Ulcer,ROU),又称“复发性口疮” 、 “复发性阿弗他溃疡”(Recurrent Aphthous Ulcer,RAU)或
2、“复发性阿弗他口炎”(Recurrent Aphthous Stomatitis,RAS),是专指一类原因不明,具有周期性反复发作但又具自限性的局限性口腔粘膜溃疡性损伤。该病是口腔粘膜病中最常见的溃疡类疾病,患病率高达 20%左右,居口腔粘膜病首位。复发性口腔溃疡发病时病变部疼痛剧烈,对患者工作与生活造成重要影响。临床尚无明确有效的治疗方法。因此,ROU 的病因及发病机制研究对进一步的临床治疗研究具有重要作用。本病病因至今不清,多方面的病因研究表明,ROU 的发生发展可能与多种因素有关。国内外文献已报道的病因方面的研究包括免疫学异常,病毒、细菌感染,微量元素、精神神经因素、遗传因素影响及微循环
3、障碍等,但尚无确切定论。正常人体的口腔、肠道、呼吸道、泌尿生殖道等,均定植一定数量的细菌,它们与宿主在长期进化过程中形成了一个能独立进行物质、能量交流的动态平衡的微生态系统。定居于口腔中的菌群称为口腔正常菌群,它与宿主呈共栖的关系,他们彼此之间保持着动态平衡,对宿主起着有益和有害的双重作用。口腔中的细菌,在正常情况下对宿主有多种有益的生理作用:如抵抗外来致病菌、产生多种营养物质、促进免疫应答、产生过氧化物歧化酶(SOD)、清除自由基(O_2-)及抗肿瘤等作用。一旦微生态平衡遭到破坏,发生菌群失调,上述生理作用发生改变,对宿主可能造成损伤。有学者提出 ROU 的发生发展可能与多因素相互作用有关。
4、多方面的病因研究表明,ROU 的发生发展可能与多种因素有关。口腔内环境与这些因素有着密切的关系。那么,ROU 的发生发展是否与口腔的微生态相关呢?ROU 患者口腔微生态是否发生了变化?又是哪些方面发生变化?本研究将从口腔菌群变化及口腔菌群构成的角度,探讨复发性口腔溃疡是否与口腔微生态变化有关,为口腔溃疡的防治探索新的依据。材料和方法一、唾液菌群涂片观察收集临床唾液标本共 62 例。将其分为溃疡组、愈合组及正常对照组三组。溃疡组为临床确诊并处于溃疡期的20 例 ROU 患者,其中男性 6 例,女性 14 例,平均年龄 24.73.13 岁;愈合组为临床确诊并处于愈合期的 21 例 ROU 患者,
5、其中男性 9 例,女性 12 例,平均年龄25.96.67 岁;对照组为无 ROU 病史的 21 位健康成年人,其中男性 9 例,女性 12例,平均年龄 23.32.27 岁。所有受试者均符合以下纳入标准:所有受检查者取样前 1 周内未服用任何抗生素、铋剂、抗酸剂及 H_2 受体拮抗剂,1 月内未服用类固醇药物或非类固醇类抗炎药,如阿司匹林等;无其他系统疾病;无其他口腔黏膜病:无中、重度牙周病。方法:唾液标本直接涂片,革兰氏染色,在显微镜10100 油镜下,选取分布均匀的 5 个视野,分别计数各视野下细菌中革兰氏阳性球菌(简称 G+c)、革兰氏阴性球菌(简称 G-c)、革兰氏阳性杆菌(简称 G
6、+b)、革兰氏阴性杆菌(简称 G-b)所占的构成比,然后求其均值。分析了不同菌群间的比值及构成比的变化。统计学分析:用 SPSS13.0 统计学软件,对不同组别四类细菌的构成比及不同菌群间的比值采用单因素方差分析(One-way ANOVA),采用Dunnett T3 法进行两两比较,以 P0.05 为差异有统计学意义。二、复发性口腔溃疡口腔唾液中链球菌、韦荣氏菌及奈瑟氏菌的定量分析收集符合纳入标准的临床标本,共 95 例。纳入标准参考第一章。将其分为溃疡组、愈合组及正常对照组三组。溃疡组为临床确诊并处于溃疡期的 39 例 ROU 患者,其中男性 13 例,女性26 例,平均年龄 26.37.
7、76 岁;愈合组为临床确诊并处于愈合期的 35 例 ROU 患者,其中男性 11 例,女性 24 例,平均年龄 25.35.47 岁;对照组为无 ROU 病史的21 位健康成年人,其中男性 9 例,女性 12 例,平均年龄 23.32.27 岁。方法:用引物设计软件 Primerprimer 5.0 设计三种常见口腔细菌(链球菌、韦荣氏菌及奈瑟氏菌)16S rRNA 基因扩增引物,并验证其特异性;采用改良 CTAB/NaCl 法提取细菌标本 DNA;通过实时荧光定量 PCR 检测链球菌、韦荣氏菌及奈瑟氏菌三种常见口腔细菌的含量。统计学分析:用 SPSS13.0 统计学软件,对不同组别三种细菌的
8、含量采用单向方差分析(One-way ANOVA),采用 Dunnett T3 法进行两两比较,以P0.05 为差异有统计学意义。三、基于细菌 16S rRNA 基因分析的复发性口腔溃疡口腔细菌构成差异分析分别收集符合纳入标准的唾液标本 30 例,纳入标准参考第一章。将其分为溃疡组、愈合组及正常对照组三组,每组 10 例。溃疡组为临床确诊并处于溃疡期的 ROU 患者;愈合组为临床确诊并处于愈合期的 ROU 患者;对照组为无 ROU 病史的健康成年人。方法:采用改良 CTAB/NaCl 法提取细菌标本DNA,并且制备成混合标本。用细菌 16S rRNA 通用引物扩增混合标本,琼脂糖凝胶电泳,用
9、AlphaEaseFCStand Alone 软件行凝胶图像分析。选择回收纯化差异较明显的条带,测定片段序列并在 GenBank 中比对,分析差异条带的种属源性。实验结果一、唾液菌群涂片观察溃疡组、愈合组及对照组 G+c 构成比分别为:45.166.99、43.386.92 及 42.964.69;G+b 构成比分别为:3.953.12、3.041.38 及 2.651.71;G-b 构成比分别为:4.942.43、3.792.16 及 4.352.96。溃疡组、愈合组及对照组 G+c、G+b及 G-b 构成比差异无统计学意义(P=0.499、P=0.160、P=0.352)。溃疡组、愈合组及
10、对照组 G-c 构成比分别为:45.945.42、49.796.22 及 50.094.65;三组间 G-c 构成比差异具有显著性(P=0.032);溃疡组 G-c 构成比较愈合组及对照组分别下降了 3.85 及 4.15 个百分点。溃疡组、愈合组及对照组球菌构成比均在90%以上,三组总球菌的构成比分别为:91.104.83、93.172.57 及93.054.38;总杆菌的构成比分别为:8.894.83、6.832.57 及 7.004.37。溃疡组、愈合组及对照组总球菌及总杆菌构成比差异均无统计学意义(P=0.193、P=0.201)。溃疡组、愈合组及对照组 G+c/G-c 比值分别为:1
11、.000.26、0.900.26 及 0.870.16;G+b/G-b 比值分别为:0.830.45、1.131.01 及 0.640.30;G+c/G+b 比值分别为:17.5113.55、18.0811.02 及 24.2015.93;G-c/G-b 比值分别为:12.237.14、17.7712.10 及 15.347.90。三组间 G+c/G-c、G+c/G+b及 G-c/G-b 差异均无统计学意义(P=0.140、P=0.224、P=0.172),G+b/G-b 在三组间存在差异,P=0.063。溃疡组、愈合组及对照组 G+c/(G+c+G+b)构成比分别为:0.920.07、0.9
12、30.03、0.940.04;G+b/(G+c+G+b)构成比分别为:0.080.07、0.070.03、0.060.04;G-c/(G-c+G-b)构成比分别为:0.900.04、0.930.04、0.920.05;G-b/(G-c+G-b)构成比分别为:0.100.04、0.070.04、0.080.05;G+c/(G+c+G-c)构成比分别为:0.490.06、0.470.07、0.460.04;G-c/(G+c+G-c)构成比分别为:0.510.06、0.530.07、0.540.04;G+b/(G+b+G-b)构成比分别为:0.430.11、0.460.18、0.370.10;G-b
13、/(G+b+G-b)构成比分别为:0.570.11、0.540.18、0.630.10。三组间 G+c/(G+c+G+b)、G+b/(G+c+G+b)、G-c/(G-c+G-b)、G-b/(G-c+G-b)、G+c/(G+c+G-c)、G-c/(G+c+G-c)、G+b/(G+b+G-b)、G-b/(G+b+G-b)构成比差异均无统计学意义(P=0.302、P=0.302、P=0.162、P=0.162、P=0.166、P=0.166、P=0.117、P=0.117)。溃疡组、愈合组及对照组 G+/G-比值分别为:0.990.25、0.900.26、0.850.16;Gc/Gb 比值分别为:1
14、3.858.53、15.736.60、17.859.88。三组间 G+/G-、Gc/Gb 差异均无统计学意义(P=0.130、P=0.323)。二、复发性口腔溃疡口腔唾液中链球菌、韦荣氏菌及奈瑟氏菌的定量分析溃疡组链球菌及韦荣氏菌含量的对数值分别为7.300.89 和 8.290.77,均显著低于对照组(8.150.55 和8.930.76,P0.01),链球菌及韦荣氏菌含量分别较对照组降低了 66%和 86%;溃疡组与愈合组间链球菌及韦荣氏菌的含量的对数值差异均无统计学意义(P=0.64、P=0.17);愈合组链球菌含量的对数值为 7.510.81,显著低于对照组(8.150.55,P0.0
15、1),菌量较对照组降低 67%,愈合组与对照组间韦荣氏菌含量的对数值差异统计结果 P=0.056;奈瑟氏菌含量的对数值在三组间的差异均无统计学意义(P=0.921)。三、基于细菌 16S rRNA 基因分析的复发性口腔溃疡口腔细菌构成差异分析在 200-800bp 区间,于溃疡组、愈合组及对照组均稳定识别出 3条碱基数分别为 230bp、400bp 及 770bp 左右的三条条带。溃疡组、愈合组及对照组三条条带灰度值的百分比有差异。在溃疡组、愈合组及对照组条带组成方面存在差异,各组在不同位置均有条带缺失现象。条带综合波形图也反映了溃疡组、愈合组及对照组在条带含量构成方面存在差异。选择回收纯化片段暂命名为 1 号,片段大小约为 180bp。测序结果通过生物信息学分析。1 号 blast 比对结果示 1 号差异条带 70%与 GenBank 中 Bacteroides vulqatus ATCC 8482 同源,匹配率74%。结
